一种乙基多杀菌素原药中多种杂质的制备及表征方法和用途与流程

本发明属于农药分析，具体涉及一种乙基多杀菌素原药中杂质的制备及表征方法和用途。

背景技术：

1、乙基多杀菌素(spinetoram)是美国陶氏益农公司研发生产的新一代低毒生物源杀虫剂，乙基多杀菌素原药的有效成分是乙基多杀菌素-j和乙基多杀菌素-l的混合物，二者的杀菌生物活性无显著差异。乙基多杀菌素是多杀菌素的换代产品，是一种高效、广谱性杀虫剂，可用于防治鳞翅目害虫，如小菜蛾、夜蛾、苹果蠹蛾、梨小食心虫、卷叶蛾以及潜叶蝇、蓟马等，其对哺乳动物较安全，对环境较友善，具生物农药的安全性和化学合成农药的速效性特点，被广泛应用于农业生产中。

2、目前已有文献通过高效液相色谱法和液质联用的方法对乙基多杀菌素原药进行定性定量的研究，但是关于乙基多杀菌素原药杂质的研究较少，尤其是其杂质制备方面的相关研究尚未见报道。因此，为满足乙基多杀菌素农药原药全组分分析研究的需要，急需提供一种乙基多杀菌素原药中杂质制备方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种乙基多杀菌素原药中多种杂质的制备方法。

2、本发明的另一目的是提供一种乙基多杀菌素原药中多种杂质的表征方法。

3、本发明提供一种乙基多杀菌素原药中多种杂质的制备方法，其特征在于，所述杂质包括yjds-1、yjds-2、yjds-3、yjds-4、yjds-5、yjds-6、yjds-7、yjds-8、yjds-10、yjds-11、yjds-12、yjds-13、yjds-14，所述杂质结构式分别为：

4、

5、

6、当所述杂质为yjds-1、yjds-2、yjds-4、yjds-5、yjds-7、yjds-10、yjds-11、yjds-12时，所述杂质的制备方法包括如下步骤：

7、a1：称取5g乙基多杀菌素原药于250ml圆底烧瓶中，加入石油醚和乙酸乙酯各100ml超声10分钟，过滤，收集滤液，减压除去溶剂后得油状粗品；将粗品分别用10ml石油醚溶解得粗品溶液，备用；

8、a2：取层析柱，向其中加入100g中性氧化铝，压紧，将步骤a1的粗品溶液加到层析柱上，分别用石油醚、石油醚/乙酸乙酯＝30:1、石油醚/乙酸乙酯＝15:1、石油醚/乙酸乙酯＝4:1、石油醚/乙酸乙酯＝2:1、乙酸乙酯各500ml，冲洗层析柱，分别收集洗脱液，减压浓缩得第一馏分、第二馏分、第三馏分、第四馏分、第五馏分、第六馏分；

9、a3：将步骤a2所得第一馏分、第二馏分、第五馏分分别用乙酸乙酯溶解后，采用薄层制备色谱制备得各杂质粗品，将杂质粗品用乙腈溶解后通过液相制备色谱进行纯化；将步骤a2所得第四馏分、第六馏分分别用乙腈溶解后，采用液相制备色谱对各馏分中的一种或多种杂质进行分离和纯化。

10、当所述杂质为yjds-3、yjds-6、yjds-8、yjds-13时，所述杂质的制备方法包括如下步骤：

11、b1：称取5g乙基多杀菌素原药于250ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷/甲醇＝10：1的混合溶剂100ml，超声10分钟，过滤，收集滤液，减压除去溶剂后得油状粗品；将粗品用10ml二氯甲烷溶解得粗品溶液，备用；

12、b2：取层析柱，分别向其中加入100g硅胶粉，压紧，将步骤b1所得粗品溶液加到层析柱上，分别用二氯甲烷/甲醇＝50:1、二氯甲烷/甲醇＝20:1各500ml，冲洗层析柱，分别收集洗脱液，减压浓缩得50：1的馏分、20：1的馏分；

