一种快速检测hpv抗原及抗体的试纸
技术领域
1.本发明属于免疫分析检测试剂领域，涉及一种既可用于hpv抗原也可用于hpv抗体的快速检测的试纸条(卡)。
背景技术：
2.宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，在女性肿瘤中的发病率位居第二，全世界每年的新发病例约为47万人，并导致30万人死亡，是仅次于乳腺癌引起女性死亡的重要原因。宫颈癌的发病病因与多种因素有关，其中以人类乳头瘤状病毒(human papillomavirus,hpv)的感染为最重要的因素，据报道99.8％的宫颈癌合并hpv感染，而hpv阴性者几乎不发生宫颈癌。目前对hpv感染尚无有效的治疗措施，预防hpv感染及对已感染人群进行定期检测是降低宫颈癌发病率的主要方式。
3.hpv属乳头状病毒科，是一种噬黏膜和皮肤的双链闭合环状dna病毒。到目前为止，已报道发现的hpv有120多种，其中与人类生殖道感染有关的为40多种，根据其致癌性分为高危型(致癌型)hpv、可能致癌性和低危型hpv，高危型hpv中以hpv16、hpv18、hpv31、hpv33与宫颈癌的发病关系最为密切，在宫颈癌中hpv16、hpv18这两种类型的hpv的检出率达70％以上，hpv16多见于宫颈鳞癌，而hpv18多见于宫颈腺癌；低危型hpv多在湿疣等良性病变中发现。
4.对hpv的检测多集中于组织病理学或hpv病毒的dna检测，这些方法具有耗费时间长、需要专业的技术人员和仪器设备、操作程序复杂、成本高、不易推广等局限性。有文献报道使用hpv16e6蛋白的单抗和多抗制备胶体金诊断试纸条(胡仁建.高危型人乳头瘤病毒16型免疫胶体金诊断试纸条的研制.重庆理工大学,2009)，即在试纸条中使用鼠抗hpv16e6单抗作为金标抗体包被于结合垫，兔抗hpv16e6多抗包被于检测线。但这两种抗体均以hpv16e6作为抗原，抗原抗体结合位点为同一抗原决定簇，因此结合了金标抗体的样本hpv抗原与检测线上兔抗hpv16e6多抗的结合能力有限，使试纸条的检测灵敏度受到一定限制。中国专利cn108761091a中的双抗夹心法快速检测hpv抗体的试纸条(卡)采用hpv的主衣壳蛋白，即hpv l1为抗原，同时采用抗人igg抗体为抗原，从而实现了对样本中的hpv l1 igg抗体的灵敏、准确的检测。虽然hpv抗原与血液或血清中的hpv抗体都是体外诊断hpv病毒感染的标志物，但该试纸条(卡)并不能检测宫颈细胞的hpv抗原。故亟待提出一种具有方便快捷、成本低廉、简单可靠、容易观察区别、适合家庭自检、容易推广优点的hpv高危型病毒快速检测试纸。
5.目前尚未见到以免疫竞争技术为基础快速检测hpv病毒(病毒抗原及抗体)的试纸的报道。
技术实现要素：
6.本发明的目的在于提供一种快速检测hpv抗原及抗体的试纸，其使用方便快捷、结果准确可靠，且对hpv高危型病毒的检测效率高。
7.为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
8.一种检测hpv抗原及hpv抗体的试纸，该试纸包括沿层析方向依次设置的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫，所述检测反应区包括检测带和质控线；胶体金标记垫包括抗hpv l1抗原的抗体-胶体金标记物，检测带包括hpv l1抗原，质控线包括可以与hpv抗体(即抗hpv l1抗原的抗体)结合的抗体。
9.优选的，所述检测反应区还包括硝酸纤维素膜，所述与hpv抗体结合的抗体和hpv l1抗原包被在该硝酸纤维素膜上。
10.优选的，所述胶体金标记垫还包括玻璃纤维膜或聚脂膜，所述抗hpv l1抗原的抗体-胶体金标记物分散铺放并吸附在该玻璃纤维膜或聚脂膜上。
11.优选的，所述hpv l1抗原来源于hpv16或hpv18。
12.优选的，所述抗hpv l1抗原的抗体为鼠源、兔源、羊源、马源、骆驼源或豚鼠源抗hpv l1抗原的多克隆抗体中的一种或多种。
