一种采用高效液相色谱鉴别中药复方制剂中板蓝根的方法与流程

本发明涉及中药制剂的质量控制，具体涉及一种采用高效液相色谱鉴别馥感啉口服液中板蓝根的方法。

背景技术：

1、馥感啉口服液系由鬼针草、野菊花、西洋参、黄芪、板蓝根、香菇、浙贝母、麻黄、白花前胡、甘草等10味药组成的复方制剂。其功能主治为清热解毒，止咳平喘，益气疏表，用于小儿气虚感冒所引起的发烧、咳嗽、气喘、咽喉肿痛。

2、现行标准收载于国家食品药品监督管理局国家药品标准(ws-10230-(zd-0230)-2002-2012z-2019)，该标准中主要包括了黄芪、浙贝母、麻黄、西洋参的薄层鉴别。目前尚未有对馥感啉口服液中板蓝根定性鉴别方面的研究，且申请人前期采用薄层色谱法对该方中板蓝根进行定性鉴别方法开发，具体操作主要参照板蓝根国标鉴定法：馥感啉口服液加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取(r,s)-告依春对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品的溶液。吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。然而由于该方中化学成分太过复杂，分离效果太差而无果。

3、因此，为了更加科学地评价馥感啉口服液内在质量，严格控制其质量的稳定性，提升产品技术水平，有必要针对馥感啉口服液中的板蓝根建立一种专属性强、重现性好、灵敏度高、操作简便的定性鉴别方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种采用高效液相色谱鉴别馥感啉口服液中板蓝根的方法，用于对馥感啉口服液中板蓝根的质量进行控制和评价。

2、本发明提供了一种采用高效液相色谱鉴别馥感啉口服液中板蓝根的方法，包括以下步骤：

3、(1)供试品溶液的制备：取馥感啉口服液适量，加入卤代烃类有机溶剂提取，蒸干，随后加入有机溶剂制成供试品溶液；

4、(2)板蓝根阴性对照溶液的制备：取与供试品量相当的板蓝根阴性馥感啉口服液样品，参照步骤(1)的方法制成板蓝根阴性对照溶液；

5、(3)对照品溶液的制备：取(r,s)-告依春对照品适量，加入有机溶剂制成对照品溶液；

6、(4)对步骤(1)-(3)获得的供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液进行高效液相色谱测定并记录色谱图；

7、(5)结果：供试品与对照品色谱在特定保留时间位置呈现相一致的色谱峰，从而鉴别出馥感啉口服液中的板蓝根。

8、其中，步骤(1)提取溶剂的选择至关重要，合适的溶剂将大大减少色谱图杂质干扰峰，且对洗脱溶剂的比例要求不高。优选地，所述卤代烃类有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷中一种或两种，更为优选地，所述卤代烃类有机溶剂为三氯甲烷。

9、在一些实施方案中，所述提取为振摇提取或超声提取，提取可以分一次或多次进行；

10、在一些实施方案中，所述馥感啉口服液与卤代烃类有机溶剂的体积比为1:(2-10)，优选地，体积比为1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10，更为优选地，体积比为1：3。

11、在一些实施方案中，步骤(1)-(3)所述有机溶剂选自甲醇、乙醇中的一种或两种，优选甲醇。

12、在一些实施方案中，所述馥感啉口服液有机溶剂的体积比为1：(1-3)；优选地，体积比为1：1、1：2、1：3，更为优选地，体积比为1：2。

13、在一些实施方案中，步骤(1)-(3)加入有机溶剂后进行过滤处理。

14、在一些实施方案中，色谱条件如下：

15、使用的色谱柱是c18色谱柱，尺寸为250mm×4.6mm，5μm；

16、所述流速为0.9-1.1ml/min；

17、所述柱温为30℃-40℃；

18、所述进样体积为5-10μl；

19、所述检测波长为245nm。

20、在一些实施例中，步骤(4)是以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行等度洗脱或梯度洗脱。

21、在一些实施方案中，本发明优选以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行等度洗脱，优选地，等度洗脱时甲醇与0.02％磷酸溶液的体积比为(1-20):(99-80)，优选地，体积比为(1-10):(99-90)，更为优选地，体积为2:98、3:97、4:96、5:95、6:94、7:93、8:92、9:91、10:90。

22、在一些实施方案中，为了冲洗色谱柱，保证下一针进样前色谱柱内干净，不影响下一针样品的色谱分析，以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行梯度洗脱，洗脱剂的比例如下：

23、

24、此外，采用梯度洗脱时，(r,s)-告依春特征峰在0～25分钟内出现，因此，在0～25分钟内的洗脱剂同样可以采用如上等度洗脱的条件，即0～25分钟的洗脱剂甲醇与0.02％磷酸溶液的体积比可以为(1-20):(99-80)，优选地，体积比为(1-10):(99-90)，更为优选地，体积为2:98、3:97、4:96、5:95、6:94、7:93、8:92、9:91、10:90。

25、另一方面，本发明还保护了上述方法在馥感啉口服液质量控制中的应用。

26、本发明种采用高效液相色谱鉴别馥感啉口服液中板蓝根的方法具有以下优点和有益效果：

27、1)本发明根据馥感啉口服液中板蓝根特征成分(r,s)-告依春的化学性质，优选出最佳的供试品提取溶剂与hplc色谱条件，所得色谱峰峰形较好、分离度高、专属性强、干扰峰少，能快速、有效、准确地对馥感啉口服液中板蓝根进行定性鉴别。且供试品采用卤代烷烃提取可以降低对洗脱剂比例的要求，易于推广、便于执行，具有良好的可行性。

28、2)本发明首次采用了高效液相色谱法对馥感啉口服液中板蓝根进行定性鉴别，克服了薄层色谱法灵敏度低、专属性低、重现性差和操作繁琐等缺点，弥补了馥感啉口服液现行质量标准中质量控制方法的不足，能更加科学、全面地评价馥感啉口服液内在质量，更有效地保证其质量的稳定性，进一步提升本产品的技术水平。

技术特征：

1.一种采用高效液相色谱鉴别馥感啉口服液中板蓝根的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，所述馥感啉口服液与卤代烃类有机溶剂的体积比为1:(2-10)，优选地，体积比为1：3；所述馥感啉口服液与有机溶剂的体积比为1：(1-3)；优选地，体积比为1：2。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述卤代烃类有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷，优选三氯甲烷。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取为振摇提取或超声提取。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)-(3)所述有机溶剂选自甲醇、乙醇，优选甲醇。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)是以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行等度洗脱或梯度洗脱。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)是以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行等度洗脱，流动相a与b的体积比为(1-20):(99-80)，优选地，体积比为(1-10):(99-90)。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)是以甲醇为流动相a、以0.02％磷酸溶液为流动相b进行梯度洗脱，流动相a与b的体积比如下：

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

技术总结
本发明公开了一种采用高效液相色谱鉴别中药复方制剂中板蓝根的方法。该方法以(R,S)‑告依春为对照品，并根据(R,S)‑告依春的化学性质优选出最佳的供试品提取溶剂与HPLC色谱条件，所得色谱峰峰形较好、分离度高、专属性强、干扰峰少，能快速、有效、准确地对中药复方制剂中板蓝根进行定性鉴别，更加科学、全面地评价中药复方制剂内在质量，保证其质量的稳定性，进一步提升产品的技术水平。

技术研发人员：马莉,邵瑶昕,颜燕萍,李明慧,杨文谦,李捍雄
受保护的技术使用者：广州市联瑞制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13