一种基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置及应用

1.本发明具体涉及一种基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置的制备及其在食品中杂环胺类化合物的富集和检测中的应用，属于多孔骨架材料合成和分析检测技术领域。


背景技术：

2.随着现代社会的高速发展，人们在日常生活中对以烘焙食品为主的日常休闲和方便食品的需求越来越高。烘焙食品中的加工原料主要包括面粉、蛋、奶、肉类、糖、盐等，由此成型的预加工产品在180～220℃的条件下高温焙烤时会发生美拉德反应。然而，美拉德反应除了赋予烘焙食品必要的色、香以及一系列的风味物质外，还会不可避免地生成一些具有较高致癌和致突变性的副产物如杂环胺(heterocyclic amines，has)等。如长期摄入含有杂环胺类化合物的烘焙食品将会使消费者面临较大的健康风险，而has在烘焙食品中则多以痕量水平存在。因此，如何快速、有效检测烘焙食品中has的含量是保证人们安全消费此类食品的关键前提，同时也会为烘焙食品行业的健康发展奠定基础。
3.目前has的分析检测主要包括目标物提取、萃取和定量检测三个关键步骤。由于食品基质的复杂性，加之has在基质中的含量往往低于常规仪器的定量检测限，从而导致其检测结果的准确性较低。因此需要先将食品中的has进行富集后再进行定量检测，这也使得has的高效和准确萃取成为了其检测过程中最为关键的步骤。固相萃取法是现代食品分析中最常用的一种富集方法，但是这种方法对样品的处理步骤相对复杂，所用时间较长，人工成本较高，并且萃取过程需使用大量有机试剂，既对环境不友好又提高了分析检测成本。因此在此基础上又开发了一种基于多孔膜保护的微固相萃取技术，该方法集样品的预处理、萃取、浓缩于一体，更加清洁、高效，大大降低了检测成本。其中，吸附剂材料的性能好坏是决定微固相萃取效率的关键因素，目前常用的吸附剂材料包括传统的碳基材料、聚合物材料和二氧化硅等。这些吸附剂对has可达到较好的富集效果，但是其应用的条件具有一定的局限性：(1)吸附平衡时间长，最大吸附量较小，例如c
18
材料作为吸附剂萃取食品中的杂环胺时，平衡时间超过50min，并且平衡时最大吸附量不足100pmol/g；(2)在复杂的基质环境中吸附剂的稳定性降低，吸附能力减弱，这在很大程度上影响了其对烘焙食品中has检测的高效和准确性，也限制了微固相萃取技术的发展。因此，开发一种对多种has具有较强吸附能力的吸附剂尤为重要。
4.共价有机框架(covalent organic frameworks，cofs)材料是一类具有永久孔隙率和有序结晶结构的多孔有机聚合物，并且具有较高的酸碱稳定性和热稳定性。其中，tpbd是由1,3,5-三醛基间苯三酚和联苯胺经醛氨缩合反应形成的二维亚胺型cof材料，其具有独特的多孔结构框架，大量的共轭体系和多个吸附位点，包括芳环(疏水相互作用和π-π相互作用)，大环空腔(包合作用)和部分质子化桥联氮原子(阴离子交换相互作用)。这使其更容易与含有至少一个杂环，以及至少一个给电子的胺(含氮)基或甲基的has相互作用形成
π-π、阳离子-π络合物。但是在食品等复杂的样品基质中，如想要同样快速、高选择性地吸附其中的has，需将tpbd-cof材料进行特异性修饰，使其和has分子之间的相互作用力更强，并且具有更高的特异性。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种羧基化共价有机框架材料。本发明的另一目的是提供一种基于该羧基化共价有机框架材料为吸附剂的膜保护微固相萃取装置及其在烘焙食品中分析检测杂环胺类化合物中的应用。
6.本发明的上述目的通过以下方案予以实现：