13.优选的，所述与hpv抗体结合的抗体是指能通过与hpv抗体(即抗hpv l1抗原的抗体)结合形成免疫复合物的抗体。
14.上述检测hpv抗原及hpv抗体的试纸的制备方法，包括以下步骤：
15.步骤1胶体金标记垫的制备
16.利用胶体金溶液对抗hpv l1抗原的抗体进行标记处理，得胶体金标记物(即抗hpv l1抗原的抗体-胶体金标记物)溶液；将胶体金标记物溶液涂覆在玻璃纤维膜或聚脂膜上后干燥，备用；
17.步骤2检测反应区的制备
18.将hpv l1抗原溶液和可以与hpv抗体(即抗hpv l1抗原的抗体)结合的抗体的溶液分别涂覆在硝酸纤维素膜上的两个不同区域后进行干燥，得到检测带和质控线，备用；
19.步骤3样品垫的制备
20.将玻璃纤维膜或聚脂膜在含有阻断剂的处理液中浸渍后进行干燥，备用；或者玻璃纤维膜或聚脂膜不经浸渍和干燥，直接使用；经过阻断剂处理后所得样品垫，可以抑制非特异性结合，从而降低试纸的假阳性率。
21.步骤4将样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫依次安装在底板上，然后按试纸(例如试纸条、试纸卡)规格切割。
22.优选的，所述步骤1中，胶体金标记物溶液的制备方法具体包括以下步骤：将2～200ml胶体金溶液(粒径10～100nm)用0.03～0.3m的碳酸钾溶液调节ph到5.5～7.0，然后与50～100μg抗hpv l1抗原的抗体混匀，然后于18～30℃反应10～30分钟，然后在反应体系中加入bsa(牛血清白蛋白)至终浓度0.5％～1％(g/ml)，然后静置5～10分钟，然后于2～25℃、1000～12000rpm离心5～30分钟并收集上清液，将该上清液于2～25℃、5000～15000rpm离心5～60分钟并收集沉淀，将该沉淀溶于0.5～5ml含0.1％～10％(g/ml)bsa的pbs(ph6.0～7.5)中。
23.优选的，所述步骤1中，胶体金标记物溶液的涂覆条件为：将胶体金标记物溶液用含0.1％～10％(g/ml)bsa的pbs(ph 6.0～7.5)稀释1～2倍后按照40～80μl/cm2喷涂于玻璃纤维膜或聚脂膜上；干燥的条件为：35～40℃下18～24小时。
24.优选的，所述步骤2中，hpv l1抗原溶液、可以与hpv抗体结合的抗体的溶液的浓度
分别为0.5～4mg/ml，溶剂均为pbs(ph 6.0～7.5)；干燥的条件为：35～40℃下18～24小时。
25.一种hpv检测方法，利用上述步骤制备的试纸对待检样本进行检测，具体包括以下步骤：
26.步骤1样本处理
27.将血清或血浆用稀释液稀释1～100倍(稀释液为水、0.9％氯化钠溶液、磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液)后取50～150μl加到试纸的样品垫上(即进行加样)；或者，取全血样本2～200μl进行加样后立即稀释1～100倍(即再加入所需体积的加样缓冲液，如磷酸盐缓冲液)；或者，将取样后的宫颈上皮拭子置于0.5～2ml样本保存液(如磷酸盐缓冲液)中充分混匀，取所得宫颈上皮样本50～150μl进行加样；
28.血清的取样条件为：取全血1～5ml于血清采集管中，静置1～2小时，3000～5000rpm离心10～30分钟，取上清；
29.血浆的取样条件为：取全血1～5ml于枸橼酸钠或肝素钠抗凝管中，1000～3000rpm离心10～30分钟，取上清；
30.步骤2把处理过的样本加到试纸的样品垫上后静置试纸5～20分钟，然后观察试纸的检测反应区；
31.步骤3结果判读
32.检测带和质控线均显现颜色(检测带的颜色与质控线相同或接近，颜色均较深)，结果为阴性(若为血液来源的样本，则表示抗体阴性，若为宫颈上皮来源的样本，则表示抗原阴性)；检测带不显现颜色或显现颜色较浅(相对于质控线)而质控线显现颜色(颜色较深)，结果为阳性(若为血液来源的样本，则表示抗体阳性，若为宫颈上皮来源的样本，则表示抗原阳性)；质控线不显现颜色，提示试纸失效。
