一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法

本发明属于传感器的，具体涉及一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法。

背景技术：

1、crp是由肝细胞合成的一种急性蛋白，当受到炎症的刺激或细菌感染时，其值会在受刺激4～6h后开始升高，每隔8h升高1倍，一般36～50h达到峰值。随着炎症的恢复，crp值会不断降低。人体中正常的crp具有一定的生理作用，可增强机体的免疫能力。以往，由于检测crp的方法比较落后，易产生假阴性和假阳性结果，在很大程度上影响了它在临床上的应用价值，故导致其临床作用被弱化。近年来，随着研究的进展，快速、灵敏、简便、可靠的检测crp的方法已被建立，使得crp在临床上的应用价值得以提升，其应用领域也大大增加。

2、现有的传感器存在检测精度较低，检测范围较小。

技术实现思路

1、本发明的目的在于：针对现有技术的不足，提供一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，通过优化捕获方法，能够提高检测炎症标记物的精度。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，包括：

4、步骤一、基于适配体修饰的电极，对crp的特异性捕获，适配体的发卡结构打开，增大与电极表面的接触面积；

5、步骤二、通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定。

6、优选的，所述步骤一中，适配体具有两个发卡，当crp与适配体结合之后，发夹结构打开与crp特异性结合，适配体链由垂直方向部分弯折变成水平方向，并与电极表面接触。

7、优选的，所述步骤一中，适配体修饰的电极，包括：

8、在丝网印刷电极表面通过层层自组装的方法修饰aunps、go-cooh、活化cooh、nh2-crpapt，对目标物质crp的检测。

9、优选的，对目标物质crp的检测，包括：

10、(1)配制质量分数1％的naaucl4·2h2o溶液和浓度为0.5m的na2so4纳米金还原源溶液，按照体积比1:1滴加在spe电极上，利用循环伏安电化学还原方法在电极表面继续修饰aunps；

11、(2)在步骤(1)修饰好的spe/aunps电极上利用物理吸附的方式修饰go-cooh，浓度为2mg/ml；

12、(3)将0.4mg edc与1ml 0.1m mes以及0.5m氯化钠(ph＝6.0)混合并震荡，配置浓度为2mm的edc溶液；并将0.6mg nhs与1ml pbs充分混合，配置浓度为5mm的nhs溶液。将edc溶液及nhs溶液按1：1体积滴加到步骤(2)修饰的电极表面，并于室温下静置15min以实现对羧基的活化；

13、(4)在步骤(3)已经完成羧基活化的spe/aunps/go-cooh电极上通过脱水缩合作用固定crp适配体，室温下过夜；

14、(5)在spe/aunps/go-cooh/nh2-crpapt电极上滴加1mg/ml的bsa封闭修饰电极，4℃湿润环境下静置30min。

15、优选的，所述步骤二中，通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定，包括：

16、采用差分脉冲伏安法对crp进行电化学检测，扫描电压为-0.6v～0v，脉冲幅度为50mv，脉冲宽度为50ms，检测范围为0.001ng/ml～100ng/ml。

17、建立标准曲线，根据所检测不同浓度的crp标准溶液检测的差分脉冲电流峰值与pbs溶液下检测的电流峰值差的绝对值和crp标准溶液浓度对数绘制拟合曲线。

18、本发明的有益效果在于，本发明包括根据检测物核酸crp序列设计选择其适配体序列，将修饰有氨基基团的crp适配体固定在材料修饰的电极表面，在3'或5'末端功能化的适配体的应用会导致它们在固体表面上的垂直方向，crp适配体与检测物的核酸序列之间特异性识别，适配体的发卡结构打开，与电极表面的接触面积增大，从而促进电子转移，改变电流信号。首先在spe电极上电沉积aunps得到spe/aunps电极；然后将go-cooh固定在aunps修饰的电极表面；再用nhs/edc活化cooh；最终将含有nh2的crp适配体结合到电极上再用牛血清蛋白封闭修饰电极形成待检测物质生物敏感层，实现对炎症标记物crp的特异性检测。本发明可以直接检测与crp偶联的适配体的结构变化产生的电流信号，本发明的电化学适配体传感器检测精度高，检测范围大，能够满足对炎症标记物crp精准检测的需求。

技术特征：

1.一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，其特征在于：所述步骤一中，适配体具有两个发卡，当crp与适配体结合之后，发夹结构打开与crp特异性结合，适配体链由垂直方向部分弯折变成水平方向，并与电极表面接触。

3.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，其特征在于，所述步骤一中，适配体修饰的电极，包括：

4.如权利要求3所述的一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，其特征在于，对目标物质crp的检测，包括：

5.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的crp敏感捕获方法，其特征在于，所述步骤二中，通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定，包括：

技术总结
本发明属于传感器的技术领域，具体涉及一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，根据检测物核酸CRP序列设计选择其适配体序列，将修饰有氨基基团的CRP适配体固定在材料修饰的电极表面，在3'或5'末端功能化的适配体的应用会导致它们在固体表面上的垂直方向，CRP适配体与检测物的核酸序列之间特异性识别，适配体的发卡结构打开，与电极表面的接触面积增大，从而促进电子转移，改变电流信号。本发明能够对炎症标记物CRP的特异性检测。本发明可以直接检测与CRP偶联的适配体的结构变化产生的电流信号，本发明的电化学适配体传感器检测精度高，检测范围大，能够满足对炎症标记物CRP精准检测的需求。

技术研发人员：谭硕,高慧琳,李爽,白永昌,明东
受保护的技术使用者：天津大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12