一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法与流程

本发明属于药物分析，涉及一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法，特别是涉及一种使用hplc法测定芳基丙酸类化合物中异构体准确含量的方法。

背景技术：

1、洛索洛芬钠是由日本第一三共公司开发的芳基丙酸类非甾体抗炎药，是非选择性环氧化酶抑制剂，通过抑制花生四烯酸催化前列腺素和不饱和脂肪酸的合成而产生药效，从而达到抗炎镇痛的目的。洛索洛芬是一种肝脏代谢型的前药，在体内可生物转化具有3个手性中心的羟基代谢物，理论上生成8个立体异构体，其中发挥主要生物活性的是2's,1'r,2's-反式羟基活性代谢物，即式ⅰ化合物：

2、

3、本发明在制备上述化合物的过程中，不可避免会产生其他7种不具备生物活性的异构体。现有技术中仅记载了洛索洛芬钠(jp17)含量检测方法，该方法可用于检测洛索洛芬钠成品中的含量，但对于洛索洛芬活性代谢物中的8个异构体并不适用，目前无参考方法可以借鉴。

4、鉴于此，研发出一种能够有效分离洛索洛芬活性代谢物中的8个异构体，并且符合操作简单，试剂易得，重现性好，环境污染小的方法非常有意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法。

2、本发明主要是通过如下技术方案实现的：

3、本发明提供一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法，所述方法采用高效液相色谱检测，能够同时检测包括式ⅰ化合物在内的8种异构体，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

4、根据本发明实施方案，所述方法色谱条件设置为：

5、色谱柱：chiralpak ad-h柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；

6、流动相：正己烷、甲醇、异丙醇的混合溶液；

7、柱温：30～40℃

8、流速：0.1～1.0ml/min；

9、进样体积：5～20μl；

10、检测波长：200～250nm。

11、根据本发明实施方案，所述8种异构体包括式ⅰ化合物、杂质py2、杂质py3、杂质py4、杂质py5、杂质py6、杂质py7、杂质py8，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

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13、

14、根据本发明实施方案，本发明所述芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法，包括以下步骤：

15、(1)样品配制：

16、供试品溶液制备：精密量取本品约10mg，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

17、对照溶液制备：精密量取供试品溶液1ml，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

18、系统适用性溶液制备：精密量取式ⅰ化合物对照品、py2对照品、py3对照品、py4对照品、py5对照品、py6对照品、py7对照品、py8对照品各适量，加稀释剂振摇使溶解并定量稀释制成每1ml中含式ⅰ化合物对照品约0.3mg、py2对照品、py3对照品、py4对照品、py5对照品、py6对照品、py7对照品、py8对照品各约25μg的溶液，作为系统适用性溶液；

19、(2)色谱条件设置：

20、色谱柱：chiralpakad-h柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；

21、流动相：正己烷、甲醇、异丙醇的混合溶液；

22、柱温：30～40℃

23、流速：0.1～1.0ml/min；

24、进样体积：5～20μl；

25、检测波长：200～250nm；

26、(3)检测和计算：

27、精密量取系统适用性溶液20μ1，注入液相色谱仪，再精密量取对照溶液和供试品溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

28、根据本发明实施方案，所述稀释剂为正己烷、无水乙醇、三氟乙酸的混合溶液，体积比为65～75:25～35:2，优选为70:30:2。

29、根据本发明实施方案，所述流动相为正己烷、甲醇、异丙醇的混合溶液，体积比为88：8～10：2～4。

30、根据本发明实施方案，所述柱温为40℃

31、根据本发明实施方案，所述流速为1.0ml/min。

32、根据本发明实施方案，所述进样体积为20μl。

33、根据本发明实施方案，所述波长为220nm。

34、根据本发明实施方案，所述的杂质的检测限度为：供试品溶液的色谱图中如有与杂质py2、py3、py4、py5、py6、py7、py8峰保留时间一致的色谱峰，py5峰面积不得大于对照溶液中主峰面积的0.4倍即2.0％，其余杂质各峰面积均不得大于对照溶液中主峰面积的0.2倍即1.0％。

35、本发明有益效果：

36、本发明一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法，可以将洛索洛芬活性代谢物中的8个异构体完全分离，从而有效的控制洛索洛芬活性代谢物及其盐的质量，更有效的对洛索洛芬活性代谢物及其盐产品实现质量监控，对提高相关产品的质量有实际的指导意义。该分离测定方法专属性强，准确度高，操作简便，值得广泛推广进行应用，能够创造更为广阔的经济效益。

技术特征：

1.一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱检测，能够同时检测包括式ⅰ化合物在内的8种异构体，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述8种异构体包括式ⅰ化合物、杂质py2、杂质py3、杂质py4、杂质py5、杂质py6、杂质py7、杂质py8，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为正己烷、无水乙醇、三氟乙酸的混合溶液，体积比为65～75:25～35:2；优选为70:30:2。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述流动相为正己烷、甲醇、异丙醇的混合溶液，体积比为88：8～10：2～4。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述柱温为40℃。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述流速为1.0ml/min。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述进样体积为20μl。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述波长为220nm。

10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的杂质的检测限度为：供试品溶液的色谱图中如有与杂质py2、py3、py4、py5、py6、py7、py8峰保留时间一致的色谱峰，py5峰面积不得大于对照溶液中主峰面积的0.4倍即2.0％，其余杂质各峰面积均不得大于对照溶液中主峰面积的0.2倍即1.0％。

技术总结
本发明涉一种芳基丙酸类化合物中异构体的检测方法。所述方法采用高效液相色谱检测，可以将8个异构体完全分离，各色谱峰之间的分离度不小于1.5，从而有效的控制洛索洛芬活性代谢物及其盐的质量，更有效的对洛索洛芬活性代谢物及其盐产品实现质量监控，对提高相关产品的质量有实际的指导意义。

技术研发人员：冯云庆,晁阳,莫美玲,张琼燕,李斯,闵涛,李淦,龚磊
受保护的技术使用者：南京海融医药科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4