13、b3：将步骤b2所得馏分分别用乙腈溶解，分别采用液相制备色谱对各馏分中的一种或多种杂质进行分离和纯化。

14、当所述杂质为yjds-14时，所述杂质的制备方法包括如下步骤：

15、c1：称取适量乙基多杀菌素原药用乙腈溶解，采用液相制备色谱制备得杂质yjds-14。

16、优选为，步骤a2的中性氧化铝、步骤b2的硅胶粉规格均为100～200目。。

17、优选为，步骤a2、b2中，层析柱的规格为30mm×300mm。

18、步骤a3中，所述薄层制备色谱的具体操作步骤为：将第一馏分、第二馏分、第五馏分分别均匀涂抹于薄层板上，分别用乙酸乙酯/石油醚＝4：1、乙酸乙酯/石油醚＝4：1、乙酸乙酯/石油醚＝2：1的混合溶剂展开，晾干后刮下每一块薄层析板上除主成分以外的色带，将薄层色带分别置于含有20ml乙酸乙酯溶剂的三角瓶中，超声10分钟，用六孔漏斗抽滤，并用50ml乙酸乙酯分三次洗涤，收集滤液，减压去除溶剂后分别得杂质yjds-7、yjds-10、yjds-5、yjds-1粗品。

19、步骤a3、b3和c1中，所述液相制备色谱的条件为：以extend-c18(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为0.5μm)为色谱柱；以0.1％氨水溶液、乙腈为流动相，柱温为30℃，流速为1.00ml/min，检测波长为254nm，进样量20μl，按各杂质的梯度洗脱程序进行洗脱，收集主要色谱峰，减压浓缩干燥即得各杂质纯品；

20、所述各杂质的梯度洗脱程序分别为：

21、杂质yjds-7、yjds-10的洗脱程序为：

22、

23、

24、第四馏分(杂质yjds-11、yjds-12)的洗脱程序为：

25、

26、杂质yjds-1的洗脱程序为：

27、

28、第六馏分(杂质yjds-2、yjds-4)的洗脱程序为：

29、

30、50：1的馏分(杂质yjds-3、yjds-6)的洗脱程序为：

31、

32、20：1的馏分(yjds-8、yjds-13)的洗脱程序为：

33、

34、

35、杂质yjds-14的洗脱程序为：

36、

37、本发明制备方法制得的杂质yjds-1、yjds-2、yjds-3、yjds-4、yjds-5、yjds-6、yjds-7、yjds-8、yjds-10、yjds-11、yjds-12、yjds-13、yjds-14的表征方法，采用液相色谱质谱连用对各杂质进行定性分析。

38、液相色谱的操作条件为：色谱柱为extend-c18(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以5mmol/l乙酸铵水/乙腈＝20:80为流动相；柱温为30℃；流速为1.00ml/min；检测波长为254nm，进样量20μl。

39、质谱的操作条件为：离子源：esi；采集模式：yjds-1、yjds-2、yjds-3、yjds-4、yjds-5、yjds-6、yjds-7、yjds-8、yjds-11、yjds-12、yjds-13、yjds-14为正离子模式；yjds-10为负离子模式；扫描模式：全扫描；扫描范围：m/z＝50～1000；碰撞解离电压：70v；干燥气温度：300℃；干燥气流速：7l/min；雾化器压力：15psi；毛细管电压：4000v。

40、本发明经表征后的杂质yjds-1、yjds-2、yjds-3、yjds-4、yjds-5、yjds-6、yjds-7、yjds-8、yjds-10、yjds-11、yjds-12、yjds-13、yjds-14中的一种或多种作为标准样品或标准物质用于乙基多杀菌素原药全组分分析中杂质的定性和/或定量分析中的应用。

41、本发明的有益效果是：本发明采用超声、柱层析的手段来提取、分离和富集乙基多杀菌素原药中的杂质，然后再利用薄层色谱和液相制备色谱分离纯化得到杂质，该方法制得的杂质收率好，产品纯度高，可以用于对乙基多杀菌素原药中多种杂质进行定性及定量分析，从而对乙基多杀菌素原药的质量控制起到重要作用，且该方法操作简单、经济可行、通用性较强，为后续乙基多杀菌素原药质量控制相关研究提供了技术参考。