玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用

本发明涉及蛋白质组学分析，特别涉及玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用。

背景技术：

1、翻译后修饰（ptms）在扩展蛋白质组的复杂性方面发挥着重要作用。其中，糖基化作为最重要和最基本的翻译后修饰之一，广泛存在于人体分泌的蛋白质中。蛋白质糖基化参与各种必要的细胞活动，比如信号转导、细胞增殖和细胞凋亡。此外，一些疾病的发生与蛋白糖基化异常密切相关，如神经退行性疾病、遗传病、肺病、糖尿病和癌症等。同时，新型冠状病毒病（covid-2019）的研究结果表明，冠状病毒的糖基化蛋白与受体结合和细胞侵袭过程密切相关。因此，阐明糖基化程度和部位的相关信息对于及时诊断和随后的疾病靶向治疗具有重要意义。健康个体和患病个体之间的糖基化水平差异较小，因此需要借助有效工具对蛋白质糖基化水平进行全面分析。质谱（ms）以其高通量、操作简单、灵敏度高、即时性等优点在蛋白质糖基化分析中占据主要地位。然而，在直接检测生物样品的过程中，糖肽的信号很容易受到其他高丰度非糖肽和杂质的干扰而被抑制。因此，在ms检测之前，对糖肽进行选择性富集和分离至关重要。

2、在以往的糖蛋白/糖肽富集策略中，依靠糖肽比非糖肽更高的亲水性，亲水相互作用液相色谱法（hilic）得到了广泛应用。hilic有着优异的ms兼容性、不破坏糖肽的结构和选择性分离等特性。但基于hilic富集糖肽的材料受限于原材料成本高、化学消耗大、不环保、耗时长、材料制备过程复杂等问题。

3、因此，发展一种天然环保的亲水相互作用液相色谱法类材料，用于选择性分离和富集糖肽是一种新的需求，为此我们提出玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法包括以下步骤：

3、步骤一，将三氟乙酸、去离子水和乙腈按照一定体积比配置成上样缓冲液；

4、步骤二，将带玉米淀粉、上样缓冲液、目标糖基化肽段溶液在预定温度下孵育预定的时间；

5、步骤三，用上样缓冲液三次洗涤，然后加入三氟乙酸、去离子水和乙腈按照一定体积比配置成的洗脱缓冲液，在预定温度下洗脱预定的时间，离心分离获取上清液；

6、步骤四。进行maldi-tof ms或nanolc-ms/ms检测。

7、优选的，所述玉米淀粉为天然的玉米淀粉，且所述玉米淀粉无需其他预处理加工。

8、优选的，所述上样缓冲液由3%体积比的三氟乙酸、7%体积比的去离子水和90%体积比的乙腈组成。

9、优选的，所述洗脱缓冲液由0.1%体积比的三氟乙酸、69.9%体积比的去离子水和90%体积比的乙腈组成。

10、优选的，在所述步骤二中的孵化温度为37℃，在所述步骤三中洗脱温度为37℃。

11、优选的，在所述步骤二中孵化的时间为两小时，在所述步骤三中洗脱的时间为一小时。

12、本发明的技术效果和优点：

13、本发明利用天然、可再生和可生物降解的玉米淀粉基于亲水相互作用液相色谱法富集糖肽，由于含有碳基生物质和多孔结构，未经复杂预处理的蛋壳可以有效富集样品中的糖肽，玉米淀粉的直接应用避免了繁琐的合成方法、材料合成时间长、成本高以及化学品可能对环境造成的污染。

技术特征：

1.玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，所述玉米淀粉为天然的玉米淀粉，且所述玉米淀粉无需其他预处理加工。

3.根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，所述上样缓冲液由3％体积比的三氟乙酸、7％体积比的去离子水和90％体积比的乙腈组成。

4.根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液由0.1％体积比的三氟乙酸、69.9％体积比的去离子水和90％体积比的乙腈组成。

5.根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，在所述步骤二中的孵化温度为37℃，在所述步骤三中洗脱温度为37℃。

6.根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，在所述步骤二中孵化的时间为两小时，在所述步骤三中洗脱的时间为一小时。

技术总结
本发明公开了玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法为：将三氟乙酸、去离子水和乙腈配置成上样缓冲液；将带玉米淀粉、上样缓冲液、目标糖基化肽段溶进行孵育；用上样缓冲液三次洗涤，加入三氟乙酸、去离子水和乙腈配置成的洗脱缓冲液，洗脱一段时间，离心分离获取上清液；进行MALDI‑TOF MS或NanoLC‑MS/MS检测。本发明利用天然、可再生和可生物降解的玉米淀粉基于亲水相互作用液相色谱法富集糖肽，由于含有碳基生物质和多孔结构，未经复杂预处理的蛋壳可以有效富集样品中的糖肽，玉米淀粉的直接应用避免了繁琐的合成方法、材料合成时间长、成本高以及化学品可能对环境造成的污染。

技术研发人员：张顺,蔡挺,冯铨受,闫迎华,丁传凡,熊资
受保护的技术使用者：中国科学院大学宁波华美医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16