7.一种基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置，其特征在于，所述羧基化共价有机框架材料的制备方法，包括以下步骤：
8.(1)以三醛基间苯三酚和3,3`-二羟基联苯胺为有机配体，在乙酸的催化作用下，利用溶剂热法使两者发生席夫碱反应和互变异构反应，制备出具有有序结晶结构的共价有机框架材料；
9.(2)将步骤(1)中所制备共价有机框架材料和丁二酸酐溶液及4-甲氨基吡啶(催化剂)混合均匀，经冷凝回流后收集固体反应产物，然后去除未反应的丁二酸酐，最后真空干燥制得羧基化共价有机框架材料，其单元分子结构如下：
[0010][0011]
所述的羧基化共价有机框架材料的红外光谱在～1580cm-1
、～1280cm-1
和～1720cm-1
处存在特征吸收峰。优选地，所述的羧基化共价有机框架材料的羧基含量为0.05～0.10mm/g。
[0012]
优选地，步骤(2)中丁二酸酐的溶剂为无水四氢呋喃，催化剂为4-甲氨基吡啶。
[0013]
优选地，步骤(1)三醛基间苯三酚和3,3`-二羟基联苯胺的摩尔比为1：(0.5-5)；步骤(2)中所述的丁二酸酐溶液的浓度为0.1-1.0m，共价有机框架材料和丁二酸酐的质量比为1:10～20，丁二酸酐和催化剂的物质的量之比为15～25:1。
[0014]
更优选，步骤(1)三醛基间苯三酚和3,3`-二羟基联苯胺的摩尔比为1：(1.5～3)；步骤(2)中所述的丁二酸酐溶液的浓度为0.5-1.0m，共价有机框架材料和丁二酸酐的质量比为1:16～20，丁二酸酐和催化剂的物质的量之比为20～25:1。
[0015]
优选地，步骤(2)中所述的冷凝回流的温度为60～80℃，时间为22h
±
6h；未反应的丁二酸酐是以四氢呋喃为溶剂经索氏抽提去除。
[0016]
优选地，将羧基化共价有机框架材料置于聚丙烯微孔滤膜制成的密封套中，然后密封，得到基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置。
[0017]
优选地，所述的聚丙烯微孔滤膜的孔径为0.22μm，吸附剂的装载量为5-10mg，膜保护微固相萃取装置的大小为1.2～1.5cm
×
1.2～1.5cm。
[0018]
所述基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置用于对食品中的杂环胺同步萃取和富集；具体应用包括以下步骤：
[0019]
(1)提取：将待测食品粉碎后与乙腈和氢氧化钠溶液充分混合，搅拌，超声处理，得到提取液；
[0020]
(2)萃取：将提取液经氮吹浓缩，用甲醇水溶液复溶，调节溶液ph，将所制备的膜保护微固相萃取装置投入上述溶液中，磁力搅拌进行吸附，吸附结束后将其取出并用水洗涤，然后浸入到解吸溶液中进行超声解吸；随后将解吸液进行浓缩并用甲醇水溶液复溶，经0.22μm针孔滤头过滤后得待测样品；
[0021]
(3)检测：将(2)中的待测样品通过高校液相色谱-质谱联用仪进行定量检测。
[0022]
优选地，步骤(1)所述的氢氧化钠溶液浓度为1.0～2.0m，氢氧化钠溶液和乙腈的体积(ml)和待测物的质量(g)的比为3ml:2ml:1g。
[0023]
优选地，步骤(2)所述的调节溶液的ph为2～3，膜保护微固相萃取装置进行吸附时样品溶液的体积为4～5ml，磁力搅拌的速度为500-700rpm，所述的吸附时间为5～120min。
[0024]
优选地，步骤(2)所述的解吸液为甲醇，解吸液的体积为0.5～1ml。
[0025]
优选地，步骤(2)所述的超声解吸的时间为3～15min，解吸液浓缩后用来复溶的溶液为30％～50％的甲醇水溶液。
[0026]
优选地，步骤(2)所述的浓缩后用来复溶的甲醇水溶液体积为0.1～0.2ml。
