一种快速检测果蔬中百菌清的比色方法

本技术涉及一种快速检测果蔬中百菌清的比色方法，属于农药快速检测。

背景技术：

1、百菌清是一种广谱保护性杀菌剂，被广泛应用于防治果树、蔬菜菜叶上多种害虫，也用作工业防霉剂、水果保鲜剂。据统计，百菌清的需求量逐年增长，2016年百菌清全球需求量为4.9万吨，年复合增速达到6.1％，预计2025年百菌清全球消费量有望增至7.2万吨。

2、百菌清没有内吸传导作用，喷到植物体上之后，能在体表上有良好的黏着性，不易被雨水冲刷掉，因此药效期较长，残效期一般7-10天。有毒理试验表明，百菌清具有诱导细胞发生突变的作用，并且能在一定的剂量条件下诱导小鼠骨髓淋巴细胞姊妹染色单体发生交换。同时百菌清对鱼类和两栖动物也具有很大的毒性，是一种能使水生生物、两栖动物和植物细胞发生遗传性突变的化学物质，对人体有一定的致敏作用。2017年，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，百菌清在2b类致癌物清单中。

3、果蔬中百菌清的残留将对人体健康造成危害，因此有必要对其进行检测。目前已建立的检测方法主要为大型仪器检测方法，包括气相色谱、高效液相色谱，气相色谱-质谱联用等。然而，上述方法往往需要繁琐的样品前处理，专业技术性高，检测成本高，且检测过程复杂，时间长。因此，开发一种果蔬样品中百菌清农药残留的快速、直观且成本低廉的检测方法是十分有必要的。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种利用基于比色原理快速检测百菌清的方法，该方法稳定性好，灵敏度高，能够满足果蔬样品中百菌清农药现场快速检测的需求。

2、根据本技术的一个方面，提供了一种快速检测果蔬中百菌清的比色方法，所述比色方法至少包括以下步骤：

3、(1)样品提取：将果蔬样品加入水搓洗果蔬表皮，得到待测液；

4、(2)检测：向待测液中加入百菌清检测比色试剂混合，加热，再加入吸附剂，震荡、静置，倒掉上清液，保留沉淀物；

5、(3)比色：观察沉淀物颜色，与百菌清标准比色卡相对照，判定果蔬样品中百菌清的残留量；

6、所述百菌清检测比色试剂为含有四丁基氢氧化铵、邻二硝基苯、对硝基苯甲醛的混合物；

7、所述吸附剂为改性的壳聚糖。

8、可选地，所述改性的壳聚糖的制备方法包括：将含有壳聚糖、乙二醇二缩水甘油醚、十二烷基磺酸钠、十四烷基二甲基叔胺的混合物，反应，离心，得到改性的壳聚糖。

9、可选地，所述壳聚糖、乙二醇二缩水甘油醚、十二烷基磺酸钠、十四烷基二甲基叔胺的质量比为1：1～3：0.05～0.2：2～4。

10、可选地，所述混合物中还含有溶剂，所述溶剂为乙醇。

11、可选地，所述混合物的ph值为11～12。

12、可选地，所述反应温度为60～80℃，反应时间为1～2小时。

13、可选地，所述反应温度选自60℃、65℃、70℃、75℃、80℃中的任意值或上述任意两点间的范围值。

14、可选地，所述反应时间选自1小时、1.5小时、2小时中的任意值或上述任意两点间的范围值。

15、可选地，所述离心的转速为8000r/min～10000r/min，离心时间为5min～8min。

16、可选地，所述离心的转速选自8000r/min、9000r/min、10000r/min中的任意值或上述任意两点间的范围值。

17、可选地，所述离心时间选自5min、6min、7min、8min中的任意值或上述任意两点间的范围值。

18、可选地，所述百菌清标准比色卡的制备方法包括：配置不同浓度的百菌清标准工作溶液，分别向百菌清标准工作溶液中加入百菌清检测比色试剂，加热后，再加入吸附剂混合，震荡、静置，倒掉上清液，再通过仪器设备对沉淀物进行记录并处理，得到对应条件下百菌清标准比色卡。

