一种头孢克洛聚合物的测定方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及头孢克洛原料及制剂聚合物的测定方法。


背景技术：

2.头孢克洛(cefaclor)，化学名(6r,7r)-7-[(r)-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-3-氯-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸一水合物，化学式为c
15h14
cln3o4s
·
h2o，其结构式如下：
[0003][0004]
头孢克洛属于第二代头孢菌素，主要适用于敏感菌所致的急性咽炎、急性扁桃体炎、中耳炎、支气管炎、肺炎等呼吸道感染、皮肤软组织感染和尿路感染等，其剂型有片剂、胶囊剂、干混悬剂、颗粒剂等。
[0005]
研究发现，β-内酰胺类抗菌药物所致速发型过敏反应与药物中存在的聚合物含量有关，并非药物本身所致，故控制聚合物成为该类药物的重点。
[0006]
中国药典及bp、usp均未对头孢克洛原料及制剂的聚合物进行控制。
[0007]
伍蓉等，sephadex g-10凝胶色谱法测定头孢克洛胶囊中高分子聚合物(《中国药师》2012，15(5)719～721)、王雅立等，凝胶色谱法测定头孢克洛胶囊中聚合物的含量(《海峡药学》2012，24(4)41～44)均公开了头孢克洛胶囊聚合物的检测方法；上述方法均采用sephadex g-10，存在专属性不强，头孢克洛无法完全缔合的缺点。


技术实现要素：

[0008]
本发明的目的是提供一种测定头孢克洛原料及制剂中头孢克洛聚合物含量的方法。本发明通过以下技术方案实现：
[0009]
本发明的头孢克洛原料及制剂中头孢克洛聚合物含量采用高效液相色谱法，色谱条件如下：
[0010]
色谱柱：球状亲水改性硅胶柱；
[0011]
流动相：体积比为93：7～97：3的磷酸盐缓冲液-有机溶剂的混合溶液；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.005mol/l、ph＝6.8～7.2。
[0012]
作为实施方式之一，所述磷酸盐为磷酸的钠盐、钾盐或铵盐；有机溶剂为乙腈。
[0013]
作为实施方式之一，所述磷酸盐缓冲液的配制方法为：将0.005mol/l的磷酸氢二钠溶液与0.005mol/l磷酸二氢钠溶液以体积比为61:39的比例混合，得混合溶液，并将所述混合溶液的ph调节至7.0。
[0014]
作为实施方式之一，所述球状亲水改性硅胶柱为advancebio sec，更优选内径为
4.6mm、长度为100～300mm、粒径为2～5μm的advancebio sec柱。
[0015]
作为实施方式之一，所述色谱条件还包括流动相的流速，所述流动相的流速为0.5ml/min～7.0ml/min，更优选所述流动相的流速为0.6ml/min。
[0016]
作为实施方式之一，所述色谱条件还包括检测波长，所述检测波长为254nm。
[0017]
作为实施方式之一，所述色谱条件还包括进样量，所述进样量为1～100μl；更优选进样量为5μl。
[0018]
作为实施方式之一，所述色谱条件还包括色谱柱温度，所述色谱柱温度为23～27℃，更优选所述色谱柱温度为25℃。
[0019]
作为实施方式之一，所述磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比95：5。
[0020]
作为实施方式之一，该测定方法的检测步骤包括：
[0021]
(1)制备供试品溶液、对照品溶液；
[0022]
(2)分别将供试品溶液、对照品溶液进样检测；
[0023]
供试品溶液的制备方法如下：取头孢克洛制剂适量，加入流动相溶解并稀释，摇匀，作为供试品溶液；上述供试品溶液的浓度包括但不限于(以头孢克洛计)0.1mg/ml～10mg/ml，更优选为0.1mg～5mg/ml，进一步优选为0.5mg/ml。
[0024]
对照品溶液的制备方法如下：取头孢克洛对照品适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计10mg)，精密称定，加入流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。上述对照品溶液的浓度包括但不限于(以头孢克洛计)0.1μg/ml～10μg/ml，更优选为0.1μg～5μg/ml，进一步优选为0.5μg/ml。
[0025]
作为实施方式之一，上述测定方法还包括灵敏度溶液的制备：精密量取上述对照品溶液适量，置量瓶中，加流动相稀释刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。所述灵敏度溶液的浓度优选为0.125μg/ml。
[0026]
作为实施方式之一，上述测定方法还包括系统适用性溶液的制备：取供试品溶液10ml，加0.1mol/l氢氧化钠溶液1ml，室温放置10分钟，再加0.1mol/l盐酸溶液1ml，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0027]
作为实施方式之一，采用面积归一化法、自身对照法、内标法或外标法进行高效液相色谱分析；优选采用外标法。
[0028]
本发明方法不仅可以用于头孢克洛原料质量的检测，同样还可以用于头孢克洛药剂及其他形式的头孢克洛产品中的聚合物的检测，从而确定该产品的质量，最大程度地提高用药的安全。
[0029]
本发明方法不仅可以用于人用药领域的各种形式的头孢克洛产品的质量检测，还可以用于兽药、工业品等领域的各种形式的头孢克洛产品的质量检测。
[0030]
本发明方法专属性强，灵敏度高，重复性良好，能够较快判断头孢克洛产品中聚合物的量，从而保证头孢克洛药物的安全有效。
附图说明
[0031]
图1为对照品溶液的检测图谱；
[0032]
图2为供试品溶液的检测图谱；
[0033]
图3为酸破坏自制制剂的检测图谱；
[0034]
图4为氧化破坏自制制剂的检测图谱；
[0035]
图5为碱破坏自制制剂的检测图谱；
[0036]
图6为高温破坏自制制剂的检测图谱；
[0037]
