低结合表面涂层用于分析酪氨酸激酶抑制剂的用途的制作方法

本公开涉及使用涂覆的流动路径来改善酪氨酸激酶抑制剂的色谱和样品分析。更具体地，本技术涉及使用具有涂覆的流动路径的色谱装置来分离样品中的分析物、使用包括涂覆的流动路径的流体系统来分离样品中的分析物(例如，血浆或血清样品中的酪氨酸激酶抑制剂)的方法，以及定制用于分离和分析酪氨酸激酶抑制剂的流体流动路径的方法。

背景技术：

1、与金属相互作用的分析物通常被证明分离极具挑战性。期望具有分散程度最低的高效色谱系统，这要求流动路径的直径减小并且能够承受越来越快的流速下的越来越高的压力。因此，色谱流动路径选择的材料本质上通常是金属的。尽管存在以下事实：已知某些分析物(例如，小分子药剂、蛋白质、聚糖、肽、寡核苷酸、杀虫剂、双膦酸、阴离子代谢物和两性离子比如氨基酸和神经递质)的特性与金属表面具有不利的相互作用，所谓的色谱次级相互作用。

2、所提出的用于金属特异性结合相互作用的机制需要理解路易斯酸碱化学理论。纯金属和金属合金(连同它们的对应氧化物层)具有末端金属原子，该末端金属原子具有路易斯酸特性。更简单地，这些金属原子示出接受供体电子的倾向。对于带有正电荷的任何表面金属离子而言，这种倾向甚至更为明显。具有足够的路易斯碱特性的分析物(可提供非成键电子的任何物质)可潜在地吸附到这些位点，从而形成有问题的非共价络合物。正是这些物质被定义为与金属相互作用的分析物。

3、许多小分子药物活性剂固有地含有充当路易斯碱的含氧和含氮残基。这些基团具有通过非键合电子相互作用与流动路径中的金属相互作用的能力。这限制了生物分子诸如肽的总体有效分离。大多数(如果不是全部)酪氨酸激酶抑制剂由一个或多个包含此类氧、氮或硫原子的芳香族和/或脂肪族杂环构成。

4、使用金属流动路径的替代方案是使用由聚合物材料诸如聚醚醚酮(peek)构成的流动路径。peek管材与大多数聚合物材料一样，通过挤出方法形成。利用聚合物树脂，该制造方法可导致高度可变的内径。因此，peek柱硬件在保留时间中产生了不利的差异，如可从一根柱和下一根柱之间的切换所观察到的。通常，这种变化可以比金属构造的柱高三倍。

5、因此，需要进行持续的努力，以减少分析物与金属色谱表面的螯合和次级色谱相互作用，从而有利于具有较高分辨率的色谱分离。另外，化合物分离和检测的可变性可以由许多因素引起。其中一个因素是化合物与分析柱的分析物/表面相互作用。此类相互作用可能是有问题的，尤其是在非常低的分析物浓度下。已经发现这对于酪氨酸激酶抑制剂尤其如此。

技术实现思路

1、在基于液相色谱的分离中，金属敏感分析物与分散在整个金属表面的活性位点的次级相互作用或吸附通常给分离带来挑战。为了解决金属流体系统中的分离遇到的问题，已经开发了使用涂层的柱硬件来限定低结合表面涂层。具有低结合表面涂层的柱硬件可以在谱带展宽、峰拖尾和/或回收率方面对色谱性能产生积极影响，这又可以提高基于液相色谱的测定、具体地基于液相色谱的肽图分析测定的分辨率、峰容量和/或定量准确度。

2、tki的治疗活性可以通过建立个体化剂量方案来优化。最佳剂量方案可以通过测量接受tki作为癌症化疗的一部分的受试者的血液中的药物浓度或在施用药物后产生的代谢物来确定。已经发现高压液相色谱(hplc)是用于监测tki和tki代谢物的血液浓度的有效技术。然而，已经发现许多tki和tki代谢物可以与不锈钢流动路径管材相互作用，从而产生较差的峰强度、强烈的拖尾和大量的残留。这是在期望常规测定获得一致和准确结果的行业中关注的问题。最近的观察表明，柱和lc硬件也应认真考虑，以提高测定重现性和灵敏度。具体地，已观察到液相色谱(lc)中金属离子介导的吸附是导致峰形不佳、拖尾和敏感分析物回收率降低的因素。通过利用沿着流体途径的至少一些部分具有低结合表面涂层的色谱系统部件，可以在测定灵敏度、回收率和再现性方面实现改善。

