富马酸伏诺拉生中间体的质量控制方法与流程

1.本发明涉及一种富马酸伏诺拉生中间体的质量控制方法，尤其涉及一种可有效监测富马酸伏诺拉生中间体质量的质量控制方法。


背景技术：

2.富马酸伏诺拉生(tak-438，vonoprazanfumarate)是武田制药与大冢制药合作开发的一款新型口服的抗胃酸药物，5-(2-氟苯基)-1-(吡啶-3-磺酰基)-1h-吡咯-3-甲醛是制备该原料药的关键中间体，其cas号为881677-11-8，分子式为c
16h11
fn2o3s，分子量为330.33，化学结构如下：
[0003][0004]
上述中间体在制备过程中产生的工艺副产物、降解产物等杂质主要包含以下4种：
[0005][0006]
以上杂质可随着后续工艺流程带入到原料药或制剂中，将直接影响最终产品的质量、安全性、有效性。因此需要对上述富马酸伏诺拉生中间体的制备过程和产品质量进行监测，目前尚无相关的质量控制方法。


技术实现要素：

[0007]
发明目的：针对现有检测方法中对上述富马酸伏诺拉生中间体质量控制的空白，本发明旨在提供一种针对该中间体的有效、稳定、可靠的质量控制方法。
[0008]
技术方案：本发明的具有如下结构的富马酸伏诺拉生中间体的质量控制方法，
[0009][0010]
采用高效液相色谱法，以三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈-四氢呋喃混合溶液为流动相b，进行梯度洗脱；洗脱程序包含：0～36min，流动相a体积分数由90～80％降至40％～50％，流动相b的体积分数由10％～20％升至50％～60％。
[0011]
具体地，质控杂质如下：
[0012][0013]
其中，上述流动相a中三氟乙酸的体积百分比为0.02％～0.1％，流动相b中乙腈与四氢呋喃的体积比为30:70～40:60；优选，流动相a中三氟乙酸的体积百分比为0.04％，流动相b中乙腈与四氢呋喃的体积比为35:65。
[0014]
进一步地，洗脱程序包含：0～36min，流动相a体积分数由85％降至45％，流动相b的体积分数由15％升至55％；更进一步地，上述洗脱梯度优选如下：
[0015][0016]
更优选的洗脱梯度如下：
[0017][0018]
其中，上述色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充相，检测器为紫外吸收检测器，检测波长为225nm～235nm，柱温为35℃～45℃，流动相流速为0.5ml/min～1.0ml/min；进一步地，上述色谱柱的优选规格为4.6mm
×
150mm、填料粒径为3μm，具体采用的色谱柱为ymc-triart c18 exrs柱，检测波长为230nm，柱温为40℃，流动相流速为0.6ml/min～0.8ml/min、更优选为0.65ml/min～0.7ml/min。
[0019]
上述富马酸伏诺拉生中间体的质量控制方法具体包括如下步骤：
[0020]
(1)配置供试品溶液、系统适用性溶液；
[0021]
(2)设定检测条件：采用高效液相色谱法，检测器为紫外吸收检测器，检测波长为225m～235nm，柱温为30℃～45℃，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相a为三氟乙酸水溶液；流动相b为乙腈-四氢呋喃混合溶液，采用梯度洗脱，流动相流速为0.5ml/min～1.0ml/min；
[0022]
(3)分别取供试品溶液、系统适用性溶液，注入高效液相色谱仪，进行检测分析。
[0023]
其中，供试品溶液的配制方法为精密称定富马酸伏诺拉生中间体适量，加稀释剂溶解稀释成含富马酸伏诺拉生中间体约0.4mg/ml的溶液；
[0024]
系统适用性溶液的配制方法为分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质a：8μg，其他杂质：各4μg的混合溶液。
[0025]
其中，稀释剂为乙腈。
[0026]
更进一步地，上述质量控制方法针对各质控成分的检测线性范围如下：
[0027][0028][0029]
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
[0030]
1、方法专属性强(可有效分离中间体及各个杂质)，检测灵敏度高(达到百级纳摩尔浓度水平)，稳定、可靠(符合质量分析方法学验证的要求)，可用于富马酸伏诺拉生中间体制备过程及产品质量的监测；
[0031]
2、通过优化检测条件，采用ymc-triart c18 exrs柱及四氢呋喃共同提高了构造异构体之间的分离能力，同时采用乙腈改善峰型，实现对富马酸伏诺拉生中间体中各杂质的高灵敏、高准确性地定性定量研究。
附图说明
[0032]
图1为实施例1中分离度溶液考察的色谱图；
[0033]
图2为实施例2中空白溶液的色谱图；
[0034]
图3为实施例2中系统适用性溶液的色谱图；
[0035]
图4为实施例2中供试品溶液的色谱图；