图7为光照破坏自制制剂的检测图谱；
[0038]
图8为灵敏度溶液的检测图谱；
[0039]
图9为系统适用性的检测图谱；
[0040]
图10为330621批聚合物的检测图谱；
[0041]
图11为330721批聚合物的检测图谱；
[0042]
图12为330821批聚合物的检测图谱。
具体实施方式
[0043]
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
[0044]
若无特殊指明以下试验均为hplc检测，具体条件如下：
[0045]
色谱条件：用球状亲水改性硅胶为填充剂(advancebio sec7.8mm
×
300mm，2.7μm或效能相当的色谱柱)；以磷酸盐缓冲液(ph7.0)[0.005mol/l磷酸氢二钠溶液-0.005mol/l磷酸二氢钠溶液(61：39)]-乙腈(95：5)为流动相；流速为每分钟0.6ml；柱温为25℃；检测波长为254nm；进样体积5μl。
[0046]
实施例1方法验证
[0047]
一.专属性试验
[0048]
1.空白干扰实验
[0049]
空白溶液：取流动相，滤过，取续滤液即得。
[0050]
空白辅料溶液：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。
[0051]
对照品溶液：取头孢克洛对照品适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计10mg)，精密称定，置200ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再精密量取2ml置20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液。
[0052]
供试品溶液：取头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相使主成分溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0053]
取以上各溶液5μl，分别注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。对照品和供试品的色谱图见图1-2。
[0054]
结果显示：空白溶液、空白辅料溶液色谱图中在聚合物峰处无相应峰出现，即空白溶液、空白辅料对聚合物含量测定无干扰。
[0055]
2.强制降解实验
[0056]
[未破坏样品制备]
[0057]
自制制剂溶液：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0058]
空白辅料溶液：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0059]
空白溶剂：取流动相过滤，取续滤液即得。
[0060]
[酸破坏样品制备]
[0061]
自制制剂酸破坏：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入1.0mol/l盐酸1ml，摇匀，室温静置42h，加入1.0mol/l氢氧化钠溶液1ml，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0062]
空白辅料酸破坏：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入1.0mol/l盐酸1ml，摇匀，室温静置42h，加入1.0mol/l氢氧化钠溶液1ml，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0063]
空白溶液酸破坏：取20ml流动相，置100ml量瓶中，加入1.0mol/l盐酸1ml，摇匀，室温静置42h，加入1.0mol/l氢氧化钠溶液1ml，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0064]
[氧化破坏样品制备]
[0065]
自制制剂氧化破坏：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入10％过氧化氢2ml，放置5分钟，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0066]
空白辅料氧化破坏：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入10％过氧化氢2ml，放置5分钟，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0067]
空白溶液氧化破坏：取20ml流动相，置100ml量瓶中，加入10％过氧化氢2ml，放置5分钟，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0068]
[碱破坏样品制备]
[0069]
自制制剂碱破坏：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液4ml，摇匀，放置1分钟，加入0.1mol/l盐酸4ml，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0070]
空白辅料碱破坏：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加入20ml流动相，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液4ml，摇匀，放置1分钟，加入0.1mol/l盐酸4ml，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0071]
空白溶液碱破坏：取20ml流动相，置100ml量瓶中，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液4ml，摇匀，放置1分钟，加入0.1mol/l盐酸4ml，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0072]
