一种监测采样有效性的质控线及其应用的制作方法

本发明涉及生物医学体外检测，尤其涉及一种监测采样有效性的质控线及其应用。

背景技术：

1、对新冠病毒的检测以核酸检测为黄金标准，但核酸检测需要专业实验室条件和技术人员，检测时间较长，并且在样品的保存和运输中存在一定的不确定因素，集中采样的过程也有交叉感染的风险。相比之下，快速抗原检测由于简便快捷、成本低，并且可居家自测，被认为是重要的辅助筛查手段。

2、抗原检测是基于免疫层析技术，大多采用双抗体夹心法，并设计一条(或多条)检测线(t线)和一条质控线(c线)，通过定性或定量判读显示结果来确定检测结果。其中，c线的作用是监测标记抗体是否有效流过层析膜，是作为试剂的内控标准，c线显色表明试纸条有效，不显色表明试纸条无效，从而检测无效；t线和c线同时显色表示阳性，仅一条c线显色表示阴性。但是，这样的设计存在以下缺陷：

3、(1)若用水等非人源样本，或者不采样而直接将样本处理液滴入试纸板条，c线将显色，检测结果有效且为阴性。这是由无效采样带来的假阴性结果。

4、(2)若用橙汁、苏打水、可乐饮料等非人源样本，由于ph值不适宜导致抗原抗体非特异性结合，可能造成假阳性结果。

5、新冠病毒抗原检测要求采集呼吸道样本(鼻咽拭子和口咽拭子)，并且常常要求居家自测，在这样大体量的筛查中，总会存在一部分人由于某些原因不配合，或者取样操作不规范造成的假阴性或假阳性结果。因此，在大规模自测的背景下，增加一项监测采样有效性的内控标准是迫切需要的。

技术实现思路

1、为了解决在免疫层析检测中由于无效采样而造成检测结果不准确的问题，本发明在沿用传统的单一质控线的基础上，增加一条监测采样有效性的质控线，采取双质控线模式，可防止或大大减少无效采样带来的假阴性和假阳性结果，提高检测的准确性。

2、为了达到上述目的，本发明提供的技术方案如下：

3、本发明的第一目的是提供一种监测采样有效性的质控线，所述质控线包括第一质控线和第二质控线，其中第一质控线为鸡抗igy，第二质控线为人体鼻咽部蛋白第二抗体。

4、本发明的第二目的是提供一种双质控线模式的免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条包括pvc底板，所述pvc底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；

5、所述结合垫上喷涂有标记探针标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体包被液、标记探针标记的人体鼻咽部蛋白第一抗体包被液；

6、所述硝酸纤维素膜上喷涂有重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体包被液作为检测线，鸡抗igy作为第一质控线，人体鼻咽部蛋白第二抗体包被液作为第二质控线；

7、所述检测线、第一质控线、第二质控线之间互相间隔。

8、利用人体鼻咽部蛋白作为靶向物质，标记探针标记的人体鼻咽部蛋白第一抗体包被在结合垫上，人体鼻咽部蛋白第二抗体包被在硝酸纤维素膜上，作为第二质控线(c2)。

9、进一步地，人体鼻咽部蛋白为白细胞介素8、白蛋白、分泌型iga、细胞角蛋白20中的至少一种。

10、进一步地，所述标记探针为彩色乳胶微球、胶体金颗粒、荧光微球、半导体量子点、上/下转换纳米颗粒、长余辉材料、碳纳米点、钙钛矿纳米发光材料中的至少一种。

11、进一步地，所述标记探针标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体包被液中，重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体与标记探针的质量比为1：5-8；

12、所述标记探针标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体包被液的浓度为0.1-2.0mg/ml，在结合垫上的包被量为100-120μl；

13、所述标记探针标记的人体鼻咽部蛋白第一抗体包被液中，人体鼻咽部蛋白第一抗体与标记探针的质量比为1：8-10；

14、所述标记探针标记的人体鼻咽部蛋白第一抗体包被液的浓度为0.1-1.5mg/ml，在结合垫上的包被量为100-120μl。

15、进一步地，所述重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体包被液的浓度为0.1-2.0mg/ml，在硝酸纤维素膜上的包被量为80-100μl；

