1.本发明涉及尿中kim-1、ngal和il-18三者联合测定技术领域，用于造影剂肾病早期诊断实验分析的方法。
背景技术：
2.研究表明scr轻微上升与临床不良预后密切相关，及早识别急性肾损伤，尽快启动干预机制对改善患者预后有重要意义。肾损伤分子1(kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)和白细胞介素18(il-18)是近期发现的具有前景的早期诊断急性肾损伤(aki)的生物标志物，但却各有局限，将尿中kim-1、ngal和il-18联合检测可能成为一种早期诊断肾损伤的可靠生物学标记物，在临床上具有广阔的应用前景。
技术实现要素：
3.本发明的目的在于提供一种用于造影剂肾病早期诊断实验分析的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于造影剂肾病早期诊断实验分析的方法，包括以下步骤：
5.步骤一：研究对象及分组，将研究对象分为病患组和参考对照组；
6.步骤二：检测指标，收集患者术前及术后的尿液标本，釆用elisa方法检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，取所有患者术前、术后24h及48h血清，测scr水平，肾小球滤过率(gfr)以epi公式进行计算，并且对参考对照组的尿液标本进行采集；
7.步骤三：统计数据，对比实验结果。
8.优选的，所述步骤一中的患者组分为50人，并且患者组的50人排除患有急慢性肾衰竭病、急慢性感染病、糖尿病、恶性肿瘤病和近期服用肾毒性药物的患者，所有患者均予维持性水化24-48h，均无使用肾毒性药物，且发生造影剂肾病(cin)的患者纳入cin组，且cin组患者为10人，患者组排除无尿及年龄且18岁以下患者。
9.优选的，所述步骤一种参考对照组选择与患者组入院时间相同或相近，即小于一周，且性别相同，年龄差别不大于5岁，且参考对照组人数为60人。
10.优选的，所述步骤二中收集患者术的尿液标本时间为术前及术后6h、24h、48h的尿液标本。
11.优选的，所述步骤三中的计量资料数据以x
±
s表示，两组间计量资料比较采用t检验，组间计数资料比较采用方差分析，两两比较采用lsd-t检验，计数资料采用卡方检验，诊断性能运用roc曲线及曲线下面积，auc比较采用delong、de long和clarke-pearson的非参数检验法，釆用spss17.0统计软件进行处理。
12.本发明的技术效果和优点：
13.本发明利用一种用于造影剂肾病早期诊断实验分析的方法，通过对比接受过造影剂检查患者与正常对比参照组人员检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，来判断尿中kim-1、
ngal和il-18三者联合测定，用于造影剂肾病早期诊断的临床效能。
具体实施方式
14.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
15.本发明提供了一种用于造影剂肾病早期诊断实验分析的方法。
16.实施例1：
17.步骤一：研究对象及分组，将研究对象分为病患组和参考对照组；
18.步骤二：检测指标，收集患者术前及术后的尿液标本，釆用elisa方法检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，取所有患者术前、术后24h及48h血清，测scr水平，肾小球滤过率(gfr)以epi公式进行计算，并且对参考对照组的尿液标本进行采集；
19.步骤三：统计数据，对比实验结果。
20.步骤一中的患者组分为50人，并且患者组的50人排除患有急慢性肾衰竭病、急慢性感染病、糖尿病、恶性肿瘤病和近期服用肾毒性药物的患者，所有患者均予维持性水化24-48h，均无使用肾毒性药物，且发生造影剂肾病(cin)的患者纳入cin组，且cin组患者为10人，患者组排除无尿及年龄且18岁以下患者，步骤一种参考对照组选择与患者组入院时间相同或相近，即小于一周，且性别相同，年龄差别不大于5岁，且参考对照组人数为60人。