[高温破坏样品制备]
[0073]
自制制剂高温破坏：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量，置称量瓶中，置120℃烘箱中，放置2h后取出，在干燥器放置至室温后，精密称取适量(约相当于头孢克洛，按c15h14
cln3o4s计50mg)，置100ml量瓶中，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0074]
空白辅料高温破坏：精密取空白辅料适量，置称量瓶中，置120℃烘箱中，放置2h后取出，在干燥器放置至室温后，精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0075]
[光破坏样品制备]
[0076]
自制制剂光破坏：取自制的头孢克洛干混悬剂细粉适量，置称量瓶中，置4500lx&4w/m2光照强度的光照箱中，放置48h后取出，精密称取适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，置100ml量瓶中，加入流动相使使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0077]
空白辅料光破坏：取空白辅料适量，置称量瓶中，置4500lx&4w/m2光照强度的光照箱中，放置48h后取出，精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，置100ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0078]
空白溶液光破坏：取20ml流动相，置100ml量瓶中，置4500lx&4w/m2光照强度的光照箱中，放置48h后取出，加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0079]
[破坏试验结果]
[0080]
精密吸取以上溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，进样测定。
[0081]
(1)主峰峰纯度与分离度
[0082]
对制剂主峰进行dad全波长扫描，考察自制制剂破坏后的主峰峰纯度，主峰与相邻杂质峰的分离度，结果见表6。
[0083]
表6各破坏条件下主成分峰纯度结果
[0084][0085]
结果表明：自制制剂在酸、碱、氧化、高温、光等强制破坏条件下主峰纯度因子(匹配值)均大于950；主峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5。
[0086]
(2)破坏程度
[0087]
以各破坏条件下主峰与未破坏主峰的单位质量的峰面积之比对破坏程度进行计算：
[0088][0089]
a破坏：各破坏条件下主峰峰面积；a未破坏：未破坏条件下主峰峰面积；
[0090]
w破坏：各破坏条件下称样量；w未破坏：未破坏条件下称样量。
[0091]
各破坏条件下主成分破坏程度结果见表7。
[0092]
表7各破坏条件下主成分破坏程度结果
[0093]
破坏方式自制制剂未破坏/酸破坏5％氧化破坏7％碱破坏7％高温破坏2％光破坏12％
[0094]
自制制剂的酸破坏、碱破坏、氧化破坏、高温破坏和光破坏的破坏率在2％～12％间。
[0095]
(3)物料平衡结果
[0096]
以各破坏条件下总峰与未破坏总峰的单位质量的总峰面积之比对物料平衡结果进行计算：
[0097][0098]
a总破坏：各破坏条件下总峰面积；a总未破坏：未破坏条件下总峰面积；
[0099]
w破坏：各破坏条件下称样量；w未破坏：未破坏条件下称样量。
[0100]
各破坏条件下物料平衡结果见表8。
[0101]
表8各破坏条件下物料平衡结果
[0102]
破坏方式自制制剂未破坏/酸破坏96％氧化破坏99％碱破坏94％高温破坏98％光破坏89％
[0103]
结果显示：各破坏条件下的物料平衡结果在89％～96％之间，物料基本平衡。
[0104]
(4)各破坏条件下的聚合物情况
[0105]
各破坏条件下空白均无干扰，详细结果如下，色谱图见图3-7。
[0106]
[未破坏]
[0107]
自制制剂未破坏主峰前杂质峰有4个。
[0108]
[酸破坏]
[0109]
自制制剂破坏后主峰前杂质峰有3个；破坏最大的都rrt0.93聚合物峰。
[0110]
[氧化破坏]
[0111]
自制制剂破坏后主峰前杂质峰有4个；最大的是rrt0.93聚合物峰。
[0112]
[碱破坏]
[0113]
自制制剂破坏后主峰前杂质峰有6个，最大的是rrt0.80聚合物峰。
[0114]
[高温破坏]
[0115]
自制制剂破坏后主峰前杂质峰有3个。
[0116]
[光破坏]
[0117]
自制制剂破坏后主峰前杂质峰有5个；最大的都是rrt0.93聚合物峰。
[0118]
[强制破坏试验总结]
[0119]
由试验结果可知，头孢克洛干混悬剂在酸、碱、高温、氧化、光等破坏性试验产生的聚合物峰与头孢克洛峰能够完全分离，主峰峰纯度高，各破坏条件下物料平衡基本达到平衡，空白辅料、空白溶剂经过破坏后也不影响聚合物含量的测定，说明该方法的专属性好。
[0120]
二、定量限、检测限
[0121]
定量限溶液：取头孢克洛对照品适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计10mg)，精密称定，置200ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再精密量取2ml置20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，再精密量取1ml置20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，再精密量取10ml置20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀进样，结果如表9。
[0122]
表9定量限结果
[0123][0124]
三、线性范围
[0125]
