一种吖啶酯抗体结合物的稀释液的制作方法

1.本技术涉及免疫检测分析技术领域，具体而言，涉及一种吖啶酯抗体结合物的稀释液。


背景技术：

2.吖啶酯发光标记物在光照条件下有可能部分分解，以致影响发光效果及化学发光试剂的稳定性，吖啶酯及其标记物的实验操作和储存建议为避光条件下处理，因此化学发光试剂盒中用于分装吖啶酯标记工作液的试剂瓶采用棕色瓶，且考虑溶液的挥发，瓶口都设计的比较小，吖啶酯标记工作液分装后，不能肉眼看清瓶中试剂的情况。
3.为了增强吖啶酯标记物的稳定性和反应性能，会在吖啶酯标记物的稀释液中添加蛋白保护剂和表面活性剂等易产生气泡的试剂，专利申请cn201610081312.9中公开了的一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液配方中还包含碳水化合物和氨基酸等试剂，不仅增加了工艺难度和原料来源的可控性，也使吖啶酯标记物的稀释液更容易长菌，从而影响吖啶酯标记物的稳定性。
4.当吖啶酯标记工作液在进行使用时，浮于液面上的气泡会干扰加样针的液位探测准确性，导致液体加样量不准确，液体中的气泡也会影响吖啶酯标记物的溶解均匀性，进而加大试剂盒检测样本时的不精密度(cv)，影响试剂盒性能。
5.从物理学角度考虑消除泡沫的方法主要包括放置挡板或滤网、机械搅拌、静电、冷冻、加热、蒸汽、射线照射、高速离心、加压减压、高频振动、瞬间放电和超声波(声学液体控制)等，这些方法都在不同的程度上使得泡沫的稳定因素小于衰减因素，从而泡沫的数量逐渐减少。但是这些方法共同的缺点是使用受环境因素的制约性较强、消泡速率不高等，影响试剂使用的时效性和可操作性。