16、所述鸡抗igy的浓度为0.1-1.0mg/ml，在硝酸纤维素膜上的包被量为80-100μl。

17、进一步地，所述人体鼻咽部蛋白第二抗体包被液的浓度为0.1-1.0mg/ml，在硝酸纤维素膜上的包被量为100-120μl。

18、进一步地，检测线与第二质控线之间间隔为3-4mm，第二质控线与第一质控线之间间隔为2-3mm。

19、本发明的第三目的是提供一种双质控线模式的免疫层析检测试剂盒，所述检测试剂盒包括检测卡、样本提取液、试管架和生物安全垃圾袋；

20、所述检测卡为双质控线模式的免疫层析试纸条。

21、双质控线模式的免疫层析检测试剂盒的使用方法如下：

22、s1、采集鼻咽分泌物或者口咽分泌物样本；

23、优选地，鼻咽分泌物采集：用一次性采样拭子插入鼻腔，并轻轻推入后鼻咽，深入距离最少应达耳垂部位到笔尖长度的一半，旋转拭子几次，采集鼻腔粘膜液；

24、口咽分泌物采集：将拭子从口腔完全插入咽喉，以咽喉壁、上颚扁桃的发红部位为中心，适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁。

25、s2、将拭子上采集到的样本粘液浸泡在样本提取液中，洗脱样本粘液；

26、优选地，将采集的鼻咽/口咽分泌物后的拭子插入样本提取管溶液中，紧靠试管内壁旋转约10次，静置1min，沿提取管内壁挤压拭子；

27、s3、将含有样本的提取液滴入检测试纸卡3-4滴，15-20min内读取结果。

28、本发明的第三目的是提供上述双质控线模式的免疫层析试纸条或双质控线模式的免疫层析检测试剂盒在检测新型冠状病毒中的应用，检测结果判定标准为：

29、当第一质控线、第二质控线和检测线均显色，判定为阳性；

30、当第一质控线和第二质控线均显色，但检测线不显色，判定为阴性；

31、当第一质控线和第二质控线仅有一条线显色，或均不显色，判定为无效。

32、与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

33、与传统的单一质控线的免疫层析检测法相比，本发明增加一条监测采样有效性的质控线，采取双质控线模式，可防止或大大减少无效采样带来的假阴性和假阳性结果，提高新冠病毒检测的准确性。

技术特征：

1.一种监测采样有效性的质控线，其特征在于：所述质控线包括第一质控线和第二质控线，其中第一质控线为鸡抗igy，第二质控线为人体鼻咽部蛋白第二抗体。

2.一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括pvc底板，所述pvc底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；

3.根据权利要求1所述的监测采样有效性的质控线或权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：人体鼻咽部蛋白为白细胞介素8、白蛋白、分泌型iga、细胞角蛋白20中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：所述标记探针为彩色乳胶微球、胶体金颗粒、荧光微球、半导体量子点、上/下转换纳米颗粒、长余辉材料、碳纳米点、钙钛矿纳米发光材料中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：所述标记探针标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体包被液中，重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体与标记探针的质量比为1：5-8；

6.根据权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：所述重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体包被液的浓度为0.1-2.0mg/ml，在硝酸纤维素膜上的包被量为80-100μl；

7.根据权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：所述人体鼻咽部蛋白第二抗体包被液的浓度为0.1-1.0mg/ml，在硝酸纤维素膜上的包被量为100-120μl。

8.根据权利要求2所述的一种双质控线模式的免疫层析试纸条，其特征在于：检测线与第二质控线之间间隔为3-4mm，第二质控线与第一质控线之间间隔为2-3mm。

9.一种双质控线模式的免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括检测卡、样本提取液、试管架和生物安全垃圾袋；

10.一种由权利要求2、4、5、6、7、8任一项所述双质控线模式的免疫层析试纸条或权利要求9所述双质控线模式的免疫层析检测试剂盒在检测新型冠状病毒中的应用，其特征在于：

技术总结
本发明涉及生物医学体外检测技术领域，尤其涉及一种监测采样有效性的质控线及其应用。所述质控线包括第一质控线和第二质控线，其中第一质控线为鸡抗IgY，第二质控线为人体鼻咽部蛋白第二抗体。与传统单一质控线的免疫层析试纸条相比，本发明采取双质控线模式，可防止或大大减少无效采样带来的假阴性和假阳性结果，提高检测的准确性。

技术研发人员：余建夫,周旭亮
受保护的技术使用者：江西健伟生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12