33.本发明的有益效果体现在：
34.本发明首次将基于竞争法的试纸应用于样本(血液来源的样本和宫颈上皮来源的样本)中hpv抗体和hpv抗原的检测，并且该试纸使用方便快捷、成本低廉，仅使用一种试纸进行检测，即可判断人体感染相应hpv病毒(病毒抗原和抗体)的情况，为宫颈癌的筛查和治疗提供快速的辅助诊断，适合家庭自检和医院、疾控部门临床快速诊断以及在基层卫生单位流行病学调查现场大规模应用。
35.进一步的，本发明使用竞争法通过检测带拦截(结合)未被样品(宫颈上皮样本)中hpv抗原结合的金标抗体的量，进而反映样品中的hpv抗原浓度，避免了文献报道中使用同一结合位点的抗原抗体结合反应对检测灵敏度的限制，而且使得试纸可以达到临床诊断中对于hpv抗原和抗体检测的要求。
36.进一步的，本发明使用的hpv抗原为hpv l1蛋白，不含有完整的病毒入侵及复制的组分，不具有致病性。
具体实施方式
37.下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。所述实施例仅用于解释本发明，而非对本发明保护范围的限制。
38.(一)hpv l1抗原及抗体制备
39.1.1hpv l1抗原的制备：
40.利用基因克隆技术分别构建hpv16 l1全基因及hpv18 l1全基因于pqe80l质粒中，引物分别为：
41.hpv16l1正向引物-sph1：catgcatgccaggtgacttttatttacatc
42.hpv16l1反向引物-sac1：cgagctccagcttacgttttttgcgttt
43.hpv18l1正向引物-sph1：catgcatgcgctttgtggcggcctagt
44.hpv18l1反向引物-sac1：cgagctcctttctggcacgtacacgc
45.以提取的人宫颈癌细胞株(获取自中国典型培养物保藏中心)细胞总dna为模板，使用上述引物进行目的基因扩增。将构建所得重组质粒分别在原核表达系统bl21中表达，用镍柱亲和层析纯化，获得hpv16 l1蛋白及hpv18 l1蛋白。
46.1.2hpv l1抗体制备：
47.将浓度为0.5～2mg/ml的hpv16 l1蛋白或hpv18 l1蛋白，与弗氏免疫佐剂按照体积比1:1混合并免疫balb/c小鼠，每只小鼠免疫的hpv16 l1蛋白或hpv18 l1蛋白量为100μg，在初次免疫后的第14及28天以同样的剂量加强免疫两次，在初次免疫后的第35天采集小鼠血清，利用rproteing亲和纯化分别制备hpv16 l1蛋白的多克隆抗体(即抗hpv16 l1抗原的抗体)及hpv18 l1蛋白的多克隆抗体(即抗hpv18 l1抗原的抗体)。
48.(二)hpv l1抗体滴度检测
49.(1)先用hpv16 l1蛋白及hpv18l1蛋白分别以1μg的量包被酶联免疫96孔板，包被板在4℃孵育过夜。
50.(2)用含0.05％的tween-20的pbst洗涤缓冲液洗涤各孔6次，每孔加入封闭液(含5％脱脂奶粉的pbst溶液)100μl封闭2小时。
51.(3)每孔加入100μl用pbst溶液稀释200倍的对应hpv l1抗体(抗hpv16 l1抗原的抗体或抗hpv18 l1抗原的抗体)样品，于37℃反应1小时，然后用pbst溶液洗涤各孔4次，每次5分钟。
52.(4)每孔加入100μl辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠igg抗体，37℃反应1小时，然后用pbst溶液洗涤各孔6次，以除去未结合的酶标抗体。
53.(5)每孔加入100μl tmb显色液，室温进行显色反应半小时。
54.(6)每孔加入50μl的反应终止液(2m硫酸溶液)终止显色反应，5分钟后用酶标仪测定450nm波长处的吸收值，并记录结果。
