一种噻托溴铵喷雾剂的UPLC测定方法与流程

本发明涉及一种测定噻托溴铵吸入喷雾剂超高效液相(uplc)测定方法，尤其是针对噻托溴铵吸入喷雾剂的微细粒子，属于医药。

背景技术：

1、噻托溴铵(tiotropium bromide,1)化学名为(1α,2β,4β,5α,7β)-7-[(羟基-2-噻吩乙酰)氧基]-9,9-二甲基-3-氧杂-9-氮氧离子三环[3.3.1.02,4]壬烷溴化盐,是由勃林格殷格翰公司研发,与辉瑞公司共同销售,2002年6月在荷兰和菲律宾首次上市。

2、对比文献1方通等人(《药学与临床研究》，2007年第002期，124-126)介绍了测定噻托溴铵含量及有关物质的以下hplc方法：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，diamonsilc 18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72g,加水1000ml溶解,加三乙胺10ml,用磷酸调节ph值至6.0,再加入0.21g辛烷基硫酸钠)(57∶43)；检测波长237nm；流速1mlmin-1；进样量20μl。在上述色谱条件下，理论塔板数大于3000,与各杂质峰均可基线分离,分离度大于1.5。

3、对比文献2周一萌等人报道(中国医药工业杂志，2015，46(12)，1327-132:9)测定噻托溴铵含量及有关物质的以下hplc方法：色谱柱diam onsil-c 18柱(4.6m m x 150m m，5um)；流动相0.03mol/l辛烷磺酸钠溶液(含0.5％三乙胺，用磷酸调至ph 3.3)：甲醇：乙腈(50：20：30)；流速1.0m l/min；柱温40℃；检测波长238nm；进样量15ul。

4、另外还有我们了解到的的对照方法3的检测方法：色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(lichrospher 60rp select b，125×4mm，5.0μm)；流动相：0.18％庚烷磺酸钠溶液(取庚烷磺酸钠1.64g，加水1000ml使溶解，用磷酸调ph至3.0)：乙腈(700:300)。检测波长：240nm，柱温：25℃，流速：2.0ml/min，进样量：100μl。

5、上述方法均使用了离子对试剂辛烷磺酸钠，它起改善待测物质的保留和峰形等，更换后保留时间会变化，同时离子对试剂的浓度的选择也会影响保留和峰形。当然类似的离子对试剂还有三氟乙酸、四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵、戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠等等。

6、对比文献2中的方法还采用了二极管阵列检测器(dad)，与目前常规使用的紫外检测器相比，成本更高，生产厂家普及度较低，不利于方法的推广。

7、但使用离子对试剂存在一些问题，例如离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附，难以被冲洗下来，导致柱子的死体积增加，同时也会出现保留时间提前，理论塔板数降低，分离度变差的情况。这个吸附过程是不可逆的，即便冲洗色谱柱再充分，也只是能部分恢复色谱柱的性能，延缓色谱柱报废的时间。同时离子对试剂在流动相和色谱柱之间的平衡时间较长，使得工作效率下降。

8、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、针对噻托溴铵测定存在的问题，本发明提供了一个全新超高效液相的分析方法，该方法能够以明显短的时间内准确测定噻托溴铵的含量，同时不使用离子对试剂，可以更好的缩短流动相和色谱柱之间的平衡时间，同时也可延长色谱柱寿命。

2、本发明提供的分析方法，根据中国药典2015年版，目前已经做完了方法学验证，包括系统适用性试验、线性试验、回收试验以及专属性试验。经过这些验证，证明本发明提供的分析方法实用可靠，稳定性较好。

3、一种采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法：

4、a.色谱柱选用键合十八烷基硅胶为填充剂的反向超高效液相色谱柱；

5、b.以甲醇和磷酸二氢钾缓冲液为流动相，所述的磷酸二氢钾溶液浓度为0.2～0.4％，流动相体积配比为磷酸二氢钾溶液:甲醇＝65～75:35～25；

6、c.检测波长选自230-240nm范围内。

7、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液浓度为0.23～0.27％。

8、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液浓度为0.25％。

9、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液ph值为2.5-4。

10、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相体积配比为磷酸二氢钾溶液:甲醇＝68～72:32～28。

11、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相体积配比为磷酸二氢钾溶液:甲醇＝70:30。

12、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的检测波长选自234-236nm范围内。

13、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的流动相流速为0.5ml/min。

14、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的柱温为25-30℃。

15、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的噻托溴铵定量限浓度为4-5ng·ml-1。

16、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的反向色谱柱采用的是1.7μm的填料，具有亚乙基桥杂化颗粒技术。

17、上述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的反向色谱柱acquitybeh c18柱。

18、与报道文献方法相比，本发明提供的噻托溴铵的超高效液相方法，具有如下优点：

19、1、有效缩短检测时间，提高了检测效率；

20、2、增强了系统的分离能力，提高样品检测结果的准确度；

21、3、不使用离子对试剂，减少对色谱柱的污染，延长耗材使用寿命；

22、4、大幅减少了与检测相关的有机溶媒用量，节约成本，环境友好。

技术特征：

1.一种采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法：

2.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液浓度为0.23～0.27％。

3.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液浓度为0.25％。

4.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相中磷酸二氢钾溶液ph值为2.5-4。

5.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相体积配比为磷酸二氢钾溶液:

6.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述流动相体积配比为磷酸二氢钾溶液:甲醇＝70:30。

7.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的检测波长选自234-236nm范围内。

8.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的流动相流速为0.5ml/min。

9.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的柱温为25-30℃。

10.如权利要求书1所述的采用超高效液相色谱仪测定噻托溴铵喷雾剂的方法，其特征在于所述的噻托溴铵定量限浓度为4-5ng·ml-1。

技术总结
本发明提供了一种测定噻托溴铵吸入喷雾剂超高效液相(UPLC)测定方法，尤其是针对噻托溴铵吸入喷雾剂的微细粒子。该方法能够以明显短的时间内准确测定噻托溴铵的含量，同时不使用离子对试剂，可以更好的缩短流动相和色谱柱之间的平衡时间，同时也可延长色谱柱寿命。

技术研发人员：杨敏,陈立营,朱赛楠,苏春红,徐跃,杨曦
受保护的技术使用者：天津金耀信达制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13