一种用HPLC分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法与流程

本发明涉及分析化学，具体涉及一种用hplc分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法。

背景技术：

1、达格列净(dapagliflozin，商品名farxiga)，由百时美施贵宝和阿斯利康公司联合开发的一种新型的抗糖尿病药物，于2012年11月12日被欧洲药品管理局批准上市，是第一个获准上市用于治疗2型糖尿病的sglt2抑制剂。2014年1月8日获美国fda批准上市，用于改善2型糖尿病成人患者的血糖控制。达格列净是一种新的钠-葡萄糖协同转运蛋白2(sglt2)抑制剂药物，通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，.增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。其分子式：c21h25clo6·c3h8o2·h2o分子量：502.98，化学结构如下式(1)：

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3、5-溴-2-氯-4'-乙氧基二苯甲烷为达格列净合成关键的起始原料，分子式：c15h14brclo，分子量：325.63，化学结构式如下式(2)：

4、

5、该起始原料在制备过程中，因原料、合成工艺、降解等多种因素产生多个杂质，5-溴-2-氯-4'-乙氧基二苯甲烷合成工艺：

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7、杂质产生情况如下：

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10、该主要的起始原料的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品达格列净的质量，所以建立一种操作简单、稳定有效的分析检测方法对达格列净主要的起始原料进行分析检测是非常必要的。

11、cn114577944a公开了一种5-溴-2-氯-4’-乙氧基二苯甲烷中有关物质的检测方法，对12个杂质进行检测分离，各杂质结构如下：

12、

13、该专利并没给出5-溴-2-氯-4’-乙氧基二苯甲烷的合成工艺，从杂质结构判断，考察了物料、中间体及副产物杂质，其中sm1-9-1、sm1-9-2、sm1-9-3均为物料sm1-a的杂质，随着sm-1的合成工艺生成相应的副产物杂质，sm1-9-1、sm1-9-2、sm1-9-3在sm-1中存在的风险极低；另外物料带入的杂质和工艺过程中产生的副产物远不能满足实际生产过程中质量控制的需求。参照达格列净片进口标准jx20140204，其有关物质控制了4个已知杂质，这些杂质均与5-溴-2-氯-4’-乙氧基二苯甲烷的杂质(e、i、l、c)相关，而cn 114577944 a并没控制杂质e、l、c。达格列净片进口标准jx20140204有关物质控制的杂质结构及分析如下

14、

技术实现思路

1、为了克服现有技术存在的上述技术问题，本发明人在进行了大量的深入研究之后，提供了一种用hplc分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法，具有快速简便、灵敏度高、分离度好的优点。

2、本发明采用的技术方案是：

3、一种用hplc分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法，包括如下步骤：

4、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.002％～0.1％(v/v)磷酸水溶液为流动相a、乙腈-甲醇混合比为流动相b，进行梯度洗脱；流速为0.8～1.2ml/min；柱温为30～40℃；采用紫外检测器进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。

5、所述的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，优选agilent 5tc-c18250×4.6mm及纳普chromcore 120c185μm 250mm×4.6mm；

6、所述的流动相a为0.002％～0.1％(v/v)磷酸水溶液，流动相为酸性条件主要影响杂质k色谱峰的保留时间及峰型，优选0.02％(v/v)；

7、所述的流动相b为乙腈-甲醇混合比，体积比为乙腈-甲醇(5:95～20:80)，增加乙腈的比例，杂质c与杂质r、杂质d与杂质f的分离度降低；降低乙腈的比例，杂质e与杂质h分离度降低；优选乙腈-甲醇(10:90)；

8、所述梯度洗脱的条件为：

9、 时间，分钟 流动相a，体积％ 流动相b，体积％ 0 20～30 45～70 5 18 75 35 12 95 45 10 95

10、优选：

11、 时间，分钟 流动相a，体积％ 流动相b，体积％ 0 35 65 5 35 75 35 5 95 45 5 95

12、由此得到的分离效果最佳。

13、所述的流速为0.8～1.2ml/min，优选1.0ml/min。

14、所述的柱温为30～40℃，优选35℃。

15、外检测器外检测器的检测波长为205～230nm，本品经紫外扫描，在205-230nm处有强吸收，且最大吸收约在226nm，故优选226℃。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

17、本发明所述的用hplc分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法，通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，可以将达格列净关键起始原料中的杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i、杂质j、杂质k和杂质l在同一色谱条件进行快速高效的分离，并且该检测方法灵敏度高、专属性强、快速简便、操作方便，可有效控制其的质量，适用于分离测定达格列净关键起始原料的有关物质。