一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法与流程

本发明涉及药物分析，具体涉及了一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法。

背景技术：

1、zl 200410022330.7中的肾安胶囊有石椒草、肾茶、黄柏、白茅根、茯苓、白术、金银花、黄芪、甘草、灯心草、淡竹叶、泽泻共12味。肾安胶囊有清热解毒，利尿通淋的功效，用于湿热蕴结所致淋证，证见小便不利，淋沥涩痛，下尿路感染见上述证候者。

2、肾安胶囊定性鉴别仅有以盐酸小檗碱、绿原酸、泽泻药材为对照品的薄层色谱鉴别，分别指向组方药材黄柏、金银花和泽泻，其余的9味药材没有对应的鉴别项目。由于盐酸小檗碱是黄柏、三颗针、马尾黄连、十大功劳等多种药材均含有的共有成分，只以盐酸小檗碱的薄层色谱鉴别作为指向黄柏的鉴别方法存在专属性不强的缺点。

3、中药质量控制是保障药品安全的重要措施，用现代药物分析技术建立客观、多维、可靠的质量控制点是提升中药质量管理水平的重要途径。本品处方组成有12味药材，现行药品标准只有3味药材的定性鉴别，与中药质量控制的实际需求有较大差距。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提出一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，根据肾安胶囊处方主要药味所含有的代表性成分，选择专属性较强的芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱等代表性成分为对照品增加更多薄层色谱鉴别项目，为完善和提高民族药肾安胶囊的药品质量标准提供了技术方法。

2、本发明克服了肾安胶囊现行药品标准对组方药材鉴别的质量控制点偏少的技术缺点，增加更全面的定性分析指标来鉴别更多的组方药材，完善和提升肾安胶囊的药品质量标准。

3、其技术路线是以肾安胶囊处方药材含有的代表性成分为对照品研究组方药材的专属性鉴别方法，增加组方药材的可鉴别数量。提供的方法增加了以芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别项目，分别指向肾安胶囊组方主要药材石椒草、肾茶、白术、甘草、黄柏的检测。

4、本发明提供的薄层色谱鉴别方法在样品前处理方面能有效排除其它物质干扰，薄层色谱分离度佳、操作简便、重现性好。与现行肾安胶囊药品标准相比增加了5个代表性成分的定性鉴别指标，鉴别方法对照全面、专属性强，判断直观明确、结论客观可靠。

5、本发明的技术方案具体如下：

6、一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，对肾安胶囊进行薄层色谱鉴别，判断是否含有芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱中的一种或多种。

7、进一步地，芸香苦素的薄层色谱鉴别如下：

8、取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；

9、另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；

10、薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，晾干后置紫外光灯下检视，供试品色谱在与芸香苦素对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色荧光斑点。

11、进一步地，取肾安胶囊内容物3g，加甲醇30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2ml甲醇溶解作为供试品溶液；

12、另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲酸按质量比为30:30:1混合；

13、薄层色谱喷以10％硫酸-乙醇溶液，晾干后置254nm紫外光灯下检视。

14、进一步地，熊果酸的薄层色谱鉴别如下：

15、取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；

16、另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；

17、薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。

18、进一步地，取肾安胶囊内容物3g加甲醇30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2ml甲醇溶解作为供试品溶液；

19、另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-丙酮-甲醇按质量比8:2:0.3混合；

20、薄层色谱喷以10％硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。

21、进一步地，苍术酮的薄层色谱鉴别如下：

22、取肾安胶囊内容物，加正己烷超声处理，滤过，滤液浓缩作为供试品溶液；

23、另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液；

24、分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；

25、薄层色谱喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。

26、进一步地，取肾安胶囊内容物3g，加正己烷30ml超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml作为供试品溶液；

27、另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯按质量比50:1混合的溶液；

28、薄层色谱喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。

29、进一步地，甘草苷的薄层色谱鉴别如下：

30、取肾安胶囊内容物，加乙酸乙酯超声处理，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干；

31、残渣加水溶解后用正丁醇提取，合并正丁醇液用水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；

32、另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液；

33、分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；

34、薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。

35、进一步地，取肾安胶囊内容物6g加乙酸乙酯60ml超声处理30分钟，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇60ml超声处理30min，滤过，滤液蒸干；残渣加水20ml溶解后用正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液用水洗涤3次，每次6ml，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml溶解作为供试品溶液；另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液；分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂是乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水按质量比15:1:1:2混合；薄层色谱喷以10％硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。

36、进一步地，盐酸黄柏碱的薄层色谱鉴别如下：

37、取肾安胶囊内容物6g，加1％醋酸甲醇溶液60ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml溶解作为供试品溶液；

38、另取盐酸黄柏碱对照品用甲醇溶解制成0.5mg/ml的对照品溶液；

39、分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；展开剂为三氯甲烷：甲醇按质量比4:1混合；

40、薄层色谱置碘蒸气中熏蒸10分钟至斑点显色清晰，供试品色谱在与盐酸黄柏碱对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。

41、本发明的薄层色谱鉴别方法中：

42、1、供试品溶液、阴性对照溶液的制备

43、(1)芸香苦素的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用水、乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。

44、结果表明：水提取物的薄层色谱无芸香苦素的斑点；乙醇和甲醇提取物的薄层色谱均有芸香苦素的斑点。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以甲醇为溶剂超声处理的方法来制备芸香苦素薄层色谱鉴别供试品溶液。缺石椒草的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。

45、(2)熊果酸的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用水、乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。

46、结果表明：水提取物的薄层色谱无熊果酸的斑点；乙醇和甲醇提取物的薄层色谱均有熊果酸的斑点。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以甲醇为溶剂超声处理的方法来制备熊果酸薄层色谱鉴别供试品溶液。缺肾茶的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。