[0027]
优选地，步骤(3)所述的hplc-ms的色谱条件：色谱柱的填料为c18，流动相为乙腈和甲酸-乙酸铵溶液；质谱条件：电离方式为电喷雾电离正离子模式，扫描方式为多反应监测。
[0028]
优选地，所述的基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置的目标物吸附物为烘焙食品中的极性和非极性杂环胺。
[0029]
本发明通过对共价有机框架材料tpbd进行羧基化修饰，并将其置于聚丙烯微孔滤膜中制成膜保护微固相萃取装置来用于食品基质中多种杂环胺类化合物的同步萃取和高效富集。借助羧基和has分子中的环外氨基之间的静电相互作用和氢键作用，进一步增强了tpbd和杂环胺类化合物之间的亲和力，达到了更优异的吸附效果。所用吸附剂通过溶剂热
法合成，经现代分析技术对材料进行结构表征的结果表明具有永久孔隙率和有序结晶结构，对杂环胺有较强的亲和吸附力，吸附平衡时间短，吸附量大，其外层滤膜可有效过滤食品样品中的基质组分，极大地简化了样品预处理的步骤，缩短检测时间和人工成本。同时，所制备的膜保护微固相萃取装置集萃取、净化和浓缩于一体，可快速、高效地富集烘焙食品中的痕量杂环胺。
[0030]
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0031]
(1)所制备的羧基化共价有机框架材料具有永久孔隙率和有序的结晶结构，对于杂环胺的吸附容量大、选择吸附性强。羧基基团的引入不仅可以与杂环胺类化合物之间产生π-π相互作用等常规吸附作用力，还能和has分子的环外氨基产生静电相互作用和氢键作用，进一步增强了两者之间的亲和力和吸附效果。
[0032]
(2)所开发的基于羧基化共价有机框架材料为吸附剂的膜保护微固相萃取装置，实现了食品样品预处理步骤的简洁化。对has进行初步提取后，无需再进行多次除杂和脂质等操作，同时极大地缩短了吸附时间和减少了有机试剂的使用。
附图说明
[0033]
图1为tpbd-cooh的粉末(a)、膜保护微固相萃取装置(b)、tpbd-cooh的红外光谱图(c)和tpbd-cooh的粉末x射线衍射图(d)；材料图。
[0034]
图2(a)为tpbd-cooh的氮气吸附-脱附曲线图和多点bet图。
[0035]
图2(b)为tpbd-cooh的孔径分布图。
[0036]
图3为tpbd-cooh的表面接触角图。
[0037]
图4为tpbd-cooh的显微形貌图。
[0038]
图5为tpbd-cooh吸附杂环胺的准一级动力学曲线。
[0039]
图6为tpbd-cooh吸附杂环胺的准二级动力学曲线。
[0040]
图7为tpbd-cooh吸附杂环胺的等温吸附模型(langmuir模型)。
[0041]
图8为tpbd-cooh吸附杂环胺的等温吸附模型的(freundlich模型)。
[0042]
图9(a)为吸附工作液甲醇比例和萃取效率的关系图。
[0043]
图9(b)为吸附时间与萃取效率的关系图。
[0044]
图10(a)为解吸液种类和萃取效率的关系图。
[0045]
图10(b)为解吸时间和萃取效率的关系图。
具体实施方式
[0046]
下面结合实施例及附图和表格对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0047]
实施例1羧基化共价有机框架材料tpbd-cooh的制备及表征
[0048]
合成步骤如下：
[0049]
(1)tpbd-(oh)2的合成：称取0.3mmol三醛基间苯三酚(63mg)和0.45mmol 3,3`-二羟基联苯bd-(oh)2(97.3mg)于安瓿瓶内，加入1.5ml无水均三甲苯和1.5ml无水二氧六环，超声分散5min。加入0.5ml6 m乙酸后超声5min使其分散均匀，然后将安瓿瓶置于液氮中冻结后进行真空脱气和密封。在120℃下反应72h，反应结束后冷却至室温，过滤反应物，用无
