重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒及其使用方法与流程

本发明属于医疗检测器械，具体涉及一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒及其使用方法。

背景技术：

1、1、目前国内市场中没有专用于重组乙型肝炎疫苗(cho细胞)的细菌内毒素快速检测试剂盒同类产品。2、药典规定的重组乙型肝炎疫苗(cho细胞)细菌内毒素凝胶法检测所使用到的细菌内毒素标准品与细菌内毒素检查用水(以下简称bet用水)为通用的标准品与通用溶剂，适用于检测各类药品中细菌内毒素的含量，对重组乙肝疫苗不具有专属性。3、现有检测方法对操作人员试验水平要求较高，操作人员对细菌内毒素检测方法未熟悉掌握时，难以准确计算标准品与溶剂的稀释比例，造成检测结果假阳性或假阴性，影响产品检测结果判定。4、目前细菌内毒素检测稀释供试品等步骤多采用人工手动稀释的方式，在多级稀释步骤中容易产生人为操作误差，影响细菌内毒素检测的准确性。

技术实现思路

1、鉴于现有技术中的上述缺陷或不足，本发明为了解决上述现有技术中存在的问题，提供了一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒及其使用方法。

2、其主要技术方案为：一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒，试剂盒内包括以下物品：细菌内毒素工作标准品1支、鲎试剂10支、a液：1×pbs缓冲液1支(5ml/支)、b液：细菌内毒素检查(bet)用水1瓶(50ml/瓶)、无热原玻璃试管6支、试管架2个、安剖开瓶器1支、封口膜2张、说明书1张。

3、进一步的，所述细菌内毒素工作标准品规格为4eu/支、鲎试剂规格为0.25eu/ml，0.1ml/支、无热原玻璃试管规格为8×150mm。

4、重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

5、(1)将10支鲎试剂开封，在每支安瓿中加入b液0.10ml复溶；

6、(2)制备a、b、d、e、f五组溶液，每组分别取0.10ml加入复溶鲎试剂中，每组溶液制备2管；

7、(3)按不同布局放入安瓿试管架，用封口膜封覆盖试管架，置于37℃±1℃恒温器中温育60min±2min；

8、(4)温育结束后，将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，可判断结果。

9、进一步的，所制备的溶液包括样品规格为1.0ml:20μg的溶液和样品规格为0.5ml:10μg的溶液，制备样品规格为1.0ml:20μg的溶液为

10、a液(阴性对照1)：1×pbs缓冲液(10mmol/l)；

11、b液(阴性对照2)：细菌内毒素检查用水(bet用水)；

12、c液(标准品溶液)：将细菌内毒素工作标准品1支(4eu/支)加a液4.0ml复溶后涡旋15min备用，每次使用前再涡旋30s；

13、d液(供试品阳性溶液)：样品0.10ml+a液0.30ml+b液1.6ml+c液2.0ml。按顺序加入溶液，每步混匀30s；

14、e液(供试品溶液)：样品0.10ml+a液0.30ml+b液3.6ml。按顺序加入溶液，每步混匀30s；

15、f液(阳性对照液)：b液0.20ml+c液0.20ml，混匀30s，

16、制备样品规格为0.5ml:10μg的溶液

17、d液(供试品阳性溶液)：样品0.05ml+a液0.15ml+b液1.8ml+c液2.0ml。按顺序加入溶液，每步混匀30s；

18、e液(供试品溶液)：样品0.05ml+a液0.15ml+b液3.8ml。按顺序加入溶液，每步混匀30s。

19、本发明的有益效果在于：

20、本试剂盒专门针对重组乙型肝炎疫苗(cho细胞)细菌内毒素检查而设计，在符合《中国药典》通则1143“细菌内毒素检查法”要求的前提下，省略检测人员计算步骤，简少试验操作难度和稀释步骤，最大程度的简化细菌内毒素检测难度的同时，提高检测效率。同时采用含量更低的细菌内毒素标准品，相比传统标准品消耗减少50倍，降低检测成本，尤其适用于单批少量样本检测。该试剂盒减少环境污染和不必要的实际资源消耗。

技术特征：

1.一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒，其特征在于：试剂盒内包括以下物品：细菌内毒素工作标准品1支、鲎试剂10支、a液：1×pbs缓冲液1支、b液：细菌内毒素检查用水1瓶、无热原玻璃试管6支、试管架2个、安剖开瓶器1支、封口膜2张、说明书1张。

2.根据权利要求1所述的一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒，其特征在于：所述细菌内毒素工作标准品规格为4eu/支、鲎试剂规格为0.25eu/ml，0.1ml/支、无热原玻璃试管规格为8×150mm。

3.根据权利要求1所述的一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒的使用方法，包括样品规格为1.0ml:20μg的溶液和样品规格为0.5ml:10μg的溶液，其特征在于：制备样品规格为1.0ml:20μg的溶液为a液阴性对照1：1×pbs缓冲液10mmol/l；

技术总结
本发明提供一种一种重组乙型肝炎疫苗细菌内毒素快速检测试剂盒及其使用方法，试剂盒内包括以下物品：细菌内毒素工作标准品1支、鲎试剂10支、A液：1×PBS缓冲液1支(5ml/支)、B液：细菌内毒素检查(BET)用水1瓶(50ml/瓶)、无热原玻璃试管6支、试管架2个、安剖开瓶器1支、封口膜2张、说明书1张，本试剂盒针对重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)细菌内毒素检查项目，按照药典规定的限值预先设置溶液浓度，不需要检验人员按照限值再次计算稀释步骤和溶液浓度，按照说明书进行加样操作即可完成检测，重复实施难度低，适用于具备和不具备内毒素检查经验的人员操作。

技术研发人员：施麟,刘雪莉,张雨,祁祯,刁立琴,李晓利,杨举,王亚如,胡非子,谢媛,王艳泽
受保护的技术使用者：河北省药品医疗器械检验研究院（河北省化妆品检验研究中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14