[0036]
图5为对比例1中分离度溶液考察的色谱图；
[0037]
图6为对比例2中分离度溶液考察的原图的色谱图；
[0038]
图7为对比例2中分离度溶液考察的坐标轴放大的色谱图；
[0039]
图8为对比例3中分离度溶液考察的色谱图；
[0040]
图9为对比例4中分离度溶液考察的色谱图；
[0041]
图10为对比例5中分离度溶液考察的色谱图。
具体实施方式
[0042]
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
[0043]
实施例1：检测方法的确定
[0044]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0045]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0046]
色谱检测条件如下：
[0047]
色谱柱为ymc-triart c18 exrs，4.6mm
×
150mm，3μm，柱温为40℃，流动相a为0.04％三氟乙酸溶液，流动相b为乙腈-四氢呋喃(35:65，v/v)，流速及梯度如下：
[0048][0049]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0050]
实验结果：杂质峰分离情况见图1，四个杂质分离度均＞1.5，且峰型尖锐。
[0051]
实施例2：富马酸伏诺拉生中间体有关物质的测定
[0052]
(1)高效液相色谱条件
[0053]
用十八烷基硅烷硅胶为填充剂(ymc-triart c18 exrs，4.6mm
×
150mm，3μm或效能相当的色谱柱)；以0.04％三氟乙酸溶液为流动相a，以乙腈-四氢呋喃(35:65)为流动相b，按表1进行线性梯度洗脱；柱温为40℃；检测波长为230nm；进样体积5μl。
[0054]
表1.流速及梯度
[0055][0056]
(2)溶液配制
[0057]
溶剂：乙腈
[0058]
供试品溶液：取富马酸伏诺拉生中间体适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含0.4mg的溶液。
[0059]
系统适用性溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质a：8μg，其他杂质：各4μg的混合溶液。
[0060]
精密取供试品溶液及系统适用性溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，按加校正因子的峰面积归一化法计算杂质含量。供试品溶液色谱图中任何小于0.03％的杂质峰忽略不计。
[0061]
(3)系统适用性考察
[0062]
参照实施例中前述方法配制空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液进行测定。图谱见图2、图3、图4。结果表明，采用本发明的色谱条件，空白溶液无干扰，主成分与杂质之间以及各杂质之间均能有效分离，表明本方法系统适用性良好。
[0063]
(4)灵敏度考察
[0064]
参照实施例中方法配制主成分(富马酸伏诺拉生中间体)对照品和杂质对照品贮备液，分别精密量取各杂质对照品贮备液适量，用稀释剂逐步稀释测定，将信噪比约为10:1时作为定量限，考察各杂质检测灵敏度。结果见表2。结果表明本方法灵敏度良好。
[0065]
表2.灵敏度考察结果
[0066][0067]
(5)线性考察
[0068]
参照实施例中方法配制主成分(富马酸伏诺拉生中间体)对照品和杂质对照品贮备液，分别精密量取各杂质对照品贮备液适量，用稀释剂稀释制成一系列浓度，作为各成分的线性溶液。检测结果见下表3。结果表明，采用本发明的色谱条件，各待测成分线性关系良好。
[0069]
表3.线性考察结果
[0070]
[0071][0072]
(6)校正因子
[0073]
采用标准曲线法测定校正因子，结果见表4。
[0074]
表4.校正因子
[0075][0076]
(7)溶液稳定性考察
[0077]
分别于不同时间取系统适用性溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表5～表6。供试品溶液在室温下，分别于0h、2h、5.5h、24h、46h、48h测定，各个时间点供试品溶液相应杂质检出量与0h比，差值≤0.05％；无≥0.03％的新杂质出现。表明
供试品溶液室温条件下至少48h内稳定。系统适用性溶液在室温下，分别于0h、3h、27h、25h、36.5h、43h、51.5h测定，各个时间点，系统适用性溶液中各杂峰峰面积与0h峰面积的比值在80％～120％之间。表明系统适用性溶液室温条件下至少51.5h内稳定。
[0078]
表5.有关物质溶液稳定性试验-供试品溶液
[0079][0080]
表6.有关物质溶液稳定性试验-系统适用性
[0081][0082]
(8)准确度考察
[0083]