55.共测定了6只按照(一)中所述方法进行免疫的小鼠和一只未经免疫的阴性对照小鼠的血清抗体，其中3只被hpv16 l1蛋白免疫小鼠血清抗体450nm波长处的吸收值分别为0.726、1.258、0.915，3只被hpv18 l1蛋白免疫小鼠血清抗体450nm波长处的吸收值分别为0.612、0.834、0.793，而阴性对照小鼠血清抗体的吸收值为0.049。由此判断，由hpv l1蛋白免疫小鼠能激活小鼠的免疫系统，并产生相应的hpv16 l1蛋白及hpv18 l1蛋白的特异性抗体。
56.(三)快速检测hpv抗原及抗体试纸条(卡)的制备
57.(1)胶体金制备：氯金酸(haucl4)配成1％的氯金酸溶液，取1ml该氯金酸溶液，加入99ml去离子水，混匀后加热至沸腾，立即加入2ml 1％的枸掾酸钠溶液，迅速搅拌均匀，继续加热10分钟，冷却至室温，补充去离子水至100ml，得到吸光值大于0.7的胶体金溶液(平均粒径为30nm)。
58.(2)胶体金标记物的制备：取10ml制备好的胶体金溶液，用0.1m的碳酸钾溶液将ph值调节到6.5，加入50μg抗hpv16 l1抗原的抗体或抗hpv18 l1抗原的抗体，混匀，室温反应30分钟，然后加入bsa至终浓度0.5％(g/ml)，混匀后静置10分钟，4℃、2000rpm离心20分钟，弃去沉淀，上清液4℃、12000rpm离心60分钟，弃去上清，沉淀溶于1ml的pbs(ph6.5)溶液(内含0.2％ bsa)中，得到胶体金标记物溶液。
59.(3)金标垫的制备：取胶体金标记物溶液以pbs(ph6.5)溶液(内含0.2％bsa)稀释1倍，然后按照60μl/cm2喷涂(用喷涂仪)玻璃纤维膜，使胶体金标记物均匀的铺于玻璃纤维膜上，然后30％的湿度以下，于37℃干燥18小时。干燥好的金标垫，用锡箔袋密封(内装干燥剂)，常温保存。
60.(4)检测带与质控线的包被：将hpv l1抗原(具体为hpv16 l1蛋白或hpv18 l1蛋白)用pbs(ph6.5)溶液稀释至浓度为1mg/ml，在nc膜上划线(或喷于nc膜上)，使相应的hpv l1抗原固化(于37℃干燥18小时)在nc膜上，作为检测带t。在离检测带t 6毫米处，用1mg/ml(ph6.5的pbs溶液稀释)的可以与hpv抗体结合的抗体(购自杭州贤至生物的羊抗鼠抗体)再划一条线(或喷于nc膜上)，固化(于37℃干燥18小时)后作为质控线c。
61.(5)样品垫的预处理(阻断剂处理)
62.另准备一张玻璃纤维膜，用含有体积分数10％的兔血清的处理液(溶剂为ph6.5的pbs)于室温浸渍30分钟，取出后于37℃干燥1小时。
63.(6)试纸条(卡)的组装
64.试纸由依次衔接的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(nc膜)和另外准备的吸水垫(例如吸水滤纸)组成。上段为吸水垫，中段为硝酸纤维素膜上的检测反应区(含有检测带t和质控线c)，在中、下段之间放置吸附有胶体金标记物的金标垫；下段为样品垫；整个试纸贴附于pvc板中央，裁切成4mm宽的条形带，即制得试纸条，密封干燥保存，备用。
65.另外，将试纸条装入由上板和下板构成的外壳内，试纸条的样品垫部分正对在上板上设有的加样孔，检测反应区部分正对在上板上设有的检测窗，即得到试纸卡。
66.(四)样本处理、加样、判读流程
67.血清样本：取全血1ml于血清采集管中，静置1小时，5000rpm离心20分钟，取上清即得。根据试纸条(卡)的检测精度，将血清样本用加样缓冲液(ph6.5的pbs溶液)或去离子水稀释1～10倍，然后取100μl滴加到试纸条(卡)的样品垫部分上，静置10分钟后观察试纸条(卡)检测反应区部分的显色结果。
68.血浆样本：取全血1ml于枸橼酸钠或肝素钠抗凝管中，2000rpm离心20分钟，取上清即得。根据试纸条(卡)的检测精度，将血浆样本用加样缓冲液(ph6.5的pbs溶液)或去离子水稀释1～10倍，然后取100μl滴加到试纸条(卡)的样品垫部分上，静置10分钟后观察试纸条(卡)检测反应区部分的显色结果。