21.步骤二中收集患者术的尿液标本时间为术前6h、24h、48h的尿液标本。
22.步骤三中的计量资料数据以x
±
s表示，两组间计量资料比较采用t检验，组间计数资料比较采用方差分析，两两比较采用lsd-t检验，计数资料采用卡方检验，诊断性能运用roc曲线及曲线下面积，auc比较采用delong、de long和clarke-pearson的非参数检验法，釆用spss 17.0统计软件进行处理。
23.实施例2：
24.步骤一：研究对象及分组，将研究对象分为病患组和参考对照组；
25.步骤二：检测指标，收集患者术前及术后的尿液标本，釆用elisa方法检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，取所有患者术前、术后24h及48h血清，测scr水平，肾小球滤过率(gfr)以epi公式进行计算，并且对参考对照组的尿液标本进行采集；
26.步骤三：统计数据，对比实验结果。
27.步骤一中的患者组分为50人，并且患者组的50人排除患有急慢性肾衰竭病、急慢性感染病、糖尿病、恶性肿瘤病和近期服用肾毒性药物的患者，所有患者均予维持性水化24-48h，均无使用肾毒性药物，且发生造影剂肾病(cin)的患者纳入cin组，且cin组患者为10人，患者组排除无尿及年龄且18岁以下患者，步骤一种参考对照组选择与患者组入院时间相同或相近，即小于一周，且性别相同，年龄差别不大于5岁，且参考对照组人数为60人。
28.步骤二中收集患者术的尿液标本时间为术后6h的尿液标本。
29.步骤三中的计量资料数据以x
±
s表示，两组间计量资料比较采用t检验，组间计数资料比较采用方差分析，两两比较采用lsd-t检验，计数资料采用卡方检验，诊断性能运用roc曲线及曲线下面积，auc比较采用delong、de long和clarke-pearson的非参数检验法，
釆用spss 17.0统计软件进行处理。
30.实施例3：
31.步骤一：研究对象及分组，将研究对象分为病患组和参考对照组；
32.步骤二：检测指标，收集患者术前及术后的尿液标本，釆用elisa方法检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，取所有患者术前、术后24h及48h血清，测scr水平，肾小球滤过率(gfr)以epi公式进行计算，并且对参考对照组的尿液标本进行采集；
33.步骤三：统计数据，对比实验结果。
34.步骤一中的患者组分为50人，并且患者组的50人排除患有急慢性肾衰竭病、急慢性感染病、糖尿病、恶性肿瘤病和近期服用肾毒性药物的患者，所有患者均予维持性水化24-48h，均无使用肾毒性药物，且发生造影剂肾病(cin)的患者纳入cin组，且cin组患者为10人，患者组排除无尿及年龄且18岁以下患者，步骤一种参考对照组选择与患者组入院时间相同或相近，即小于一周，且性别相同，年龄差别不大于5岁，且参考对照组人数为60人。
35.步骤二中收集患者术的尿液标本时间为术后24h的尿液标本。
36.步骤三中的计量资料数据以x
±
s表示，两组间计量资料比较采用t检验，组间计数资料比较采用方差分析，两两比较采用lsd-t检验，计数资料采用卡方检验，诊断性能运用roc曲线及曲线下面积，auc比较采用delong、de long和clarke-pearson的非参数检验法，釆用spss 17.0统计软件进行处理。
37.实施例4：
38.步骤一：研究对象及分组，将研究对象分为病患组和参考对照组；
39.步骤二：检测指标，收集患者术前及术后的尿液标本，釆用elisa方法检测尿中kim-1、ngal和il-18浓度，取所有患者术前、术后24h及48h血清，测scr水平，肾小球滤过率(gfr)以epi公式进行计算，并且对参考对照组的尿液标本进行采集；
40.步骤三：统计数据，对比实验结果。
41.步骤一中的患者组分为50人，并且患者组的50人排除患有急慢性肾衰竭病、急慢性感染病、糖尿病、恶性肿瘤病和近期服用肾毒性药物的患者，所有患者均予维持性水化24-48h，均无使用肾毒性药物，且发生造影剂肾病(cin)的患者纳入cin组，且cin组患者为10人，患者组排除无尿及年龄且18岁以下患者，步骤一种参考对照组选择与患者组入院时间相同或相近，即小于一周，且性别相同，年龄差别不大于5岁，且参考对照组人数为60人。