3、另外，对于酪氨酸激酶抑制剂分析，可以通过使用本公开的技术来增加样品吞吐量。可以通过减少峰拖尾和增加的分辨率来增加样品吞吐量。例如，如果杂质与天然峰紧密洗脱并且天然峰表现出一定程度的拖尾，则用户(例如，分析员)可以尝试延长梯度或运行时间，以将杂质分辨到有利于准确量化的峰之间可接受的分辨率。在不存在拖尾时，用户可以通过在梯度中使用更陡的斜率来缩短运行时间。这可以有效地更快、更紧密地一起洗脱所有物质。峰之间的分辨率虽然减小，但是对于测定仍然可能是足够的，因为不存在拖尾来干扰积分或引起共洗脱。在峰拖尾减少的情况下，可以通过能够看到先前由峰拖尾覆盖的峰来检测新的痕量物质。

4、另外，增加峰之间的分辨率或更多的时间可以允许用户以增加的吞吐量运行更快的方法。如果分辨率已经增加，则峰容量增加意味着更多的峰可以在同一色谱图中拟合，或者如果将感兴趣的临界对开始充分地分辨，则可以以分辨率和峰容量为代价运行更快的分离。

5、本技术包括涂层诸如烷基甲硅烷基涂层，该涂层可以提供低结合表面涂层以减少峰拖尾并且从最初注入样品开始增加拖尾因子的稳定性、增加分析物回收率、增加灵敏度以及通过最小化可能导致样品损失的分析物/表面相互作用而增加重现性。另外，低结合表面涂覆的硬件似乎不会对酪氨酸激酶抑制剂的色谱性能或回收率产生不利影响。例如，对于lbs涂覆和未涂覆的表面，观察到相似的保留时间。

6、限定色谱系统的流动路径的表面积上的烷基甲硅烷基涂层(例如，覆盖金属表面的流体接触涂层)可以最小化酪氨酸激酶抑制剂与色谱流动路径的金属表面之间的相互作用。因此，涂覆的金属表面改善了酪氨酸激酶抑制剂的液相色谱分离。在金属流动路径上使用烷基甲硅烷基涂层允许使用能够承受快速流速下的高压、使用具有小颗粒的固定相(也可以是缓慢流动)产生的高压和由较长柱床产生的高压同时最小化分析物与金属之间的次级色谱相互作用的金属色谱流动路径。由高压材料制成并且用涂层修改的这些部件可以被定制成使得内部流动路径减少次级色谱相互作用。涂层覆盖暴露于流体路径的金属表面(即，流体接触涂层)。

7、在一个方面，本技术涉及一种分离和分析样品中的酪氨酸激酶抑制剂的方法。该方法包括将包含一种或多种酪氨酸激酶抑制剂的样品注入色谱系统中。样品可以由从受试者获得的血浆或血清制备。可通过施用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂来使受试者经历化疗。色谱系统包括金属流动路径。金属流动路径的至少一部分涂覆有低结合表面涂层。样品流过色谱系统，从而将一种或多种酪氨酸激酶抑制剂与血浆或血清中的其他组分分离。将分离的酪氨酸激酶抑制剂传送到检测器。

8、在一个实施方案中，该方法还包括分析分离的酪氨酸激酶抑制剂以确定存在于血浆或血清中的酪氨酸激酶抑制剂的身份和/或量。血浆或血清的分析可包括注入包含两种或更多种酪氨酸激酶抑制剂的样品。该方法可包括将两种或更多种酪氨酸激酶抑制剂彼此分离并确定每种分离的酪氨酸激酶抑制剂的身份和/或量。在一些实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂包括伊马替尼、诺马替尼(n-去甲基伊马替尼)、达沙替尼和尼罗替尼中的至少一种。

9、在一个实施方案中，色谱系统包括：包括样品针和针端口的样品注入器、联接到样品注入器的柱前加热器以及联接到柱前加热器的色谱柱，其中注入样品包括通过样品注入器将样品抽吸到色谱系统中并在样品进入色谱柱之前使样品通过柱前加热器。样品针的金属管材部分可以涂覆有低结合表面涂层。针端口可以涂覆有低结合表面涂层。柱前加热器的金属部分可涂覆有低结合表面涂层。在一个实施方案中，针端口、样品针的金属管材部分和柱前加热器的金属管材部分的任何组合涂覆有低结合表面涂层。

10、在一个实施方案中，低结合表面涂层是烷基甲硅烷基涂层。烷基甲硅烷基涂层可以是双(三甲氧基甲硅烷基)乙烷或双(三氯甲硅烷基)乙烷。烷基甲硅烷基涂层可以是与金属流动路径的部分接触的第一烷基甲硅烷基涂层以及形成在第一烷基甲硅烷基涂层上的第二烷基甲硅烷基涂层。第一涂层可以是双(三甲氧基甲硅烷基)乙烷或双(三氯甲硅烷基)乙烷，并且第二涂层可以是正癸基三氯硅烷。

11、在一个实施方案中，检测器是质谱仪。