一种鉴别布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法

本发明涉及兽用疫苗检测，特别是涉及一种鉴别布鲁氏菌a19-△virb12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法。

背景技术：

1、布鲁氏菌病(brucellosis)(简称布病)是由布鲁氏菌属(brucella.spp)细菌感染引起的一种严重危害畜牧业生产和人类公共卫生安全的人畜共患传染病，该病呈世界性流行。预防和根除布鲁氏菌病，已经成为构建国家和地区公共卫生安全防御体系的主要任务。带菌动物是感染其他动物和人类的主要传染源。因此，从源头遏制畜间布病疫情上升趋势是控制人间布病的重要前提。

2、布病流行区采取以疫苗接种为主、检疫-扑杀为辅的防控策略。布病疫苗为弱毒活疫苗，存在引起人和动物感染布病的潜在风险。在布病免疫地区，布病传染源主要包含两个方面，即布病自然感染动物和疫苗感染的动物。如在布鲁氏菌疫苗a19-△virb12株免疫地区，依疫苗说明书对牛接种a19-△virb12疫苗后，约80％动物在30d均检测到a19-△virb12疫苗免疫抗体，180d后约85％动物的免疫抗体消失检测不到。15％动物的免疫抗体可在机体持续存在1年以上，严重干扰了布病法定“一年两检”的血清学检测。

3、由于动物个体的差异性，免疫抗体在动物机体存在时间长短参差不齐。布病疫苗为弱毒活疫苗，对人和动物有一定致病性。因此，持续抗体阳性的动物也存在疫苗感染抗体，这部分动物会通过尿液、粪便或其他方式排菌，给生态环境、养殖人员都带来感染和致病风险。根据新疆地方标准(db 65/t 4495—2022)建立的间接酶联免疫吸附实验解决了鉴别区分布病自然感染动物与a19-△virb12疫苗免疫动物难题，但目前还没有鉴别布病a19-△virb12疫苗感染动物的血清学方法，延缓了动物布鲁氏菌病的根除和净化进程。

4、鉴于目前家畜布病防控压力和现状，建立一种鉴别布鲁氏菌a19-△virb12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种鉴别布鲁氏菌a19-△virb12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法，解决了布病疫苗a19-δvirb12免疫动物与该疫苗感染动物无法鉴别区分的难题，有助于实现动物布病的精准防控，加速推进了布病防控净化进程。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供了一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，包括利用nh-agid方法对所述血清进行抗体鉴别的步骤。

4、进一步的，所述nh-agid方法利用布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板进行；所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板，中心具有一个抗原孔，侧面具有6个加样孔以及nh抗原抗体复合物沉淀线。

5、进一步的，所述血清学检测方法具体包括以下步骤：

6、(1)在所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板的中心抗原孔中加入s-lps和nh混合抗原；

7、(2)在所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板的一个侧面加样孔中加入布鲁氏菌病标准阳性血清；

8、(3)在所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板的一个侧面加样孔中加入布鲁氏菌病标准阴性血清；

9、(4)在所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板的其余侧面加样孔中分别加入待测样品血清；

10、(5)待加样孔中的液体吸干后，将琼脂平板倒置于湿盒内，孵育16h～48h。

11、进一步的，判定方法为：检测时未出现nh抗原抗体复合物沉淀线，则为a19-δvirb12疫苗免疫动物，若出现了nh抗原抗体复合物沉淀线，则为布鲁氏菌感染动物。

12、进一步的，所述s-lps、所述nh混合抗原、所述布鲁氏菌病标准阳性血清、所述布鲁氏菌病标准阴性血清和所述待测样品血清的添加量均为15μl。

13、进一步的，在步骤(5)中，孵育的温度为25℃。

14、本发明公开了以下技术效果：

15、本发明提供了一种鉴别布鲁氏菌a19-△virb12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法，nh-agid血清学方法可鉴别诊断a19-△virb12疫苗免疫抗体和感染抗体，有助于识别布病疫苗感染动物。nh-agid方法的应用充分完善了动物布病a19-△virb12疫苗防控技术体系内容，是对生产中布病感染动物和疫苗免疫动物鉴别诊断方法的补充，应用该方法从根本上解决了全面及时清除畜群中布病传染源的难题，有效阻断了布病疫情的蔓延和扩散，为实现牛布病的精准防控提供技术支撑。

技术特征：

1.一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，包括利用nh-agid方法对血清进行抗体鉴别的步骤。

2.根据权利要求1所述的一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，所述nh-agid方法利用布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板进行；所述布鲁氏菌半抗原琼脂扩散试验平板，中心具有一个抗原孔，侧面具有6个加样孔以及nh抗原抗体复合物沉淀线。

3.根据权利要求2所述的一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，所述血清学检测方法具体包括以下步骤：

4.根据权利要求2所述的一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，判定方法为：检测时未出现nh抗原抗体复合物沉淀线，则为a19-δvirb12疫苗免疫动物，若出现了nh抗原抗体复合物沉淀线，则为布鲁氏菌感染动物。

5.根据权利要求3所述的一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，所述s-lps、所述nh混合抗原、所述布鲁氏菌病标准阳性血清、所述布鲁氏菌病标准阴性血清和所述待测样品血清的添加量均为15μl。

6.根据权利要求3所述的一种牛布病a19-δvirb12疫苗的血清学检测方法，其特征在于，在步骤(5)中，孵育的温度为25℃。

技术总结
本发明公开了一种鉴别布鲁氏菌A19‑△VirB12疫苗免疫动物与感染动物的血清学方法，属于兽用疫苗检测技术领域，包括利用NH‑AGID方法对所述血清进行抗体鉴别的步骤。该方法有助于完善动物布病A19‑△VirB12疫苗防控技术体系，弥补无法鉴别A19‑△VirB12疫苗免疫动物的短板，为实现牛布病的精准防控提供技术支撑。该方法的应用将加速布病A19‑△VirB12疫苗替代传统的A19疫苗的应用，开启了布病防控净化的新里程。

技术研发人员：叶锋,刘丽娅,马晓菁,易新萍,谷文喜,李岩,张旭,张家瑞,曹瑞
受保护的技术使用者：新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12