一种凝血酶原时间检测试剂的制作方法

1.本发明涉及生化技术领域，具体涉及一种凝血酶原时间检测试剂。


背景技术：

2.凝血酶原时间的测定，有益于对于血性疾病的筛查和辅助诊断，对于多种疾病的诊断、治疗和预后判断都有一定的意义。
3.凝血酶原时间(prothrombin time，pt)，是指凝血酶原转化为凝血酶，导致血浆凝固所需的时间，是外源性凝血系统中比较普遍的过筛试验，主要是用来反应外源性凝血途径状况。而pt测定常用于外源性凝血途径相关凝血因子的筛查以及监控需要进行口服抗凝剂的相关治疗，例如口服香豆素类抗凝药。
4.pt的检测是针对于枸橼酸抗凝剂已经处理过的血浆进行的，并且枸橼酸根离子和钙离子可以形成一种难以解离的络合物，从而使得血中的钙离子的浓度降低。在待测血浆中加入含有凝血活酶并且含有过量钙的组织因子，当组织因子存在时，重新钙化的血浆会因此激活x成为xa，使得凝血酶原转变为凝血酶，进而会使得纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，在此情况下，测得的凝固时间即为凝血酶原时间。
5.在大多数情况下，pt的延长和缩短是由于样本采集和实验室操作不当造成的，常见的pt延长或者缩短造成的原因如下：pt延长：先天性凝血因子ii、v、ⅶ、x缺乏，低(无)纤维蛋白原血症，dic,原发性纤溶症，vitk缺乏，肝病，口服抗凝剂、肝素和fdp等。
6.pt缩短：先天性凝血因子v增多，口服避孕药，高凝状态，血栓性疾病等。
7.目前急需一种检测试剂及检测方法。


