一种高效液相在线检测芍药内酯苷-6’-O-苯磺酸酯有关物质的方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种高效液相在线检测芍药内酯苷-6’-o-苯磺酸酯有关物质的方法。

背景技术：

1、芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯，结构式如下：

2、

3、白芍为毛崀科芍药的根，具有解热镇痛等功效。具现代药理学表明，白芍提取物还具有抗炎免疫调、解毒保肝、抗诱变和抗肿瘤节等多种药理活性，白芍总苷也是第一个用于临床治疗类风湿性关节炎的抗炎免疫调节药，且具有疗效好，不良反应少，耐受性好等特点。芍药内酯苷(albiflorin)作为白芍的主要活性成分之一，同样具有多种药理功效，例如：抗癫痫、镇痛、戒毒、止眩晕等，也可用以治疗类风湿性关节炎、细菌性痢疾、肠炎、病毒性肝炎、老年性疾病等。

4、芍药内酯苷是中药白芍中含量位居第二的活性成分。近年来，随着对其药效学研究的深入，发现芍药内酯苷具有区别于芍药苷的独特的药效特点，在补血、抗抑郁、糖尿病潜在治疗方面，具有优于芍药苷的药效特点，并具有抗惊厥、抗炎护肝的作用。进一步地，在研究芍药内酯苷药代动力学中发现，icr小鼠口服芍药内酯苷后，除胃、肠、肾外，其他组织含量均较低，且清除速率快，这可能与芍药内酯苷的脂溶性差有关。因此，需要对芍药内酯苷进行衍生化改造，提高芍药内酯苷的脂溶性，从而提高芍药内酯苷的吸收和生物利用率，更好的发挥其药效作用。

5、芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯是以富含芍药内酯苷的药材为起始原料，经过提取、吸附、分离纯化得到较高纯度的芍药内酯苷，采用有机金属催化剂、缚酸剂和化学性质活泼的苯磺酰氯与芍药内酯苷进行反应，产物经柱层析分离和精制得到98％以上的芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯，溶解于混合溶剂中，进行程序式干燥，最终得到芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯成品。芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯是创新性药物，目前国内外专利、文献中，尚未有关于采用高效液相测定芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯杂质的方法的报道。芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯极易发生醇降解，同时本产品极具吸湿性和热不稳定性，所以在合成、提纯、干燥生产工艺过程过程极易产生降解产物，导致有关物质显著增加，给原料药的质量及安全带来隐患。为了监测芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯原料生产工艺的过程有关物质，对原料药的有关物质进行有效的控制，因此，本研究旨在建立一种能快速检测芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯生产过程有关物质的高效液相测定方法，分析芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯制造工艺过程其有关物质的变化，指导生产工艺过程的优化尤为重要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，针对芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯在合成、提纯、干燥生产工艺过程过程极易产生降解产物，而现有技术又缺乏相关检测手段的问题，经过了大量实验摸索了芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯原料生产过程的有关物质检测方法，提供了一种采用高效液相色谱在线检测芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯有关物质的方法。该方法操作简单，经济环保，安全性高，可作为芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯生产工艺的在线质量控制辅助手段。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、一种高效液相在线检测芍药内酯苷-6’-o-苯磺酸酯有关物质的方法，以乙腈-四氢呋喃混合溶剂为流动相a，磷酸水溶液为流动相b，采用反相分析柱进行梯度洗脱，测定芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品中的有关物质。

4、液相分析中常用的流动相有很多，但流动相之间如何混合搭配才能达到更好的分离效果是本领域的研究重点。由于本发明检测的对象中，某些杂质极性和结构极为相似、且杂质个数众多，这就为流动相体系的选择及优化造成极大困难。经过长期研究意外发现采用乙腈-四氢呋喃混合溶剂为流动相a，磷酸水溶液为流动相b可以达到极好的分离效果，从而实现芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品中的有关物质的测定。

5、优选的，以体积比为95：5的乙腈-四氢呋喃混合溶剂为所述流动相a，0.2％磷酸水溶液为所述流动相b，进行所述梯度洗脱；所述反相分析柱为ymc-triart c18。

6、发明人发现芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯工艺过程存在未精制前杂质个数众多，杂质与主成分的分离，以及各个结构相似杂质间分离效果差的问题，带来杂质不能准确检测的结果。经多次多组的实验证实了，采用的ymc-triart(c184.6mm×250mm，3μm)，流动相a为乙腈-四氢呋喃(95：5)为流动相a，以0.2％磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱，意外得到产品在工艺开发及生产过程，多种有关物质与主成分达到良好的分离效果，各杂质间的分离效果良好，其他流动相体系如乙腈-磷酸或者甲醇-磷酸的色谱信息均比本文的检测方法效果差，不利于产品生产过程的质量控制，造成不能及时提供可靠数据，支持产品的在线实时质量跟踪。

7、优选的，所述梯度洗脱的具体操作为：在0～12min，所述流动相a与所述流动相b的初始体积比为20:80；在12～15min，所述流动相a与所述流动相b的体积比由20:80，线性匀速变化至34:66；15～40min，所述流动相a与所述流动相b的体积比保持34:66；40～50min，所述流动相a与所述流动相b的体积比由34:66，线性匀速变化至60:40；50～60min，所述流动相a与所述流动相b的体积比保持60:40；60～65min，所述流动相a与所述流动相b的体积比由60:40，线性匀速变化至80:20；65～70min，所述流动相a与所述流动相b的体积比保持80:20；70～75min，所述流动相a与所述流动相b的体积比由80:20，线性匀速变化至20:80；75～85min，所述流动相a与所述流动相b的体积比保持20:80。

8、所述的洗脱程序如下：

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10、

11、优选的，所述梯度洗脱的流动相流速为0.8ml/min，进样体积为20μl，柱温为20～30℃，检测器为紫外吸收检测器，检测波长为220～240nm。

12、优选的，所述反相分析柱为ymc-triart c18，规格为4.6mm×250mm，填料粒径为3μm；所述梯度洗脱的柱温为25℃，所述紫外吸收检测器的检测波长为230nm。

13、优选的，所述梯度洗脱前进行供试品溶液制备，具体为：取芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品溶解并定容至刻度，摇匀，即得所述供试品溶液。

14、优选的，用甲醇溶解所述芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品；所述供试品溶液中，溶液浓度为1mg/ml。

15、一种如上所述高效液相在线检测芍药内酯苷-6’-o-苯磺酸酯有关物质的方法的应用，用于芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯的生产过程在线质量控制，包括如下步骤：

16、a、用权利要求1所述方法测定芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品中的有关物质，记录色谱图；

17、b、用面积归一化法对所述有关物质进行定量；

18、c、通过对比不同生产阶段的芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯样品中所述有关物质的含量变化差异，用于芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯的生产过程在线质量控制。

19、优选的，步骤b中，具体操作包括：除去溶剂峰和芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯主峰外，用面积归一化法分析计算杂质峰面积百分比含量之和。

20、优选的，步骤b中，忽略不计小于0.05％的峰。

21、与现有技术相比较，实施本发明，具有如下有益效果：

22、1、本发明将常规的高效液相色谱分离检测技术，应用到芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯的有关物质分析中。该分析方法可以较好地体现芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯杂质变化信息，且各色谱峰之间能达到较良好的分离。通过比较不同生产阶段芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯有关物质含量的变化趋势，作为芍药内酯苷-6'-o-苯磺酸酯生产工艺在线质量控制手段，为产品的产业化提供数据的支持及产品质量标准的建立提供可靠依据。

23、2、本发明所采用的方法操作简单，经济环保，安全性高，对检测设备配置要求低，可推广应用。