19、可选地，所述百菌清检测比色试剂中，所述四丁基氢氧化铵、邻二硝基苯、对硝基苯甲醛的摩尔比为10～20：1～2：1～2。

20、可选地，所述步骤(1)中，所述果蔬样品与所述水的重量相同。

21、可选地，所述步骤(2)中，所述待测液与所述百菌清检测比色试剂的体积比为1：1～1.2。

22、可选地，所述步骤(2)中，所述加热的温度为45～60℃，所述加热的时间为10min～15min。

23、可选地，所述加热的温度选自45℃、50℃、55℃、60℃中的任意值或上述任意两点间的范围值。

24、可选地，所述加热的时间选自10min、11min、12min、13min、14min、15min中的任意值或上述任意两点间的范围值。

25、可选地，所述步骤(2)中，所述震荡的时间为1min～2min，静置的时间为5min～10min。

26、可选地，所述震荡的时间选自1min、1.5min、2min中的任意值或上述任意两点间的范围值。

27、可选地，所述静置的时间选自5min、6min、7min、8min、9min、10min中的任意值或上述任意两点间的范围值。

28、作为其中一个可选地基于比色原理快速检测果蔬中的百菌清方法如下：

29、(1)前处理：果蔬称重，用同等重量的纯净水搓洗果蔬表皮，得到待测液；

30、(2)检测：取1ml待测液放入透明离心管中，向其中分别加入反应试剂a、b、c，混匀，在45～60℃条件下反应10min，再向其中加入50mg产物吸附材料d，震荡1min后，静置5min，倒掉上清液，保留沉淀物；

31、(3)比色：观察沉淀物颜色，对照百菌清标准比色卡判定果蔬样品中百菌清的残留量；

32、所述的反应试剂a、b、c的名称、溶剂、浓度及加入量如下表所示：

33、 a b c 试剂名称 四丁基氢氧化铵 邻二硝基苯 对硝基苯甲醛 溶剂 甲醇 乙醇 乙醇 试剂浓度 100～150g/l 6～10g/l 6～10g/l 试剂量 50微升 500微升 500微升

34、由于试剂a、b、c与百菌清反应后生成的产物具有脂溶性，因此反应后离心管中呈现不均相体系，无法直接进行吸光度比对。为了对检测结果进行准确定量判定，需要对有色产物进行均匀吸附，因此合成产物吸附材料d。

35、所述的产物吸附材料d为改性的壳聚糖，其制备方法如下：在碱性条件下，分别将2g壳聚糖、(3～4)ml乙二醇二缩水甘油醚、(0.1～0.3)g十二烷基磺酸钠，(4～6)g十四烷基二甲基叔胺物料投入100ml体积分数为50％的乙醇水溶液中，在60～80℃水浴反应1～2小时，8000r/min离心5min，收集沉淀物，采用乙醇对沉淀物进行反复三次洗涤，真空干燥后得到带有脂肪长链的改性壳聚糖。其中，碱性条件的ph范围在11～12。

36、可选地，所述的百菌清标准比色卡的制作方法如下：

37、分别取1ml浓度为0、1、2、4mg/l的百菌清标准品溶液，向其中分别加入反应试剂a、b、c，混匀，在45～60℃条件下反应10min，再向其中加入50mg产物吸附材料d，震荡1min后，静置5min，倒掉上清液，利用成像设备对沉淀物进行记录，采用photoshop软件对记录进行处理，得到相应条件下百菌清标准比色卡。

38、本技术能产生的有益效果包括：

39、本发明百菌清比色快速检测方法操作简单，稳定性好，灵敏度高，检测下限可低至1mg/kg，整个检测过程不足20分钟即可得到检测结果，适用于该农药的现场快速检测；

40、本发明百菌清比色快速检测方法采用产物吸附手段，所制备的产物吸附材料为表面含有脂肪长链的壳聚糖，能够均匀吸附百菌清与试剂反应生成的有色不溶产物，对吸附产物后的材料颜色进行记录，解决了百菌清与试剂反应后呈现不均相体系而无法采用常规比色方法对百菌清进行测定的问题。

41、本发明采用脂肪长链改性的壳聚糖均匀吸附百菌清与指示剂化学显色反应生成的疏水产物，通过与百菌清比色卡对比，快速判定果蔬样本中百菌清农药含量是否超标。