技术实现要素：

6.为了解决由于吖啶酯标记物工作液中添加易发泡试剂导致的加样不准确的问题，本发明提供了一种吖啶酯抗体结合物的稀释液，所述稀释液由蛋白稳定剂、螯合剂、表面活性剂、防腐剂、添加剂、缓冲液和消泡剂组成；
7.其中，所述蛋白稳定剂选自牛igg、牛血清白蛋白、酪蛋白钠盐、鼠igg中的一种或多种，含量为5-30g/l；
8.所述螯合剂为edta，含量为10mg/l；
9.所述表面活性剂选自brij35(聚氧乙烯月桂醚)、月桂酰基氨酸钠中的一种或两种的混合，含量为0.2-2g/l；
10.所述防腐剂选自proclin 300、叠氮钠中的一种或两种的混合，其质量百分比含量为0.05％-0.5％；
11.所述添加剂为氯化钠，其含量为9g/l；
12.所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，其在所述稀释液中的终浓度为10-100mm；
13.所述消泡剂选自dmf(n，n-二甲基甲酰胺)、无水乙醇或两者的混合，其质量百分比含量为0.1％-0.3％；
14.所述稀释液的ph值为7.2
±
0.2。
15.进一步的，采用hcl或naoh调节稀释液的ph值为7.2
±
0.2。
16.将所述蛋白稳定剂、螯合剂、表面活性剂、防腐剂、添加剂和消泡剂加入到所述缓冲液中，搅拌至完全溶解，调ph值得到所述稀释液。
17.所述吖啶酯抗体结合物为吖啶酯-s100抗体结合物。
18.本发明的有益效果包括：
19.本发明提供的吖啶酯抗体结合物的稀释液在保证了吖啶酯标记物的稳定性和反应性能的同时，能够确保提取样本量的准确性，并可有效减少发光值跳值的情况。另外本发明制备的稀释液不会影响吖啶酯的发光效率。
20.不同温度条件下，随着保存时长的推移，抗体蛋白和吖啶酯连接的键会不稳定而发生断裂、吖啶酯的结构发生改变进而影响光子产率，而本发明提供的吖啶酯抗体结合物的稀释液组分虽未添加糖类、氨基酸等蛋白保护成分，但在通过添加消泡剂dmf、无水乙醇或两者的混合物，在保证ph值在7.2
±
0.2范围的情况下，各组分间的协同作用能够保持吖啶酯抗体结合物连接键及吖啶酯的结构的稳定，采用本发明提供的吖啶酯抗体结合物的稀释液对吖啶酯抗体结合物进行稀释，稀释后的试剂保存效期为：在2-8℃条件下能保存18个月以上，在37℃条件下能保存10天以上，室温条件下至少能放置6周。同时，本发明提供的吖啶酯抗体结合物的稀释液配方相对简单，提高了生产工艺的可实现性和可控性。
具体实施方式
21.下面结合实施例对本发明进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他发明和实施例，都属于本发明保护的范围。
22.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
23.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
24.实施例1、一种吖啶酯抗体结合物的稀释液
25.吖啶酯抗体结合物的稀释液的配方如下表1所示。
26.表1吖啶酯抗体结合物的稀释液中各组分含量
[0027][0028]
其中，brij35代表表面活性剂聚氧乙烯月桂醚brij35；dmf代表n，n-二甲基甲酰胺；防腐剂proclin 300购自sigma-aldrich公司(货号：48914-u)。
[0029]
吖啶酯抗体结合物的稀释液配制具体步骤如下：
[0030]
1)按表1的配方，将蛋白稳定剂、螯合剂、表面活性剂、防腐剂、添加剂和消泡剂加入缓冲液中，搅拌至完全溶解，得到混合液；
[0031]
2)将步骤1)得到的混合液搅拌混匀，加入hcl或naoh调节ph值为7.2
±
0.2，即得到稀释液。
[0032]
实施例2、吖啶酯抗体结合物的稀释液
[0033]
(1)按照表2的配方配制稀释液1-5，稀释液1-5为含消泡剂组。
[0034]
表2吖啶酯抗体结合物的稀释液1-5中各组分含量
[0035]
稀释液12345牛igg
ꢀꢀ
2g/l
ꢀꢀ
牛血清白蛋白5g/l30g/l10g/l20g/l20g/l酪蛋白钠盐
ꢀꢀꢀ
1g/l edta-na210mg/l10mg/l10mg/l10mg/l10mg/lbrij350.2g/l2g/l 0.5g/l0.1g/l月桂酰基氨酸钠
ꢀꢀ
1g/l0.5g/l0.1g/lproclin 3000.050％0.5％0.50％0.50％0.050％叠氮钠
ꢀꢀꢀꢀ
0.10％氯化钠9g/l9g/l9g/l9g/l9g/ltris-hcl缓冲液10mm100mm50mm50mm50mmdmf0.10％0.20％ 0.20％0.20％乙醇 0.10％0.20％
ꢀꢀ
[0036]
(2)按照表3的配方配制对照组稀释液6-10，稀释液6-10为不含消泡剂。
[0037]
表3吖啶酯抗体结合物的稀释液6-10中各组分含量
[0038][0039][0040]
(3)参考专利申请cn 201610081312.9实施例1，按照表4的配方配制对照组稀释液11，并在该配方的基础上添加质量百分比为0.20％的消泡剂dmf，配制稀释液12。
[0041]
表4吖啶酯抗体结合物的稀释液11和稀释液12中各组分含量(各组分含量均为质量百分比)
[0042][0043]
稀释液11，12的具体制备方法如下：
[0044]
