一种妇科白凤口服液的质量检测方法与流程

1.本发明属于药物质量检测技术领域，具体涉及一种妇科白凤口服液的质量检测方法。


背景技术：

2.妇科白凤口服液由乌鸡、艾叶、牛膝(盐制)、柴胡、干姜、白芍(酒炒)、牡丹皮、香附、延胡索(醋制)、知母、茯苓、黄连(酒制)、秦艽、当归、黄芪(炙)、青篙、地黄、熟地黄、川贝母、地骨皮二十味药材组成。该方具有补气养血之功效，主要用于妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛。
3.妇科白凤口服液作为中成药，其药效是多种活性成分共同作用的结果。方中，乌鸡补气养血，调经止痛，血足，则气和，气血调，则经行通畅，为君药；地黄、当归、白芍、香附、延胡索大补营血，养肝调经，调气和血，并可治经行腹痛，而达气血相调，共为臣药；丹皮、知母、秦艽、青蒿、贝母、黄连、地骨皮、干姜、艾叶、黄芪、茯苓清泄虚热，使虚热退而经血宁，并可治虚热灼津之咽干口燥，共为佐药；柴胡、牛膝调肝肾，共为使药。
4.目前收载于国家中成药标准汇编外科妇科分册的妇科白凤口服液现行质量标准建立了牛膝对照药材薄层鉴别方法、干姜对照药材薄层鉴别方法、延胡索对照药材薄层鉴别方法、丹皮酚对照品薄层鉴别方法、盐酸小檗碱对照品和盐酸巴马汀对照品的薄层鉴别方法5个定性鉴别方法与芍药苷1个成分含量测定方法；夏晶，盛莉玲，季申对妇科白凤口服液质量标准进行研究，建立了牛膝对照药材薄层鉴别方法、干姜对照药材薄层鉴别方法、延胡索对照药材薄层鉴别方法、丹皮酚对照品薄层鉴别方法、盐酸小檗碱对照品和盐酸巴马汀对照品的薄层鉴别方法5个定性鉴别方法与芍药苷、龙胆苦苷2个成分含量测定方法；宋桂萍、肖敏、陈俊等采用hplc法测定妇科白凤口服液中芍药苷1个成分的含量。
5.上述方法均仅监控一个或两个质量指标，由于中成药成分复杂，单一的指标质量控制较为局限，难以全面控制产品的质量，且操作较为复杂，而且对君药乌鸡未建立监控指标及方法，不能全面反映妇科白凤口服液的质量水平。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种妇科白凤口服液的质量检测方法，解决了现有技术中检测方法步骤繁琐、成本高以及无法同时对多个质量指标进行监控的问题。
7.为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种妇科白凤口服液的质量检测方法，该方法具体包括以下步骤：
8.该方法具体包括以下步骤：
9.参照物溶液的制备：取烟酰胺对照品、5-羟甲基糠醛对照品、马钱苷酸对照品、绿原酸对照品、龙胆苦苷对照品、阿魏酸对照品与山梨酸钾对照品适量，加水制成混合溶液，即得；
10.供试品溶液的制备：取妇科白凤口服液，过滤，即得；
11.色谱条件：色谱柱为c
18
反相色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为流动相a与流动相b组成的梯度洗脱液，流动相a为乙腈，流动相b为0.09～0.11％磷酸溶液；检测波长为260nm与300nm，柱温为29～31℃；流速为0.98ml/min～1.02ml/min；测定时间70分钟；
12.测定：精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到特征图谱，并对得到的色谱图进行分析，同时对妇科白凤口服液的质量进行评价。
13.优选地，所述洗脱梯度表如下所示：
[0014][0015]
优选地，精密吸取注入高效液相色谱仪的参照物溶液与供试品溶液的进样量为10～50μl。
[0016]
优选地，所述的妇科白凤口服液由下述重量份数的原药材按现有常规方法制成口服液：乌鸡108.8份、艾叶18.8份、牛膝(盐制)9.8份、柴胡9.8份、干姜4.5份、白芍(酒炒)9.8份、牡丹皮9.8份、香附75份、延胡索(醋制)4.5份、知母9.8份、茯苓12份、黄连(酒制)4.5份、秦艽6.8份、当归9.8份、黄芪(炙)9.8份、青篙18.8份、地黄9.8份、熟地黄18.8份、川贝母9.8份、地骨皮4.5份。
[0017]
与现有技术相比，通过采用本发明检测方法，不仅方法简便，成本低、专属性及耐用性强，而且一个检测方法即可监控烟酰胺、5-羟甲基糠醛、马钱苷酸、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸与山梨酸钾七个成分，监控乌鸡、艾叶、白芍、牡丹皮、香附、黄连、秦艽、当归、青蒿、熟地黄十个药味与蜂蜜、山梨酸钾两个辅料，实现了同时对多质量指标进行监控，可全面的对妇科白凤口服液的内在质量进行控制与评价，保证药品质量的稳定性、有效性与安全性。
附图说明
[0018]
下面结合附图对本发明做进一步详细的说明。
[0019]
图1为妇科白凤口服液特征图谱检测方法的全波长扫描图；
[0020]
图2为15批妇科白凤口服液特征图谱匹配图(300nm)；
[0021]
图3为妇科白凤口服液标准特征图谱(300nm)；
[0022]
图4为15批妇科白凤口服液特征图谱匹配图(260nm)；
[0023]
图5为妇科白凤口服液标准特征图谱(260nm)。
具体实施方式
[0024]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0025]
本发明实施例提供的一种妇科白凤口服液的质量检测方法，该方法具体包括以下步骤：
[0026]
参照物溶液的制备：取烟酰胺对照品、5-羟甲基糠醛对照品、马钱苷酸对照品、绿
