一种小血藤提取物的制备方法及其检测方法与流程

本发明涉及中药现代化领域，具体涉及一种小血藤提取物的制备方法及其检测方法。

背景技术：

1、小血藤为茜草科植物金剑茜草rubia alata roxd的干燥根及根茎，其主要功效为凉血止血，止咳祛痰，通经。用于吐血，衄血，崩漏，经闭，黄疸，支气管炎，跌扑损伤。主要分布在西南地区如云南、四川、贵州等，其中金剑茜草在贵州广泛分布。药理学研究表明，其具有保护神经、抗炎免疫、解聚血小板聚集等作用。标准汤剂又称标准煎液，是一种传统的临床广泛使用的用药形式，标准汤剂系遵循中医药理论，按照临床汤剂煎煮方法规范化煎煮，固液分离，经适当浓缩制备或经适宜方法干燥制得，作为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的标准参照物。

2、由于标准汤剂是连接传统中药饮片和现代中药制剂的“桥梁”，为控制中药终端产品的质量提供了参照物，为标化中药不同用药形式，确保质量的均一性、疗效的一致性提供了参照物，为评价不同厂家产品质量的一致性提供了参照物，因此，中药标准汤剂质量标准的制定将为所有源于饮片的水煎剂的终产品的质量标准的制定提供基础。

3、目前关于小血藤的药材标准仅在《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003版)地方中药材标准有收载，尚无国家药材标准，且质量控制尚不完善，仅建立性状和显微鉴别，且相关文献报道并无相关含量测定质量控制手段的报道，较为粗疏，限制其应用及开发。

技术实现思路

1、针对现有技术中的问题，本发明提供一种小血藤标准汤剂的制备方法及其检测方法，以对中药配方颗粒的质量控制与标准研究进行规范，实现中药配方颗粒整体的质量控制和有效监督，并可为小血藤配方颗粒的质量控制提供参考。

2、本发明提供一种小血藤提取物的制备方法，包含下述步骤：

3、(1)取小血藤药材，加水煎煮，固液分离得到滤液；

4、(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-45℃～0℃，真空度为-0.2～0mbar；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，真空度为-0.1～0.1mbar，得到小血藤提取物。

5、优选地，步骤(1)中，所述加水煎煮次数为1-3次；

6、优选地，所述加水煎煮次数为2次；

7、优选地，每次加水煎煮小血藤药材与水的质量比为1:6-8；

8、优选地，每次加水煎煮时间为40-60分钟。

9、优选地，步骤(2)中，所述浓缩干燥温度为50-65℃；

10、优选地，预冻时间为150-200分钟，优选为180分钟；

11、优选地，一次干燥时间为2000-2500，优选为2340分钟，

12、优选地，二次干燥时间为350-400分钟，优选为360分钟。

13、优选地，所述小血藤提取物的出膏率为8.1％～21.1％。

14、本发明还提供所述的制备方法得到的小血藤提取物中绿原酸和/或隐绿原酸的质量含量的检测方法，包含下述步骤：

15、(1)对照品溶液的制备：

16、取绿原酸和隐绿原酸作为对照品，加甲醇制成溶液；

17、(2)供试品溶液的制备：

18、取所述的制备方法得到的小血藤提取物，加入溶剂进行提取；

19、(3)超高效液相色谱分析

20、吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为325nm，以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸水溶液为流动相b梯度洗脱，得到绿原酸100和隐绿原酸的含量。