69.全血样本：取指尖或耳垂新鲜血约50μl，滴加到试纸条(卡)的样品垫部分上，立即用50μl加样缓冲液(ph6.5的pbs缓冲液)或去离子水滴加到样品垫上进行稀释，静置10分钟后观察结果。
70.宫颈上皮样本：手持阴道拭子取宫颈上皮组织，然后将阴道拭子放入1ml样本保存液(ph6.5的pbs溶液)或去离子水中，充分混匀(1～2分钟)，滴加100μl到试纸条(卡)的样品垫部分上，静置10分钟后观察试纸条(卡)检测反应区部分的显色结果。
71.(五)试纸条(卡)检测原理
72.5.1检测hpv抗原原理
73.把待检测样本(宫颈上皮样本)加样到样品垫上，之后样本中的hpv l1抗原与金标垫上的胶体金标记物(胶体金标记的抗hpv16 l1抗原的抗体或抗hpv18 l1抗原的抗体，简称胶体金标记的hpv l1抗体)形成免疫复合物，由于毛细管效应，该免疫复合物向吸水垫方向继续泳动，由于胶体金标记的hpv l1抗体的结合位点被样本中的hpv l1抗原所占据，故该免疫复合物不能与包被在检测带t上的相应的hpv l1抗原发生免疫结合反应，检测带t不显紫红色或显色较浅；由于毛细作用该免疫复合物继续向前泳动，并与包被在质控线c上的可以与hpv抗体结合的抗体发生特异性的免疫反应被截留，逐渐富集在质控线c上形成较深的紫红色条带，多余的未结合的物质继续层析到吸水垫上，因此仅在质控线c上出现显色条带时判断为宫颈细胞的hpv抗原阳性结果；若待检测样本中不含有hpv l1抗原，胶体金标记的hpv l1抗体与固化在检测带t上的hpv l1抗原发生免疫结合反应，所以在检测带t上出现显色条带，过量的金标垫上的胶体金标记的hpv l1抗体继续向前泳动，与包被在质控线c上的可以与hpv抗体结合的抗体发生特异性的免疫反应被截留，逐渐富集在质控线c上形成紫红色条带，因此在检测带t和质控线c都出现显色条带时判断为宫颈细胞的hpv抗原阴性结果。
74.5.2检测hpv抗体原理
75.把待检测样本(血清、血浆或全血样本)加样到样品垫上，之后样本中的hpv l1抗体与金标垫上的胶体金标记物(胶体金标记的抗hpv16 l1抗原的抗体或抗hpv18 l1抗原的抗体，简称胶体金标记的hpv l1抗体)形成竞争关系，由于毛细管效应，所有的hpv l1抗体向吸水垫方向泳动，形成竞争关系的hpv l1抗体与固化在检测带t上的相应的hpv l1抗原竞争性结合，样本中hpv l1抗体浓度越高时，其竞争优势更明显，则金标垫上胶体金标记的hpv l1抗体与固化在检测带t上的相应的hpv l1抗原发生免疫反应更弱，检测带t的紫红色显色越浅；由于毛细作用继续向前泳动，胶体金标记的hpv l1抗体与包被在质控线c上的可以与hpv l1抗体结合的抗体发生特异性的免疫反应被截留，逐渐富集在质控线c上形成较深的紫红色条带，多余的未结合的物质继续层析到吸水垫上，因此检测带t显色浅或者不显色且质控带c线上出现显色条带判断为血液中的hpv抗体阳性结果；若待测样本中不含有hpv l1抗体，金标垫上胶体金标记的hpv l1抗体与固化在检测带t上的相应的hpv l1抗原发生较强的免疫反应被截留，检测带t的紫红色显色明显；由于毛细作用继续向前泳动，胶体金标记的hpv l1抗体与包被在质控线c上的可以与hpv l1抗体结合的抗体发生特异性的免疫反应被截留，逐渐富集在质控线c上形成较深的紫红色条带，因此在检测带t和质控线c都出现条带时判断为血液中的hpv抗体阴性结果。
76.5.3抗原、抗体的联合判读
77.本发明的试纸条(卡)既可以检测宫颈细胞的hpv抗原，也可以检测血液中的hpv抗体，即两种重要的人体感染hpv病毒的标志物可以在一种试纸产品上实现检测，检测的结果也具有更详尽的临床指导意义：
78.(1)对于同一检测个体，宫颈细胞的hpv抗原及血液中的hpv抗体均为阳性，说明人体受到hpv感染且机体产生相应抗体；
79.(2)对于同一检测个体，宫颈细胞的hpv抗原为阳性，而血液中的hpv抗体为阴性，