47、(3)苍术酮的薄层鉴别：取胶囊内容物，分别采用乙醇、甲醇和正己烷为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。

48、结果表明：乙醇、甲醇、正己烷均能提取苍术酮，但正己烷提取物的斑点更清晰，干扰斑点更少。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以正己烷为溶剂超声处理的方法来制备苍术酮薄层色谱鉴别供试品溶液。缺白术的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。

49、(4)甘草苷的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。

50、结果表明：甲醇和乙醇的提取物均不能获得良好的薄层色谱，但以甲醇超声处理获得提取物的薄层色谱斑点相对更清晰。为改进薄层色谱效果，进行了以下的样品前处理：

51、胶囊内容物先加乙酸乙酯超声处理，滤过，弃去乙酸乙酯液，药渣再加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液。缺白术的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。

52、(5)盐酸黄柏碱的薄层鉴别：取胶囊内容物，分别采用甲醇、1％醋酸甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。

53、结果表明：以1％醋酸甲醇为溶剂能有效提取黄柏碱，回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以1％醋酸甲醇为溶剂超声处理的方法来制备盐酸黄柏碱薄层色谱鉴别供试品溶液。缺黄柏的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。

54、2、薄层色谱展开剂的筛选

55、(1)芸香苦素的薄层色谱鉴别：以硅胶g薄层色谱板为固定相考察了环己烷：乙酸乙酯(50:50)、环己烷：丙酮(80:20)、石油醚(60～90℃)：乙酸乙酯：甲酸(30:30:1)等展开系统。结果表明以石油醚(60～90℃)：乙酸乙酯：甲酸(30:30:1)为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。

56、(2)熊果酸的薄层色谱鉴别：以硅胶g薄层色谱板为固定相考察了石油醚(60～90℃)：丙酮：甲醇(8:2:0.3)、石油醚(60～90℃)：甲酸乙酯：甲酸(15:5:1)、环己烷：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇(25:15:5:2)、甲苯：乙酸乙酯:冰乙酸(12:4:0.5)等展开系统。结果表明以石油醚(60～90℃)：丙酮：甲醇(8:2:0.3)为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。

57、(3)苍术酮的薄层鉴别：以硅胶g薄层色谱板为固定相考察了石油醚(60～90℃)：甲酸乙酯(50:1)、石油醚：三氯甲烷(20:1)、环己烷等展开系统。结果表明以石油醚(60～90℃)：甲酸乙酯(50:1)为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。

58、(4)甘草苷的薄层色谱鉴别：以硅胶g薄层色谱板为固定相考察了三氯甲烷：甲醇(6:1)、正丁醇：乙酸乙酯：水(4:1:5，下层溶液)、乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水(15:1:1:2，上层溶液)等展开系统。结果表明以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水(15:1:1:2，上层溶液)为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。

59、(5)盐酸黄柏碱的薄层鉴别：以硅胶g薄层色谱板为固定相考察了三氯甲烷：甲醇(4:1)、正丁醇：乙酸乙酯：水(4:1:5，下层溶液)、三氯甲烷：丙酮(5:1，氨水饱和)等展开系统。结果表明以三氯甲烷：甲醇(4:1)为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。

60、3、硅胶g薄层色谱板的比较

61、根据上述确定的各种的薄层色谱条件，比较了青岛海洋化工集团干燥剂厂、烟台信德科技公司和默克公司(上海)生产的硅胶g薄层色谱板的分离效果。结果表明所有厂家的硅胶g薄层色谱板在上述薄层色谱件下均有较好的分离效果，在实际应用中可以选择不同厂家的硅胶g薄层色板。

62、4、展开的环境温度、湿度对薄层色谱的影响

63、考察了不同展开温度、湿度对上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别的影响，在展开温度10℃～30℃、相对湿度35％～80％的条件下，上述薄层色谱均有较好分离效果。结果表明上述薄层色谱鉴别方法对具体的展开温度、湿度无特殊要求，在普通实验室即可完成薄层色谱鉴别工作。

64、5、展开剂蒸汽饱和时间的影响

65、考察了展开剂不同饱和时间对上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别的影响，展开剂不饱和、饱和10分钟、20分钟对薄层色谱无明显影响。结果表明在实际应用中展开剂不需预饱和即可进行薄层色谱鉴别。

66、6、上述薄层色谱鉴别方法的专属性

67、按照上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别方法，制备供试品溶液、对照品溶液；并平行以供试品溶液相同的方法制备相应的阴性溶液。

68、按照上述确定的展开方法，分别吸取相应的供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液点于硅胶g薄层色谱板上，用确定的展开剂展开、显色。供试品薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点；阴性対照溶液没有相应斑点，其它成分无干扰。结果表明上述薄层色谱鉴别方法对其鉴别的代表性成分具有专属性。

69、与现有技术比较，本发明的优点在于：

70、(1)本发明提供的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，与现行的“肾安胶囊”药品标准比较，系统建立了肾安胶囊组方主要药材代表性成分芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱的薄层鉴别方法，完善和提高了民族药肾安胶囊的质量检测方法。

71、(2)本发明中，样品前处理采用超声处理样品以提取各组方药材的代表性化学成分，简化了实验操作步骤，缩短了供试溶液制备时间，排除了其它物质的干扰。

72、(3)本发明中，筛选的展开剂系统对相应的被检测成分分离效果好，薄层色谱斑点清晰，结果判断明确，能客观、高效的的鉴别民族药“肾安胶囊”主要组方药材中的代表性成分。