磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法和应用与流程

本发明涉及一种磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法和应用。

背景技术：

1、磺丁基倍他环糊精钠(betadex sulfobutyl ether sodium)是20世纪90年代由美国cydex公司开发的β-环糊精衍生物，应用于增加药物溶解度和稳定性、提高药物生物利用度、调节药物释放速度、防止挥发性成分溢散、改善不良气味、减少刺激性、降低不良反应等方面。

2、磺丁基倍他环糊精钠是由β-环糊精与1，4-丁烷磺内酯在碱性条件下发生取代反应后，得到的产物。一般地，1，4-丁烷磺酸内酯的水解过程中会产生副产物4-羟丁基-1-磺酸；在取代反应过程中两个4-羟丁基-1-磺酸的缩合反应会生成副产物二(4-磺丁基)醚二钠；β-环糊精中会引入无机杂质氯化钠；β-环糊精与1，4-丁烷磺内酯的取代反应结束后，采用磷酸调整溶液的ph值进行中和时，会引入磷酸盐杂质。

3、美国药典(usp43)的磺丁基倍他环糊精钠各论中收载了离子色谱法检测4-羟丁基-1-磺酸钠、氯化钠、二(4-磺丁基)醚二钠，该方法需配制两种柱清洗液和两相流动相，样品的分析时间为40min，冲洗时间为70min。但该方法存在流动相配制较为复杂，分析样品的总时间长达110min的缺陷，而且，其中完全未涉及当磺丁基倍他环糊精钠中存在磷酸盐杂质时，如何分离检测。

4、因此，亟需提供一种流动相配制简单、分离时间短，且能够同时分离磺丁基倍他环糊精盐中4-羟丁基-1-磺酸钠、二(4-磺丁基)醚二钠、氯化钠和磷酸盐四种杂质的分离方法，特别是对于磺丁基倍他环糊精钠。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服了现有技术中对磺丁基倍他环糊精钠中的杂质进行检测时，流动相配制复杂，分析样品时间较长，且无法同时分离三种以上的杂质的缺陷，而提供的一种磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法和应用。本发明中磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法用时短，检测快速，可无需额外的条件对柱子进行清洗，方便快捷；流动相配制简单，准确度高，可将磷酸盐与其他杂质有效分离，能够实现准确、快速地检测磺丁基倍他环糊精盐中的四种杂质。

2、为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供的技术方案之一为：一种磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法，其包括下述步骤：采用离子色谱法对磺丁基倍他环糊精盐中的杂质进行分离；

4、所述离子色谱法中，流动相为流动相a和流动相b；流动相a为氢氧化钾溶液或者氢氧化钠溶液；流动相b为水；

5、所述流动相的梯度洗脱条件如下：

6、 时间(min) 离子浓度(mm) 0 10.00 4 10.00 10 15.00 24 15.00 40～55 30.00～50.00 45～60 30.00～50.00 46～61 10.00 50～65 10.00

7、其中，所述离子浓度是指流动相中氢氧根离子的浓度。

8、本发明中，所述磺丁基倍他环糊精盐优选为磺丁基倍他环糊精钠。

9、本发明中，所述离子色谱法优选采用赛默飞ics-5000+离子色谱仪。

10、本发明中，所述流动相b中，所述水可为本领域常规，优选为超纯水。

11、本发明中，当所述流动相a为氢氧化钾溶液时，所述氢氧化钾溶液可为本领域常规，优选为离子色谱仪在线电解淋洗液发生器自动生成的氢氧化钾溶液。所述氢氧化钾溶液的浓度优选为40～50mm。

12、当所述流动相a为氢氧化钠溶液时，所述氢氧化钠溶液可为本领域常规。所述氢氧化钠溶液的浓度优选为40～50mm。

13、本发明中，所述流动相的梯度洗脱条件优选如下：

14、 时间(min) 离子浓度(mm) 0 10.00 4 10.00 10 15.00 24 15.00 50 40.00 55 40.00 56 10.00 60 10.00

15、其中，所述离子浓度是指流动相中氢氧根离子的浓度；本领域技术人员可以理解，一般地，不同的离子浓度是由流动相a和流动相b混合稀释得到。本发明中，该稀释过程可根据设置的梯度洗脱条件自动进行。

16、本发明中，所述流动相的梯度洗脱条件中，本领域技术人员可以理解，离子浓度是随着洗脱时间的变化而梯度变化的。

17、例如，当洗脱时间在40～55min内的任意时间x min时，离子浓度可由24min时的15.00mm梯度变化为30.00～50.00mm内的任意离子浓度ymm。其中，所述离子浓度的变化速率可为