水丙酮各清洗3次直至滤出液无色，然后再用无水丙酮进行溶剂交换5次，洗涤之后于120℃真空干燥24h。
[0050]
(2)tpbd-cooh的合成：取150mg tpbd-(oh)2加入到烧杯中，分别加入45ml0.5m丁二酸酐的四氢呋喃溶液和146.7mg4-甲氨基吡啶，混合物在80℃水浴中加热回流24h，离心并收集沉淀。用无水四氢呋喃洗涤沉淀3次后，再用无水四氢呋喃索氏抽提24h，收集固体后在80℃条件下真空干燥16h，得粉末样品如图1(a)所示。
[0051]
羧基化共价有机框架材料tpbd-cooh的结构表征：
[0052]
借助傅里叶变换红外光谱对tpbd-cooh进行表征，结果如图1(c)所示，在1581cm-1
的位置出现了强烈的吸收峰，该峰为酮烯胺结构中的c＝c的伸缩振动吸收峰。1256cm-1
处的c-n的吸收峰为酮烯胺结构中的c-n键，可以判定合成的材料发生了席夫碱反应和不可逆的分子互变异构，生成了具有酮烯胺结构的cofs材料。在1718cm-1
处出现的吸收峰，是羧基中c＝o的伸缩振动峰，表明羧基基团的成功引入。通过对材料进行粉末x射线衍射，结果如图1(d)所示，tpbd-cooh在2.9
°
、5.8
°
和26.5
°
均出现了衍射峰，低角度的处[2θ＝2.9
°
]的衍射峰对应的(100)反射平面，表明材料具有一定的结晶性和周期性；而高角度处[2θ＝26.5
°
]的衍射峰对应的(001)反射平面，表明了tpbd-cooh-cof片层的π-π堆叠方式。通过氮气吸附-解吸实验对tpbd-cooh的比表面积及孔径进行分析，结果如图2(a)和图2(b)所示，tpbd-cooh的bet比表面积分别为96cm2·
g-1
，孔径大小为1.48nm，说明材料具有微孔结构，并且具有较大的比表面积。通过扫描电镜对tpbd-cooh的微观形貌进行观察，结果如图4所示，tpbd-cooh的分子片层之间经有序堆积后形成无数个瓦片状结构，这些结构紧密地堆叠在一起形成大的聚集体。通过表面接触角对tpbd-cooh的亲疏水性进行表征，结果如图3所示，tpbd-cooh的接触角为36.5
°
，材料表现为较强的亲水性。
[0053]
实施例2羧基化共价有机框架材料tpbd-cooh的吸附性能表征
[0054]
合成的步骤如下：
[0055]
(1)tpbd-(oh)2的合成：称取0.3mmol三醛基间苯三酚(63mg)和0.9mmol bd-(oh)2(194.6mg)于安瓿瓶内，加入1.5ml无水均三甲苯和1.5ml无水二氧六环，超声分散5min。加入0.5ml6 m乙酸后超声5min使其分散均匀，然后将安瓿瓶置于液氮中冻结后进行真空脱气和密封。在120℃下反应72h，反应结束后冷却至室温，过滤反应物，用无水丙酮各清洗3次直至滤出液无色，然后再用无水丙酮进行溶剂交换5次，洗涤之后于120℃真空干燥24h。
[0056]
(2)tpbd-cooh的合成：取300mg tpbd-(oh)2加入到烧杯中，分别加入60ml1.0 m丁二酸酐的四氢呋喃溶液和225.9mg 4-甲氨基吡啶，混合物在60℃水浴中加热回流28h，离心并收集沉淀。用无水四氢呋喃洗涤沉淀3次后，再用无水四氢呋喃索氏抽提24h，收集固体后在80℃条件下真空干燥24h。
[0057]
tpbd-cooh的杂环胺吸附性能测试：
[0058]
通过吸附动力学模型评估tpbd-cooh对杂环胺的吸附选择性和最大吸附量，配制浓度为500μg
·
l-1