线性溶液配制如下，线性结果如表10。
[0126]
0.125μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀。再精密量取1ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0127]
0.25μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀。再精密量取2ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0128]
0.5μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml置100ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0129]
1.0μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml置100ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0130]
2.5μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0131]
5.0μg/ml溶液：精密称取头孢克洛对照品10mg置200ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml置20ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀即得。
[0132]
表10线性结果
[0133][0134]
本方法在loq～200％(0.1211～4.8946μg/ml)范围内与峰响应值呈线性关系，得线性方程y＝0.1719x+0.0010，回归系数(r2)＝1.0000。
[0135]
四、重复性、中间精密度
[0136]
重复性：由同一实验员照本方法平行测定6份头孢克洛干混悬剂样品，比较6个测定结果的精密度。结果如表11。
[0137]
中间精密度：由不同实验员，在不同日期，使用不同仪器，分别照本方法平行测定6份头孢克洛干混悬剂样品，比较12份样品结果的精密度。结果如表12。
[0138]
表11重复性试验结果
[0139][0140]
比较6份样品聚合物含量结果的rsd，6份数据rsd为4％，本方法重复性良好。
[0141]
表12中间精密度结果汇总
[0142][0143]
比较12份样品聚合物含量结果的rsd，12份数据rsd为8％，本方法中间精密度良好。
[0144]
六、耐用性试验
[0145]
[对照品溶液稳定性]
[0146]
对照品溶液制备：取头孢克洛对照品适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计10mg)，精密称定，置200ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再精密量取2ml置20ml量瓶
中，用流动相稀释制成每1ml中含头孢克洛5μg的溶液。
[0147]
取对照品溶液，室温条件下，分别于0、1、2、4小时取上述溶液5μl进行测定，计算不同时间点与t＝0时峰面积的相对变化。
[0148]
对照品溶液稳定性结果见表13。
[0149]
表13对照品溶液的稳定性结果
[0150][0151][0152]
对照品溶液稳定性结果：随着时间的延长，对照品溶液在4h内峰面积逐渐变小，4h时峰面积相对于0h的峰面积比值为89.3％，所以对照品溶液应临用新制。
[0153]
[供试品溶液稳定性]
[0154]
供试品溶液制备：取头孢克洛干混悬粉末适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加入流动相使主成分溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0155]
取供试品溶液，室温条件下，分别于0、1、2、4小时取上述溶液5μl进行测定，计算不同时间点与t＝0时聚合物总含量的相对变化。
[0156]
供试品溶液稳定性结果见表14。
[0157]
表14供试品溶液的稳定性结果
[0158]
时间主峰前杂质个数聚合物总量(％)040.20140.45240.76451.57
[0159]
供试品溶液稳定性结果：供试品溶液在4h内聚合物杂质峰数量变多、总峰面积逐渐变大，4h内主峰前杂质峰总量从0.20％增长至1.57％，所以供试品溶液也应临用新配。
[0160]
[改变流速]
[0161]
以流速0.6ml/min为基础，分别调整至0.5ml/min、0.7ml/min，其他色谱条件不变。不同流速下，分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价流速的耐用性。改变流速后结果见表15。
[0162]
表15流速耐用性—聚合物总量
[0163]
结果计算聚合物总量(％)差值(％)标准条件0.16——流速0.5ml/min0.190.03流速0.7ml/min0.200.04
[0164]
结果：改变流速后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.04％，系统适用性分离度符合要求，即流速改变
±
0.1ml/min时，方法耐用性良好。
[0165]
[改变柱温]
[0166]
以柱温25℃为基础，分别调整至23℃、27℃，其他色谱条件不变。不同柱温下，分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价柱温的耐用性。改变柱温后结果见表16。
[0167]
表16柱温耐用性—聚合物总量
[0168][0169][0170]
结果：改变柱温后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.05％，系统适用性分离度符合要求，即柱温改变
±
2℃时，方法耐用性良好。
[0171]
[改变流动相ph]
[0172]