21、优选地，步骤(2)中，所述溶剂选自水、50％乙醇、75％乙醇、乙醇、50％甲醇、75％甲醇、甲醇中的一种，优选地，所述溶剂为50％甲醇；

22、优选地，步骤(2)中，所述提取采用超声提取或回流提取中的一种，优选为超声提取，

23、优选地，提取时间为15-60min，优选为15min；

24、优选地，所述流动相a和流动相b的流速为0.20-0.30ml/min，优选为0.25ml/min，

25、优选地，步骤(3)中，所述梯度洗脱程序为：

26、0min，流动相a的体积百分比为1％，流动相b的体积百分比为99％；

27、4min，流动相a的体积百分比为6％，流动相b的体积百分比为94％；

28、10min，流动相a的体积百分比为9％，流动相b的体积百分比为91％；

29、16min，流动相a的体积百分比为18％，流动相b的体积百分比为82％；

30、22min，流动相a的体积百分比为20％，流动相b的体积百分比为80％；

31、23min，流动相a的体积百分比为90％，流动相b的体积百分比为10％；

32、25.1min，流动相a的体积百分比为1％，流动相b的体积百分比为99％；

33、27min，流动相a的体积百分比为1％，流动相b的体积百分比为99％。

34、优选地，以干燥品计，所述制备方法制备得到的小血藤提取物中绿原酸和隐绿原酸的总质量含量为1.01％～6.37％；

35、优选地，所述制备方法制备得到的小血藤提取物中绿原酸和隐绿原酸的总转移率为15.07％～69.18％。

36、本发明还提供所述的制备方法得到的小血藤提取物的特征图谱的检测方法，包含下述步骤：

37、(1)参照物溶液的制备：

38、取小血藤对照药材，加甲醇制成溶液；

39、(2)供试品溶液的制备：

40、取所述的制备方法得到的小血藤提取物，加入溶剂进行提取；

41、(3)超高效液相色谱分析

42、吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以流动相进行梯度洗脱，得到小血藤提取物的特征图谱。

43、优选地，步骤(2)中，所述溶剂选自水、95％乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇、50％甲醇中的一种，优选地，所述溶剂为75％甲醇，

44、优选地，步骤(2)中，所述提取采用回流提取、超声提取或溶解提取中的一种，

45、优选地，所述提取采用超声提取，

46、优选地，提取时间为15-45min，

47、优选地，提取时间为15min。

48、优选地，步骤(3)中，检测波长为190～400nm，优选为245nm；

49、优选地，所述梯度洗脱程序为：

50、0-10min，流动相a的体积百分比为6→8.5％，流动相b的体积百分比为94→91.5％；

51、10-15min，流动相a的体积百分比为8.5→10％，流动相b的体积百分比为91.5→90％；

52、15-18min，流动相a的体积百分比为10→11％，流动相b的体积百分比为90→89％；

53、18-19min，流动相a的体积百分比为11％，流动相b的体积百分比为89％；

54、19-31min，流动相a的体积百分比为11→15％，流动相b的体积百分比为89→85％；

55、31-35min，流动相a的体积百分比为15→18％，流动相b的体积百分比为85→82％；

56、35-35.1min，流动相a的体积百分比为18→6％，流动相b的体积百分比为82→94％；

57、35.1-37min，流动相a的体积百分比为6％，流动相b的体积百分比为94％。

58、优选地，步骤(3)中，所述流动相包含有机相a和水相b，

59、优选地，所述有机相a选自乙腈或甲醇中的一种或两种以上的组合，优选为乙腈；

60、优选地，所述水相b选自水、0.05％甲酸溶液、0.1％甲酸溶液、0.1％醋酸溶液或0.05％磷酸溶液中的一种或两种以上的组合，

61、优选地，流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液；

62、优选地，所述流动相流速为0.20-0.30ml/min，优选为0.25ml/min。

63、优选地，步骤(3)中柱温为30-40℃，优选地，所述柱温为35℃。

64、优选地，所述特征谱图的特征峰不少于5个，与绿原酸参照物相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％之内，规定值含有0.33、0.38、1.10、3.37。

65、本发明提供的特征图谱检测方法，采用用超高相液相色谱，具有简便、稳定、精密度高及重现性好等特点，而且所得的指纹图谱的峰多，峰型好，易于鉴别，准确可靠。可为小血藤提取物的质量评价提供质量控制手段。

66、本发明中以高效液相色谱法测定小血藤提取物中绿原酸和隐绿原酸的总量为指标，制定提取物的含量内控标准，为小血藤提供质量控制手段。