的16种杂环胺标准混合溶液，准确称取2mg上述tpbd-cooh材料，加入到装有2ml杂环胺标准混合液的离心管中，室温下以500r/min的转速磁力搅拌1、5、10、20、30、60、120min，然后测定吸附后上清液中的杂环胺浓度。色谱条件：色谱柱为phenomena kinetex c18柱(100mm
×
3mm
×
2.6μm)，进样量5μl，柱温40℃，流速为0.3ml/min。流动相a：2mmol乙酸铵溶液(含有0.1％甲酸)，流动相b：乙腈。洗脱梯度：0～0.5min，95％流动相a，
0.5～7min，95％～85％流动相a，7～9.5min，85％～40％流动相a，9.5～9.6min，40％～5％流动相a，9.6～11min，5％流动相a，11～11.5，5％～95％流动相a，13min，95％流动相a。质谱条件：离子源：电喷雾离子源(esi)；扫描模式：多反应监控(mrm)；气帘气：40psi；针电流：3ma；离子化温度：500℃；喷雾电压：5kv；碰撞气：中等。
[0059]
通过准一级吸附动力学模型和准二级吸附动力学模型对实验数据进行拟合，结果如图5、图6和表1所示。结果表明tpbd-cooh的吸附过程符合准二级动力学模型，其中所有拟合曲线的相关系数r2均大于0.99，表明该材料对杂环胺的吸附方式由化学过程控制，羧基可以和杂环胺分子环外氨基形成氢键和静电相互作用，使得材料与杂环胺之间形成较强的亲和力。对比得知，二级动力学模型拟合得到的平衡吸附量与实验数据基本一致，达到吸附平衡之后，tpbd-cooh对杂环胺的平衡吸附量为255.10～534.76μg
·
g-1
，吸附速率常数为0.0021～0.0235g
·
μg-1
·
min-1
，表明tpbd-cooh对杂环胺具有较强的吸附作用。
[0060]
表1 tpbd-cooh对于杂环胺的吸附动力学模型拟合参数表
[0061][0062][0063]
通过等温吸附模型对tpbd-cooh的吸附机理进行探究，分别配置浓度为100、200、300、400、500μg
·
l-1
的16种杂环胺标准混合溶液，准确称取2mgtpbd-cooh加入到装有2ml杂环胺标准混合液的离心管中，室温下以500r/min的转速磁力搅拌30min，然后测定吸附后上清液中的杂环胺浓度，得到tpbd-cooh的平衡吸附量与平衡时吸附溶液中杂环胺浓度的关系，并通过langmiur模型和freundlich模型进行拟合，得到两种模型的曲线和相应参数如
图7、图8和表2所示。两种模型对tpbd-cooh吸附杂环胺的作用方式均具有一定参考价值，实验数据拟合结果更符合freundlich模型即多层吸附。通过freundlich模型计算出的弗伦德利希常数n》1，表明tpbd-cooh材料对16种杂环胺的吸附方式属于有利吸附，证明tpbd-cooh材料是一种性能优异的杂环胺吸附材料。
[0064]
表2 tpbd-cooh对于杂环胺的等温吸附模型拟合参数表
[0065][0066][0067]
实施例3不同吸附条件和解吸条件对所制备吸附剂的萃取效率的影响
[0068]
(1)吸附溶剂
[0069]
本实施例根据聚丙烯薄膜的性质考察了吸附工作液对吸附效率的影响，工作液环境分别设置了10％、30％、50％、70％、90％的甲醇水溶液，结果如图9(a)所示，膜保护微固相萃取装置在50％的甲醇水环境中对杂环胺的萃取效率最高。
[0070]
(2)吸附时间
[0071]
本实例考察了吸附时间对吸附效率的影响，分别探究了萃取时间5、10、20、30、60、
90、120min，结果如图9(b)所示，吸附装置在30min时达到一次平衡，为了保证吸附效率并节约时间，故选择30min为最佳吸附时间。
[0072]
(3)解吸溶剂
[0073]