以原来流动相ph＝7.0为基础，分别调整流动相ph＝6.8、ph＝7.2，其他色谱条件不变。不同流动相ph下，分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价流动相ph的耐用性。改变流动相ph后结果见表17。
[0173]
表17流动相ph耐用性—聚合物总量
[0174]
结果计算聚合物总量(％)差值(％)标准条件0.16——ph6.80.160.00ph7.20.210.05
[0175]
结果：改变流动相ph后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.05％，系统适用性分离度符合要求，即流动相ph改变
±
0.2时，方法耐用性良好。
[0176]
[改变流动相比例]
[0177]
以原来流动相比例(95：5)为基础，分别调整流动相比例(93：7)、(97：3)，其他色谱条件不变。不同流动相比例下，分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价流动相比例的耐用性。改变流动相比例后结果见表18。
[0178]
表18流动相比例耐用性—聚合物总量
[0179]
结果计算聚合物总量(％)差值(％)标准条件0.16——乙腈3％0.160.00乙腈7％0.190.03
[0180]
结果：改变流动相比例后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.03％，系统适用性分离度符合要求，即流动相比例改变
±
2时，方法耐用性良好。
[0181]
[改变流动相无机盐种类]
[0182]
将流动相中的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠调整为磷酸二氢钾/磷酸氢二钾和磷酸二氢铵/磷酸氢二铵，其他色谱条件不变。分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价流动相比例的耐用性。改变流动相比例后结果见表19。
[0183]
表19流动相无机盐种类耐用性—聚合物总量
[0184]
结果计算聚合物总量(％)差值(％)标准条件0.16——磷酸二氢钾/磷酸氢二钾0.180.02磷酸二氢铵/磷酸氢二铵0.170.01
[0185]
结果：改变无机盐种类后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.02％，系统适用性分离度符合要求，即流动相中无机盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢铵时，方法耐用性良好。
[0186]
[改变流动相中有机溶剂种类]
[0187]
将流动相中的乙腈调整为甲醇，其他色谱条件不变。分别进样系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液，以聚合物总含量来评价流动相比例的耐用性。改变流动相比例后结果见表20。
[0188]
表20流动相有机溶剂种类耐用性—聚合物总量
[0189]
结果计算聚合物总量(％)差值(％)标准条件0.16——甲醇0.200.05
[0190]
结果：改变有机溶剂种类后，与正常条件下相比，聚合物总量最大差值为0.05％，系统适用性分离度符合要求，即流动相中有机溶剂为甲醇时，方法耐用性良好。
[0191]
实施例2样品测定
[0192]
一、仪器与试药：
[0193]
仪器及试剂：赛默飞u3000型高效液相色谱仪、梅特勒ms204ts/02及xse205du型电子天平；advancebio sec色谱柱；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸、乙腈。
[0194]
药品：头孢克洛干混悬剂，批号为330621、330721、330821，来自广州南新制药股份有限公司。
[0195]
对照品：头孢克洛工作对照品，批号为ws11/040，来自广州南新制药股份有限公司。
[0196]
二、检测方法
[0197]
空白溶液：取流动相，滤过，取续滤液即得。
[0198]
空白辅料溶液：精密称取空白辅料1.2g，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。
[0199]
对照品溶液：取头孢克洛对照品适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计10mg)，精密称定，置200ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再精密量取2ml置20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液。
[0200]
供试品溶液：取头孢克洛干混悬剂细粉适量(约相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计50mg)，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相使主成分溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0201]
灵敏度溶液：精密量取上述对照品溶液适量，置量瓶中，加流动相稀释刻度，摇匀，使头孢克洛(按c
15h14
cln3o4s计)浓度为0.125μg/ml，作为灵敏度溶液。
[0202]
系统适用性溶液：取上述供试品溶液10ml，加0.1mol/l氢氧化钠溶液1ml，室温放
置10分钟，再加0.1mol/l盐酸溶液1ml，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0203]
三、测定
[0204]
取以上各溶液5μl，分别注入液相色谱仪，以外标法测定，记录色谱图。图谱见图8～12。
[0205]
四、检测结果
[0206]
表21样品检测结果
[0207]
批号聚合物含量(％)3306210.173307210.163308210.18
[0208]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。