42.步骤二中收集患者术的尿液标本时间为术后48h的尿液标本。
43.步骤三中的计量资料数据以x
±
s表示，两组间计量资料比较采用t检验，组间计数资料比较采用方差分析，两两比较采用lsd-t检验，计数资料采用卡方检验，诊断性能运用roc曲线及曲线下面积，auc比较采用delong、de long和clarke-pearson的非参数检验法，釆用spss 17.0统计软件进行处理。
44.研究表明两组在性别、年龄、bmi、目前吸烟史、有无高血压、基础肾功能(scr、egfr)等方面差异均无统计学意义。
45.两组各指标各时间点的比较：两组冠脉介入术前各标记物(尿kim-1、ngal及il-18)水平差异无统计学意义；术后6h，cin组的尿ngal浓度显著高于对照组(p＝0.0002)，尿k1m-1及il-18与对照组差异无统计学意义；术后24h及48h尿kim-ngal及il-18浓度均显著高于对照组，而scr在术后24h校对照组无显著变化(p＝0.06)，至术后48h才显著升高。
46.尿kim-ungal及il-18在不同时间点的变化：cin组中，术后6h尿kim-1水平为术前的1.6倍(p《0.05)，术后24h达峰值，为术前的3.5倍(p《0.05)，至术后48h仍保持较高水平，显著高于术前(p《0.05)，术后6h尿ngal即达峰值，为术前的15倍(p《0.05)，术后24-48h浓度逐渐下降，但与术前差异均有统计学意义(p《0.05)；尿il-18与尿k1m-1相似，于术后6h即升高，为术前的1.2倍(p《0.05)，术后24h达峰值，为术前的1.9倍(p《0.05)，术后48h仍维持较高浓度，显著高于术前(p《0.05)对照组中，各标记物在术前与术后各时间点差异无统计学意义。
47.术后24h各标记物的诊断性能：roc曲线分析显示，术后24h尿k1m-1的auc最高，为0.85(95％ci：0.72-0.95，p＝0.008)，尿il-18次之[auc＝0.79(95％ci：0.62-0.99)，p＝0.028]，尿ngal最低|auc＝0.78(95％c/：0.67-0.98)，p＝0.031j，上述各标志物的诊断效能均显著大于scr[auc＝0.66(95％ci：0.40～0.91)，p＝0.24]，差异均有统计学意义(均p《0.05)。若将尿kim-1、ngal及il-18联合检测应用，即同时将尿kim-1'ngal、il-18经logistic回归曲线[logistic回归方程为＝-0.454+0.541(kim-1)+0.006(ngal)+0.017(il-18)]转化综合为预测概率变量predl，再将变量predl作为检验变量行r0c曲线分析，术后24h诊断cin的auc达0.99(95％ci：0.90-1.00，p＝0.0001)，不仅大于各标志物单项检测的auc，也显著优于scr的诊断效能(均p《0.05)。
[0048]
本研究结果显示，pci术后24hscr尚无明显变化时，尿kim-1、ngal和il-18浓度已显著高于对照组，且尿ngal于术后6h升高，最先达峰值，此后逐渐回落，但术后48h仍髙于术前；尿kim-1和尿il-18均于术后6h升高，术后24h达峰值，持续48h仍可保持较高水平，roc曲线分析进一步提示，pci术后24h尿kim-1、ngal和il-18各自对cin的诊断效能均优于scr，可能较目前提前1～2d诊断cin，是cin较好的诊断标志物，另外，需指出的是，han等分析23例不同病因所致aki患者的尿kim-1浓度，发现cin患者的尿kim-1水平较术前未有升高，但我们认为，该研究中cin患者术前已存在基础肾功能不全，与本研究患者的入选标准有差异，而且研究中并未明确提示尿液留取的具体时间，因此无法判断尿kim-1水平是否在检测前或后有变化。
[0049]
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。