不同的溶剂对杂环胺的亲和力不同，选择常用的杂环胺提取溶剂甲醇、乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷作为解吸溶剂，解吸结果如图10(a)所示。甲醇和乙腈对杂环胺均具有较好的解吸效果，甲醇的解吸效果更好且其价格相对较低，故选择甲醇为解吸溶剂。
[0074]
(4)解吸时间
[0075]
解吸时间对于萃取效率的影响较大，但是考虑到超声对tpbd-cooh的骨架结构有一定影响，因此设置分别解吸3、6、9、12、15min，结果如图10(b)所示，在尽可能缩短超声时间的同时达到较好的解吸效果，选择6min为最佳解吸时间。
[0076]
实施例4基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取结合hplc-ms检测焙烤食品中杂环胺的方法学考察
[0077]
样品的预处理：准确称取5g的广式月饼，将其粉碎后转入烧杯中，加入15ml乙腈和10ml1.0mnaoh溶液，涡旋均质5min。然后将均质后的样品在室温下超声提取30min，4000r/min离心15min，收集上清液，对剩余的残渣重复上述操作两次，合并上清液。将全部杂环胺提取液在40℃进行旋转蒸发去除溶剂，并用5ml50％的甲醇水溶液复溶，复溶后的溶液转入到20ml离心管中，将ph调至2。
[0078]
标准曲线绘制：将16种杂环胺用预处理过的样品溶液配制成一系列浓度(5～500μg
·
l-1
)的标准混合溶液。
[0079]
杂环胺的萃取及检测：将0.22μm的聚丙烯微孔滤膜剪成1.2
×
2.4cm的方形纸条，然后将纸条沿长边对折，用封口机将两侧边密封，形成一个开口的袋状物，准确称取5mgtpbd-cooh置于口袋中，然后用封口机将开口封住，制备成膜保护微固相萃取装置，如图1(b)所示。将上述装置分别在超纯水和甲醇中超声5min进行活化，将活化后的装置投入到处理好的样品溶液中，在室温下700r/min磁力搅拌30min，然后将装置用镊子取出，用超纯水冲洗干净后放入到盛有1ml甲醇的血清瓶中，超声解吸6min。然后将解吸液在40℃条件下用氮气吹干，用0.2ml30％的甲醇水溶液复溶，通过0.22μm的微孔滤膜过滤后装入2ml液相进样瓶。将待测液用hplc-ms检测，检测条件如实施例2中所述。最终获得的方法学数据如表3所示，16种杂环胺的线性范围为5-500μg
·
l-1
，所有杂环胺的基质标准曲线的相关系数r2均大于0.99，最低检测限lod和最小定量限loq的范围分别为0.037～1.050μg
·
l-1
和0.093～1.957μg
·
l-1
。
[0080]
表3基于羧基化共价有机框架材料的微固相萃取结合hplc-ms检测杂环胺的方法学
[0081][0082]
实施例5基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置对市售广式月饼中杂环胺的检测
[0083]
本实例对市售的广式月饼中的杂环胺进行了定量检测，具体操作步骤如下：
[0084]
样品的预处理：准确称取5g的广式月饼，将其粉碎后转入烧杯中，加入15ml乙腈和10ml 2m的naoh溶液，涡旋均质5min。然后将均质后的样品在室温下超声提取30min，4000r/min离心15min，收集上清液，对剩余的残渣重复上述操作两次，合并上清液。将全部杂环胺提取液在40℃进行旋转蒸发去除溶剂，并用4ml 50％的甲醇水溶液复溶，复溶后的溶液转入到20ml离心管中，将ph调至3。
[0085]
标准曲线绘制：将16种杂环胺用处理过的样品溶液配制成一系列浓度(5～500μg
·
l-1
)的标准混合溶液。
[0086]
杂环胺的萃取及检测：将0.22μm的聚丙烯微孔滤膜剪成1.5
×