技术实现要素：

8.本发明的目的是提供一种凝血酶原时间检测试剂，以及利用该凝血酶原时间检测试剂的检测方法。
9.本发明通过如下技术方案实现上述目的：一种凝血酶原时间检测试剂,包括试剂一和试剂二；
10.试剂一包括18～28wt％组织因子、0.3～0.5wt％bsa、4～6.5wt％缓冲液、0.1wt防腐剂；
11.试剂二包括4～6.5wt％缓冲液、10～30wt％稳定剂、0.1wt％防腐剂；
12.缓冲液为低金属螯合能力的缓冲液。
13.一种利用凝血酶原时间检测试剂的检测方法，包括以下步骤：
14.s1、每瓶pt试剂加入瓶标标示体积的缓冲液，轻摇溶解；
15.s2、取得测血浆0.1ml，37℃孵育3分钟，加入37℃预温pt试剂0.2ml，记录凝固时间，即为pt值；
16.s3、
17.优选的，静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/l枸橼酸钠抗凝液的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm离心15分钟，收集上层液。
18.优选的，采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器。
19.优选的，采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟。
20.优选的，不宜使用edta
·
na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
21.优选的，红细胞比容超过55％或小于20％时，应调整抗凝剂用量。
22.优选的，样本采集避免溶血及组织液污染。
23.优选的，样本在不同条件下可保存时间如下：+2～+8℃保存，不宜超过6小时：+22～+24℃保存，不宜超过2小时测定。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
25.本发明所提供的凝血试剂pt在测试过程中有着相对较良好的检测结果，同时对于组织因子的提取方式有新的改变，从而使得本试剂的检测相对于其他试剂来讲，更加的稳定。
具体实施方式
26.所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
27.实施例1
28.一种凝血酶原时间检测试剂，包括试剂一和试剂二；
29.试剂一包括20.1wt％组织因子、0.3wt％bsa、4wt％缓冲液、0.1wt防腐剂；
30.试剂二包括4wt％缓冲液、20wt％稳定剂、0.1wt％防腐剂；
31.缓冲液为低金属螯合能力的缓冲液。
32.一种利用上述凝血酶原时间检测试剂的检测方法，包括以下步骤：
33.s1、每瓶pt试剂加入瓶标标示体积的缓冲液，轻摇溶解；
34.s2、取得测血浆0.1ml，37℃孵育3分钟，加入37℃预温pt试剂0.2ml，记录凝固时间，即为pt值；
35.s3、
36.优选的，静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/l枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm(或2500g)离心15分钟，收集上层液(血浆，黄色)。
37.优选的，采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。
38.优选的，采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。
39.优选的，不宜使用edta
·
na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
40.优选的，红细胞比容超过55％或小于20％时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(ml)
＝0.00185x血液体积(ml)x(100一比容)。
41.优选的，样本采集避免溶血及组织液污染。
42.优选的，样本在不同条件下可保存时间如下：+2～+8℃保存，不宜超过6小时：+22～+24℃保存，不宜超过2小时测定。
43.实施例2
44.一种凝血酶原时间检测试剂，包括试剂一和试剂二；
45.试剂一包括18wt％组织因子、0.45wt％bsa、5wt％缓冲液、0.1wt防腐剂；
46.试剂二包括5wt％缓冲液、18wt％稳定剂、0.1wt％防腐剂；
47.缓冲液为低金属螯合能力的缓冲液。
48.一种利用上述凝血酶原时间检测试剂的检测方法，包括以下步骤：
49.s1、每瓶pt试剂加入瓶标标示体积的缓冲液，轻摇溶解；
50.s2、取得测血浆0.1ml，37℃孵育3分钟，加入37℃预温pt试剂0.2ml，记录凝固时间，即为pt值；
51.s3、
52.优选的，静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/l枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm(或2500g)离心15分钟，收集上层液(血浆，黄色)。
53.优选的，采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。
54.优选的，采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。
55.优选的，不宜使用edta
·
na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
56.优选的，红细胞比容超过55％或小于20％时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(ml)＝0.00185x血液体积(ml)x(100一比容)。
57.优选的，样本采集避免溶血及组织液污染。
58.优选的，样本在不同条件下可保存时间如下：+2～+8℃保存，不宜超过6小时：+22～+24℃保存，不宜超过2小时测定。
59.实施例3
60.一种凝血酶原时间检测试剂，包括试剂一和试剂二；
61.试剂一包括26wt％组织因子、0.35wt％bsa、4.5wt％缓冲液、0.1wt防腐剂；
62.试剂二包括4.5wt％缓冲液、30wt％稳定剂、0.1wt％防腐剂；
63.缓冲液为低金属螯合能力的缓冲液。
64.一种利用上述凝血酶原时间检测试剂的检测方法，包括以下步骤：
65.s1、每瓶pt试剂加入瓶标标示体积的缓冲液，轻摇溶解；
66.s2、取得测血浆0.1ml，37℃孵育3分钟，加入37℃预温pt试剂0.2ml，记录凝固时间，即为pt值；
67.s3、
68.优选的，静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/l枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm(或2500g)离心15分钟，收集上层液(血浆，黄色)。
69.优选的，采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。
70.优选的，采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。
71.优选的，不宜使用edta
·
na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
72.优选的，红细胞比容超过55％或小于20％时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(ml)＝0.00185x血液体积(ml)x(100一比容)。
73.优选的，样本采集避免溶血及组织液污染。
74.优选的，样本在不同条件下可保存时间如下：+2～+8℃保存，不宜超过6小时：+22～+24℃保存，不宜超过2小时测定。
75.实施例4
76.一种凝血酶原时间检测试剂，包括试剂一和试剂二；
77.试剂一包括28wt％组织因子、0.5wt％bsa、6.5wt％缓冲液、0.1wt防腐剂；
78.试剂二包括6.5wt％缓冲液、10wt％稳定剂、0.1wt％防腐剂；
79.缓冲液为低金属螯合能力的缓冲液。
80.一种利用上述凝血酶原时间检测试剂的检测方法，包括以下步骤：
81.s1、每瓶pt试剂加入瓶标标示体积的缓冲液，轻摇溶解；
82.s2、取得测血浆0.1ml，37℃孵育3分钟，加入37℃预温pt试剂0.2ml，记录凝固时间，即为pt值；
83.s3、
84.优选的，静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/l枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm(或2500g)离心15分钟，收集上层液(血浆，黄色)。
85.优选的，采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。
86.优选的，采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。
87.优选的，不宜使用edta
·
na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
88.优选的，红细胞比容超过55％或小于20％时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(ml)＝0.00185x血液体积(ml)x(100一比容)。
89.优选的，样本采集避免溶血及组织液污染。
90.优选的，样本在不同条件下可保存时间如下：+2～+8℃保存，不宜超过6小时：+22～+24℃保存，不宜超过2小时测定。
91.将实施例1至4的成品进行检测，检测结果如下表：
[0092][0093]
由上述的实验结果可知：本发明所提供的凝血试剂pt在测试过程中有着相对较良好的检测结果，同时对于组织因子的提取方式有新的改变，从而使得本试剂的检测相对于其他试剂来讲，更加的稳定。
[0094]
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0095]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。