原酸对照品、龙胆苦苷对照品、阿魏酸对照品与山梨酸钾对照品适量，加水制成每1ml含烟酰胺0.05mg、5-羟甲基糠醛0.02mg、马钱苷酸0.1mg、绿原酸0.03mg、龙胆苦苷0.2mg、阿魏酸0.02mg、及山梨酸钾0.5mg的混合溶液，即得；
[0027]
供试品溶液的制备：取妇科白凤口服液，过滤，即得；
[0028]
色谱条件：色谱柱为c
18
反相色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为流动相a与流动相b组成的梯度洗脱液，流动相a为乙腈，流动相b为0.09～0.11％磷酸溶液；检测波长为260nm与300nm，柱温为29～31℃；流速为0.98ml/min～1.02ml/min；测定时间70分钟；
[0029]
测定：精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到特征图谱，并对得到的色谱图进行分析，同时对妇科白凤口服液的质量进行评价。
[0030]
进一步地，所述洗脱梯度表如下所示：
[0031][0032]
进一步地，所述的妇科白凤口服液由下述重量份数的原药材按现有常规方法制成口服液：乌鸡108.8份、艾叶18.8份、牛膝(盐制)9.8份、柴胡9.8份、干姜4.5份、白芍(酒炒)9.8份、牡丹皮9.8份、香附75份、延胡索(醋制)4.5份、知母9.8份、茯苓12份、黄连(酒制)4.5份、秦艽6.8份、当归9.8份、黄芪(炙)9.8份、青篙18.8份、地黄9.8份、熟地黄18.8份、川贝母9.8份、地骨皮4.5份。
[0033]
以下为对检测得到的色谱图进行分析的过程和原理(具体如图2-图5所示)：
[0034]
依据所得15批妇科白凤口服液的特征图谱，其中所述300nm下的特征图谱应具有12个特征峰，其中6号峰为龙胆苦苷，为s峰，归属于秦艽；1号峰为5-羟甲基糠醛，归属于熟地黄、蜂蜜；3号峰为绿原酸，归属于艾叶、青蒿；8号峰为阿魏酸，归属于香附、当归；9号峰为山梨酸钾，归属于山梨酸钾；其他特征峰均未明确成分，其中2、5、10、11、12号峰均归属于艾叶、青蒿，4号峰归属于黄连，7号峰归属于香附。
[0035]
260nm下的特征图谱应具有7个特征峰，其中7号峰为龙胆苦苷作为参照峰，为s峰，归属于秦艽；1号峰为烟酰胺，归属于乌鸡；6号峰为马钱苷酸，归属于秦艽；其他特征峰均未明确成分，其中2号峰归属于乌鸡，3号峰归属于白芍、牡丹皮，4号峰归属于熟地黄，5号峰归属于牡丹皮、香附；各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：
[0036]
1号峰：相对保留时间0.114
±
0.001，相对标准偏差为0.18％；
[0037]
2号峰：相对保留时间0.197
±
0.001，相对标准偏差为0.17％；
[0038]
3号峰：相对保留时间0.362
±
0.001，相对标准偏差为0.13％；
[0039]
4号峰：相对保留时间0.477
±
0.001，相对标准偏差为0.09％；
[0040]
5号峰：相对保留时间0.762
±
0.001，相对标准偏差为0.07％；
[0041]
6号峰：相对保留时间0.785
±
0.009，相对标准偏差为0.32％；
[0042]
7号峰：相对保留时间1.000
±
0.000，相对标准偏差为0.00％。
[0043]
其中所述300nm波长下特征图谱具有12个特征峰，其中1号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为绿原酸，6号峰为龙胆苦苷作为参照峰，8号峰为阿魏酸，9号峰为山梨酸钾。各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：
[0044]
1号峰：相对保留时间0.433
±
0.001，相对标准偏差为0.08％；
[0045]
2号峰：相对保留时间0.692
±
0.001，相对标准偏差为0.06％；
[0046]
3号峰：相对保留时间0.897
±
0.001，相对标准偏差为0.04％；
[0047]
4号峰：相对保留时间0.920
±
0.001，相对标准偏差为0.03％；
[0048]
5号峰：相对保留时间0.945
±
0.001，相对标准偏差为0.04％；
[0049]
6号峰：相对保留时间1.000
±
0.000，相对标准偏差为0.00％；
[0050]
7号峰：相对保留时间1.194
±
0.001，相对标准偏差为0.05％；
[0051]
8号峰：相对保留时间1.309
±
0.006，相对标准偏差为0.13％；
[0052]
9号峰：相对保留时间1.365
±
0.001，相对标准偏差为0.04％；
[0053]
10号峰：相对保留时间1.546
±
0.002，相对标准偏差为0.07％；
[0054]
11号峰：相对保留时间1.583
±
0.001，相对标准偏差为0.06％；
[0055]
12号峰：相对保留时间1.682
±
0.002，相对标准偏差为0.07％。
[0056]
此外，构建得到的妇科白凤口服液的260nm波长下的hplc标准特征图谱是由7个特征峰构成，以对照品对照，1号峰为烟酰胺，6号峰为马钱苷酸，7号峰为龙胆苦苷，以龙胆苦苷为参照物，7号峰为参照峰，以参照峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的
±