18、再例如，当洗脱时间为50min时，离子浓度可由24min时的15.00mm梯度变化为40.00mm。其中，所述离子浓度的变化速率可为

19、本发明中，所述离子色谱法中，色谱柱可为本领域常规，例如阴离子色谱柱；优选为赛默飞ionpactm as 11-hc色谱柱；更优选地，所述赛默飞ionpactm as11-hc色谱柱配有ionpactmag11-hc预柱。

20、所述色谱柱的直径可为本领域常规，例如3.0～5.0mm，优选为4.0mm。

21、所述色谱柱的长度可为本领域常规，例如200～300mm，优选为250mm。

22、所述的色谱柱的柱温可为本领域常规，例如25～40℃，优选为30℃。

23、本发明中，所述离子色谱法中，根据本领域常规，一般采用离子色谱仪对供试品溶液和对照品溶液进行分析检测。

24、其中，所述供试品溶液或所述对照品溶液的进样流速可为本领域常规，例如独立地为0.5～1.5ml/min，优选为1.0ml/min。

25、其中，所述供试品溶液或所述对照品溶液的进样体积可为本领域常规，例如独立地为10～30μl，再例如20～30μl，优选为25μl。

26、其中，所述供试品溶液优选为含有磺丁基倍他环糊精盐的溶液；更优选为含有磺丁基倍他环糊精钠的溶液。

27、其中，所述供试品溶液中，所述磺丁基倍他环糊精盐的浓度可为3～5mg/ml，优选为4mg/ml。

28、其中，所述供试品溶液中，采用的溶剂可为本领域常规，例如超纯水。

29、其中，所述对照品溶液优选为含有4-羟丁基-1-磺酸、氯化钠、二(4-磺丁基)醚二钠、磷酸和磷酸盐中的一种或多种物质的溶液。例如，含有4-羟丁基-1-磺酸、氯化钠和磷酸的溶液，或者，含有4-羟丁基-1-磺酸、氯化钠和磷酸盐的溶液，或者，含有二(4-磺丁基)醚二钠的溶液。

30、所述磷酸盐可包括磷酸根离子、磷酸氢根离子、或者、磷酸二氢根离子；在离子色谱法检测过程中，所述磷酸氢根离子或所述磷酸二氢根离子均会被淋洗液(氢氧化钾或氢氧化钠)碱化为磷酸根，并在色谱谱图中体现为同一个峰。

31、所述对照品溶液中，当含有4-羟丁基-1-磺酸时，所述4-羟丁基-1-磺酸的浓度可为3～5μg/ml，优选为4μg/ml。

32、所述对照品溶液中，当含有双(4-磺丁基)醚二钠时，所述双(4-磺丁基)醚二钠的浓度可为3～5μg/ml，优选为4μg/ml。

33、所述对照品溶液中，当含有氯化钠时，所述氯化钠的浓度可为6～10μg/ml，优选为8μg/ml。

34、所述对照品溶液中，当含有磷酸盐时，所述磷酸盐的浓度可为6～10μg/ml，优选为8μg/ml。

35、所述对照品溶液中，采用的溶剂可为本领域常规，例如水。

36、本发明中，优选地，所述离子色谱法中，分离柱为阴离子色谱柱，淋洗液为纯化水和氢氧化钾、或者、纯化水和氢氧化钠，并采用电导检测器，对供试品溶液和对照品溶液进行梯度洗脱，分析其中的4-羟丁基-1-磺酸钠、氯化钠、二(4-磺丁基)醚二钠和磷酸盐四种杂质，并同时记录峰面积，采用外标法计算供试品中各离子的含量。

37、其中，所述电导检测器优选采用负离子模式。所述电导检测器的抑制器电流优选为99ma。

38、本发明提供的技术方案之二为：一种如前所述的磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分离方法在磺丁基倍他环糊精盐中杂质的分析检测或含量测定中的应用。

39、其中，所述磺丁基倍他环糊精盐优选为磺丁基倍他环糊精钠。

40、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

41、本发明所用试剂和原料均市售可得。

42、本发明的积极进步效果在于：

43、本发明中的分离方法流动相配制简单，可采用检测仪器自带的高浓度氢氧化钾或氢氧化钠作为淋洗液，仅需额外准备超纯水，无需离线配制混合流动相。

44、本发明中的分离方法采用梯度洗脱程序，可快速准确的检测出磺丁基倍他环糊精盐中四种杂质；特别是对于磺丁基倍他环糊精钠，每个样品的分析时间可仅为60分钟，远低于现有技术中的110分钟；同时，样品进样分析后，梯度程序可同步完成柱洗脱，样品分析后下针无残留；而且，本发明中的分离方法可实现在不同的洗脱浓度下将4-羟丁基-1-磺酸钠、氯化钠、二(4-磺丁基)醚二钠和磷酸盐四种杂质进行基线分离；且分离度较高，磷酸盐杂质与其相邻的二(4-磺丁基)醚二钠杂质的分离度可＞2.0；检测灵敏，准确度高。