聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用与流程

本发明涉及抗凝血，具体涉及聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用。

背景技术：

1、聚茴香脑磺酸钠是用于血液细菌培养瓶不可缺少的重要原料，它可以中和血液里的微量抗生素、抗体和补体，以提高血培养的阳性率。同时还具有抗凝血作用，它的抗凝血机理是：提高抗凝血酶ⅲ(atⅲ)的活性，抑制凝血过程中必须的丝氨酸蛋白酶、凝血酶和活化因子(fxa)的活性。

2、由于聚茴香脑磺酸钠来源于藻类硫酸多糖，其抗凝血性能存在较大的批间差异，对于其抗凝血性能目前可以采用抽取健康人员或动物的新鲜血液进行抗凝血测试，但该方法操作繁琐，样本获取困难，且存在个体差异，导致结果不准确，无法检测确切的效价。

3、因此，亟需研发一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法，以解决现有的聚茴香脑磺酸钠抗凝血检测中存在的问题。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术存在的问题，提供了聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法，该方法采用解冻过滤后的动物血浆、柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液对聚茴香脑磺酸钠的抗凝血活性进行检测，样本更容易获得，克服了个体差异，提高了检测结果的准确性。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明提供了一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法，包括以下步骤：

4、(1)向一系列浓度相同，体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入柠檬酸钠溶液、氯化钙溶液和动物血浆混匀，水浴静置，观察混合溶液的凝固情况；

5、(2)根据步骤(1)的凝固情况，记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积v；

6、(3)根据步骤(2)得到的凝固点体积，计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价x。

7、优选地，步骤(1)中所述系列中浓度相同，体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液至少有10组，每组之间的体积间隔≤0.1ml。

8、进一步优选地，所述聚茴香脑磺酸钠溶液的浓度可以为0.01-0.1％。

9、进一步优选地，所述聚茴香脑磺酸钠溶液的体积为0.5-5ml。

10、更进一步优选地，所述系列中聚茴香脑磺酸钠溶液的浓度为0.0125％，所述聚茴香脑磺酸钠溶液的体积为1-2ml，每组之间体积的间隔为0.1ml，共包括11组。

11、优选地，步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的浓度为7-9％；进一步优选为8％。

12、优选地，步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的加入体积为10-30μl；进一步优选为20μl。

13、优选地，步骤(1)中所述氯化钙溶液的浓度为0.2-0.3％；进一步优选为0.25％。

14、优选地，步骤(1)中所述氯化钙溶液的加入体积为750-850μl，进一步优选为800μl。

15、优选地，步骤(1)中所述动物血浆为新鲜冷冻血浆(采血后6h内从全血中制备而成)，使用前经解冻融化、过滤处理。所述的解冻融化为本领域常规的解冻技术，具体可选择在30-37℃的水浴中融化，至血浆完全融化为液体即可。所述过滤为本领域常规意义的过滤，可采用脱脂棉进行过滤，去除絮状物。

16、进一步优选地，所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆、牛血浆、鸡血浆、猪血浆或马血浆中的任一种；更进一步优选的，所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆或牛血浆中的任一种，最优选地，所述新鲜冷冻血浆为羊血浆。

17、优选地，步骤(1)中所述动物血浆的加入体积为1000μl。

18、优选地，步骤(1)中所述水浴静置的条件为：在37℃下水浴静置1h。

19、优选地，步骤(2)中所述凝固点体积v满足：v凝固＜v＜v不凝固，

20、其中，v凝固为混合溶液出现凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最大体积；

21、v不凝固为混合溶液不发生凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最小体积。

22、优选地，步骤(3)中所述抗凝血效价x的计算公式为：x＝v/v动物血浆；

23、其中，v动物血浆为动物血浆的加入体积。

24、如无特殊说明，本发明中的百分数均为质量百分数。

25、本发明还提供了一种上述聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法在聚茴香脑磺酸钠质量控制中的应用。

26、优选地，所述应用中，通过比较上述聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法得到的抗凝血效价x的大小，进行不同批次间的聚茴香脑磺酸钠质量控制，具体地，抗凝血效价x的值越小，则该批次的聚茴香脑磺酸钠抗凝性能越好。

27、本发明所取得的技术效果是：

28、(1)本发明采用解冻后的动物血浆、柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液对聚茴香脑磺酸钠的抗凝血活性进行检测，相比现有技术，无需采用新鲜血液，样本更容易获得，且克服了个体差异，可定量检测聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价，提高了检测结果的准确性。

29、(2)本发明的检测方法，操作简便，准确性高，重复性较好，适合规模化推广应用。

30、(3)本发明可定量的评判不同批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝性能，且准确性更高，为聚茴香脑磺酸钠质量控制提供了技术支持。

技术特征：

1.一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述系列中浓度相同，体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液至少有10组，每组之间的体积间隔≤0.1ml。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的浓度为7-9％，加入体积为10-30μl。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述氯化钙溶液的浓度为0.2-0.3％，加入体积为750-850μl。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆、牛血浆、鸡血浆、猪血浆或马血浆中的任一种。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述动物血浆的加入体积为1000μl。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述水浴静置的条件为：在37℃下水浴静置1h。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述凝固点体积v满足：

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述抗凝血效价x的计算公式为：x＝v/v动物血浆；

10.权利要求1-9任一项的聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法在聚茴香脑磺酸钠质量控制中的应用。

技术总结
本发明提供了聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用，该检测方法，包括以下步骤：(1)向一系列浓度相同，体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入柠檬酸钠溶液、氯化钙溶液和解冻过滤后的动物血浆混匀，水浴静置，观察混合溶液的凝固情况；(2)根据凝固情况，记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V；(3)根据得到的凝固点体积V，计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X。上述方法无需采用新鲜血液，样本更容易获得，且克服了个体差异，可定量检测聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价，提高了检测结果的准确性；可定量的评估不同批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝性能，为聚茴香脑磺酸钠质量控制提供了技术支持。

技术研发人员：邓存兴,彭武媚,乌月恒
受保护的技术使用者：珠海美华医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12