5％之内，规定值为峰1：0.11，峰2：0.20，峰3：0.36，峰4：0.48，峰5：0.76，峰6：0.79，峰7(s)：1.00；构建得到的妇科白凤口服液的300nm波长下的hplc标准特征图谱是由12个特征峰构成，以对照品对照，1号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为绿原酸，6号峰为龙胆苦苷，8号峰为阿魏酸，9号峰为山梨酸钾，以龙胆苦苷为参照物，6号峰为参照峰，以参照峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的
±
5％之内，规定值为峰1：0.43，峰2：0.69，峰3：0.90，峰4：0.92，峰5：0.95，峰6(s)：1.00，峰7：1.19，峰8：1.31，峰9：1.37，峰10：1.55，峰11：1.58，峰12：1.68。
[0057]
另外，本发明采用双波长的检测方法，达到增加质量覆盖面的目的，其中300nm波长下13个特征峰，明确了5-羟甲基糠醛、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、山梨酸钾5个成分，监控艾叶、香附、黄连、秦艽、当归、青蒿、熟地黄七个药味与蜂蜜、山梨酸钾两个辅料；260nm波长下7个特征峰，明确了烟酰胺、马钱苷酸、龙胆苦苷3个成分，监控乌鸡、白芍、牡丹皮、香附、秦艽、熟地黄六个药味，一个检测方法即能全面、可观、科学的评价妇科白凤口服液的质量。
[0058]
仪器精密度试验：取同一参照物溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，记录各色谱峰保留时间及峰面积，各色谱峰保留时间的rsd值小于1.0％，峰面积的rsd值小于2.0％，表明仪器稳定，仪器精密度良好。
[0059]
进样精密度试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，记录各色谱峰保留时间及峰面积，各色谱峰保留时间的rsd值小于1.0％，峰面积的rsd值小于2.0％，表明方法进样精密度良好。
[0060]
重复性试验：取同一批妇科白凤口服液，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件，进样，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积，各特征峰相对保留时间的rsd值小于2.0％，相对峰面积的rsd值小于3.0％，表明方法重复性好。
[0061]
溶液稳定性试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、4、8、16、32、48、64、80、96小时进样，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积，各特征峰相对保留时间的rsd值小于2.0％，相对峰面积的rsd值小于3.0％，表明供试品溶液96小时
内稳定。
[0062]
柱温耐用性试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，考察了柱温分别为29℃、30℃、31℃对各特征峰分离的影响，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积。结果表明，不同温度对各特征峰分离影响较小，各特征峰相对保留时间的rsd值小于3.0％，相对峰面积的rsd值小于5.0％，表明柱温为29～31℃，方法均可行。
[0063]
流速耐用性试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，考察了流速分别为0.98ml/min、1.00ml/min、1.02ml/min对各特征峰分离的影响，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积。结果表明，不同流速对各特征峰分离影响较小，各特征峰相对保留时间的rsd值小于3.0％，相对峰面积的rsd值小于5.0％，表明流速为0.98～1.02ml/min，方法均可行。
[0064]
流动相组成耐用性试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，考察了流动相b分别为0.09％、0.10％、0.11％磷酸溶液对各特征峰分离的影响，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积。结果表明，不同流动相组成对各特征峰分离影响较小，各特征峰相对保留时间的rsd值小于3.0％，相对峰面积的rsd值小于5.0％，表明流动相b为0.09％～0.11％磷酸溶液，方法均可行。
[0065]
色谱柱耐用性试验：取同一批妇科白凤口服液供试品溶液，考察了3个品牌c18反相色谱柱对各特征峰分离的影响，记录各特征峰相对保留时间及相对峰面积。结果表明，不同品牌色谱柱对各特征峰分离影响较小，各特征峰相对保留时间的rsd值小于3.0％，相对峰面积的rsd值小于5.0％，表明方法耐用性强。
[0066]
终上所述，通过采用本发明检测方法，不仅方法简便，成本低、耐用性强，而且还可以实现同时对多了质量指标进行检测，能够全面反映妇科白凤口服液的质量水平的目的。
[0067]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。