说明人体受到hpv感染且机体还未产生相应抗体；
80.(3)对于同一检测个体，宫颈细胞的hpv抗原为阴性，而血液中的hpv抗体为阳性，说明人体曾经受到hpv感染但机体产生的抗体已将hpv清除；
81.(4)对于同一检测个体，宫颈细胞的hpv抗原及血液中的hpv抗体均为阴性，说明人体以前和现在都未受到hpv感染，机体也没有相应抗体。
82.(六)hpv抗体检测的假阳性率和假阴性测试实验
83.(1)血清样本采集
84.15岁以下健康人50例，注射hpv疫苗者50例；每例取全血1ml于血清采集管内，静置1小时，5000g离心10分钟，取上清即得血清样本。
85.(2)假阳性率检测
86.将15岁以下健康人血清样本100μl用去离子水100μl稀释，取100μl滴在试纸条(hpv16)样品垫部分上，静置10分钟，观察检测带t和质控线c；判定携带hpv抗体情况。
87.判定规则如下：
88.阴性：检测带t以及质控线c均呈现紫红色条带，则判定样本中不含有hpv抗体；
89.阳性：仅质控线c呈现紫红色条带(或质控线c呈现紫红色条带而检测带t显色较浅)，则判定样本中含有hpv抗体；
90.无效：质控线c不呈现紫红色条带，则无论检测带t是否呈现紫红色条带，该试纸条均判为无效；
91.结果显示，15岁以下健康人血清样本1份呈阳性，49份呈阴性，全部有效。结果表明试纸条的hpv抗体检测假阳性率为2％。
92.(3)假阴性率检测
93.将注射hpv疫苗者血清样本100μl用去离子水100μl稀释，取100μl滴在试纸条(hpv16)样品垫部分上，静置10分钟，观察检测带t和质控线c；判定携带hpv抗体情况。
94.判定规则如下：
95.阴性：检测带t以及质控线c均呈现紫红色条带，则判定样本中不含有hpv抗体；
96.阳性：仅质控线c呈现紫红色条带(或质控线c呈现紫红色条带而检测带t显色较浅)，则判定样本中含有hpv抗体；
97.无效：质控线c不呈现紫红色条带，则无论检测带t是否呈现紫红色条带，该试纸条均判为无效；
98.结果显示，注射hpv疫苗者血清样品1份呈阴性，49份呈阳性，全部有效。结果表明，试纸条的hpv抗体检测假阴性率为2％。
99.(七)hpv抗原检测的假阳性率和假阴性测试实验
100.(1)宫颈上皮样本采集
101.15岁以下健康人50例，hpv16型患者50例；每例手持阴道拭子取宫颈上皮组织(转动3～5圈)后放入1ml样本保存液(ph6.5的pbs溶液)中，充分混匀即得宫颈上皮样本。
102.(2)假阳性率检测
103.将15岁以下健康人宫颈上皮样本100μl滴在试纸条(hpv16)样品垫部分上，静置10分钟，观察检测带t和质控线c；判定携带hpv抗原情况。
104.判定规则如下：
105.阴性：检测带t以及质控线c均呈现紫红色条带，则判定样本中不含有hpv抗原；
106.阳性：仅质控线c呈现紫红色条带(或质控线c呈现紫红色条带而检测带t显色较浅)，则判定样本中含有hpv抗原；
107.无效：质控线c不呈现紫红色条带，则无论检测带t是否呈现紫红色条带，该试纸条均判为无效；
108.结果显示，15岁以下健康人宫颈上皮样本1份呈阳性，49份呈阴性，全部有效。结果表明，试纸条的hpv抗原检测假阳性率为2％。
109.(3)假阴性率检测
110.将hpv16型患者宫颈上皮样本100μl滴在试纸条(hpv16)样品垫部分上，静置10分钟，观察检测带t和质控线c；判定携带hpv抗原情况。
111.判定规则如下：
112.阴性：检测带t以及质控线c均呈现紫红色条带，则判定样本中不含有hpv抗原；
113.阳性：仅质控线c呈现紫红色条带(或质控线c呈现紫红色条带而检测带t显色较浅)，则判定样本中含有hpv抗原；
114.无效：质控线c不呈现紫红色条带，则无论检测带t是否呈现紫红色条带，该试纸条均判为无效；
115.结果显示，hpv16型患者宫颈上皮样本2份呈阴性，48份呈阳性，全部有效。结果表明，试纸条的hpv抗原检测假阴性率为4％。