1)按表4配方，将蔗糖、海藻糖、甘油、甘氨酸、牛血清白蛋白(bsa)、dtpa、tween-20、叠氮钠、peg6000、氯化钠和dmf(仅稀释液12中添加)加入0.05mol/l柠檬酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得到混合液；
[0045]
2)将步骤1)得到的混合液搅拌混匀，加入naoh调节ph值为6.4
±
0.1，即得到稀释液11和稀释液12。
[0046]
实施例3、吖啶酯抗体结合物的稀释液应用效果测定
[0047]
分别实施例2制备的稀释液1-12对吖啶酯-s100抗体进行稀释，稀释至工作浓度，得到吖啶酯-s100抗体结合物稀释液，分别命名为吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-12。
[0048]
从吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-12各分出19瓶，每瓶2ml。其中1瓶用于配制当
天的测试，4瓶放置37℃烘箱进行加速实验，另外7瓶放置2-8℃冰箱保存，还有7瓶放置室温保存。
[0049]
(1)稀释后的吖啶酯-s100抗体结合物的重复性测试：
[0050]
分别对上述吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-10进行重复检测30次，将50μl稀释后的结合物加入反应杯内，发光仪自动加入100μl预激发液(含有过氧化氢的酸性溶液，ph《2.0)和100μl激发液(含有氢氧化钠的碱性溶液，ph》12.0)，结合物在加入激发液后立刻发光，发光仪显示测量出的相对光单位(rlus)。分别计算30次检测结果的平均值(m)和标准差(sd)，按照公式(1)得出变异系数(cv)，
[0051]
cv＝sd/m
×
100％................(1)
[0052]
式中：cv—变异系数；sd—检测结果的标准差；m—检测结果的平均值。结果如表5所示。
[0053]
表5吖啶酯抗体结合物稀释液的重复性测试结果
[0054]
[0055]
[0056][0057]
由表5重复性测试结果可知，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-5重复测试30次的变异系数均小于1％，而吖啶酯-s100抗体结合物稀释液6-10重复测试30次的变异系数分别为6.639％、4.105％、3.202％、1.536％、10.622％，均＞1％。吖啶酯-s100抗体结合物稀释液6-10重复测试30次的检测结果中均出现个别的偏离值，导致检测结果的标准差增大，从而检测结果的变异系数也变大，重复性不佳。
[0058]
(2)稀释后的吖啶酯-s100抗体结合物的稳定性测试：
[0059]
根据表6-8制定的检验时间，分别对上述稀释后的吖啶酯抗体结合物在37℃、2-8℃和室温条件下的稳定性进行检测，将50μl稀释后的结合物加入反应杯内，发光仪自动加入100μl预激发液(含有过氧化氢的酸性溶液，ph《2.0)和100μl激发液(含有氢氧化钠的碱性溶液，ph》12.0)，结合物在加入激发液后立刻发光，发光仪显示测量出的相对光单位(rlus)，结果如表6-8所示。
[0060]
表6稀释后的结合物在37℃条件下的稳定性检测结果
[0061][0062]
如表6所示，在37℃条件下放置10天后，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-5发光效率下降了4.186-6.021％，而吖啶酯-s100抗体结合物稀释液11发光效率下降了19.225％，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液12发光效率下降了20.294％。
[0063]
表7稀释后的结合物在2-8℃条件下的稳定性检测结果
[0064]
[0065][0066]
如表7所示，在2-8℃条件下放置21个月后，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-5发光效率下降了3.520-5.900％，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液11发光效率下降了22.060％，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液12发光效率下降了23.017％。
[0067]
表8稀释后的结合物在室温条件下的稳定性检测结果
[0068][0069][0070]
如表8所示，在室温条件下放置7周后，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液1-5发光效率下降了3.970-6.293％，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液11发光效率下降了21.541％，吖啶酯-s100抗体结合物稀释液12发光效率下降了21.302％。
[0071]
通过上述试验可以看出，采用本发明提供的吖啶酯抗体结合物的稀释液，对吖啶酯抗体结合物进行稀释，稀释后的试剂保存效期为：在2-8℃条件下能保存18个月以上，在37℃条件下能保存10天以上，室温条件下至少能放置6周。