精密称取富马酸伏诺拉生样品9份，分别加入杂质限度50％、100％、150％的杂质对照品溶液，加稀释剂溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。分别精密量取各供试品溶液稀释1000倍，作为对照溶液。分别精密量取上述供试品溶液和对照溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以各杂质[(测的量-本底量)/加入量]计算回收率，结果见表7。结果表明，各杂质回收率均在80％～120％之间，rsd小于10.0％，表明本方法准确度良好，适用于本品有关物质检测。
[0084]
表7.准确度计算表
[0085][0086][0087]
综上所述，本发明的富马酸伏诺拉生中间体的质量控制方法专属性强、灵敏度高、线性关系良好、准确度高。
[0088]
对比例1
[0089]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0090]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0091]
色谱检测条件如下：
[0092]
检测波长为230nm，色谱柱为ymc ods-a4.6mm
×
150mm，5μm，柱温为35℃，流速为0.7ml/min，流动相a为0.1％三氟乙酸溶液，流动相b为甲醇，梯度如下：
[0093][0094]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0095]
取分离度溶液进样，实验结果：杂质峰分离情况见图5，杂质全都包裹在主峰里面，且主成分峰型较差。
[0096]
对比例2
[0097]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0098]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0099]
色谱检测条件如下：
[0100]
色谱柱为ymc ods-a 4.6mm
×
150mm，5μm，柱温为35℃，流速为0.7ml/min，流动相a为0.1％三氟乙酸溶液，流动相b为乙腈，梯度如下：
[0101][0102]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0103]
实验结果：主成分峰型见图6，分离情况见图7，主成分峰型变好，杂质c与杂质d未分离。
[0104]
对比例3
[0105]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0106]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0107]
色谱检测条件如下：
[0108]
色谱柱为ymc ods-a 4.6mm
×
150mm，5μm，柱温为35℃，流速为0.7ml/min，流动相a
为0.1％三氟乙酸溶液，流动相b为乙腈-四氢呋喃(80:20，v/v)，梯度如下：
[0109][0110]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0111]
实验结果：杂质峰分离情况见图8，杂质c与杂质d未分离。
[0112]
对比例4
[0113]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0114]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0115]
色谱检测条件如下：
[0116]
色谱柱为ymc ods-a 4.6mm
×
150mm，5μm，柱温为35℃，流速为0.7ml/min，流动相a为0.1％三氟乙酸溶液，流动相b为乙腈-四氢呋喃(40:60，v/v)，梯度如下：
[0117][0118]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0119]
实验结果：杂质峰分离情况见图9，杂质c与杂质d分离度增加，但未基线分离。
[0120]
对比例5
[0121]
分离度溶液制备中稀释剂为乙腈。
[0122]
分离度溶液：分别取杂质a、杂质b、杂质c、杂质d及富马酸伏诺拉生中间体对照品各适量，加入溶剂溶解并稀释制成每1ml约含富马酸伏诺拉生中间体：0.4mg、杂质：各2μg的混合溶液。
[0123]
色谱检测条件如下：
[0124]
色谱柱为ymc-triart c18 exrs，4.6mm
×
150mm，3μm，柱温为35℃，流速为0.5ml/min，流动相a为0.1％三氟乙酸溶液，流动相b为乙腈-四氢呋喃(40:60，v/v)，梯度如下：
[0125][0126]
进样体积：5μl，检测波长为230nm，取分离度溶液进样。
[0127]
实验结果：杂质峰分离情况见图10，杂质c与杂质d分离度增加，分离度＞1.5，但峰很钝，理论板数不高。