3.0cm的长方形纸条，然后将纸条沿长边对折，用封口机将两侧边密封，形成一个开口的袋状物，准确称取10mg tpbd-cooh置于口袋中，然后用封口机将开口封住，制备成膜保护微固相萃取装置。将上述装置分别在超纯水和甲醇中超声5min进行活化，将活化后的装置投入到处理好的样品溶液中，在室温下500r/min磁力搅拌30min，然后将装置用镊子取出，用超纯水冲洗干净后放入到盛有0.5ml甲醇的血清瓶中，超声解吸6min。然后将解吸液在40℃条件下用氮气吹干，用0.1ml50％的甲醇水溶液复溶，通过0.22μm的微孔滤膜过滤后装入2ml液相进样瓶。将待测液用hplc-ms检测，检测条件如实施例2中所述。检测结果如表4所示，广式月饼中的杂环胺的种类包括iq、meiq、iqx、phip以及harman等12种，其中norharman的含量达14.4ng/g，
含量最高，phip、meiq和iqx的含量均超过10ng/g。
[0087]
表4广式月饼中的杂环胺含量
[0088][0089]arsd表示相对标准偏差；an.q.表示在检测限以上，定量限以下，无法定量。
[0090]
实施例6基于羧基化共价有机框架材料的膜保护微固相萃取装置对肉馅杏仁饼中杂环胺的检测
[0091]
本实例对市售的肉馅杏仁饼中的杂环胺进行了检测，具体操作步骤如下：
[0092]
样品的预处理：准确称取5g的广式月饼，将其粉碎后转入烧杯中，加入15ml乙腈和10ml5mnaoh溶液，涡旋均质5min。然后将均质后的样品在室温下超声提取30min，4000r/min离心15min，收集上清液，对剩余的残渣重复上述操作两次，合并上清液。将全部杂环胺提取液在40℃进行旋转蒸发去除溶剂，并用4ml 50％的甲醇水溶液复溶，复溶后的溶液转入到20ml离心管中，将ph调至3。
[0093]
标准曲线绘制：将16种杂环胺用处理过的样品溶液配制成一系列浓度(5～500μg
·
l-1
)的标准混合溶液。
[0094]
杂环胺的萃取及检测：将0.22μm的聚丙烯微孔滤膜剪成1.5
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3.0cm的长方形纸条，然后将纸条沿长边对折，用封口机将两侧边密封，形成一个开口的袋状物，准确称取
10mg tpbd-cooh置于口袋中，然后用封口机将开口封住，制备成膜保护微固相萃取装置。将上述装置分别在超纯水和甲醇中超声5min进行活化，将活化后的装置投入到处理好的样品溶液中，在室温下500r/min磁力搅拌30min，然后将装置用镊子取出，用超纯水冲洗干净后放入到盛有0.5ml甲醇的血清瓶中，超声解吸6min。然后将解吸液在40℃条件下用氮气吹干，用0.1ml30％的甲醇水溶液复溶，通过0.22μm的微孔滤膜过滤后装入2ml液相进样瓶。将待测液用hplc-ms检测，检测条件如实施例2中所述。检测结果如表5所示，肉馅杏仁饼中含有11种has，包括iq、meiq、iqx、phip、7,8-dimeiqx、4,8-dimeiqx6种极性has和harman、norharman、aαc、meaαc和glu-p-1等5种非极性has，其中norharman的含量最高为26.1ng/g。
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表5肉馅杏仁饼中的杂环胺含量
[0096][0097][0098]arsd表示相对标准偏差；an.q.表示在检测限以上，定量限以下，无法定量。
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上述实施例为本专利公开较佳的实施方式，但本专利公开的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本专利的保护范围之内。