薏苡仁的薄层鉴别、含量测定及特征图谱测定方法与流程

本发明涉及薏苡仁检测，尤其涉及一种薏苡仁的薄层鉴别、含量测定及特征图谱测定方法。

背景技术：

1、薏苡仁为禾本科植物薏米coix lacryma-jobi l.var.mayuen(roman.)stapf的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下果实，再晒干，除去外壳、黄褐色种皮和杂质，收集种仁。薏苡仁是常用中药之一，药用价值高，具有利水渗湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结的功效，主要用于水肿，脚气，小便不利，脾虚泄泻，湿痹拘挛，肺痈，肠痈，赘疣，癌肿。

2、国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020年版一部[s].北京:中国医药科技出版社，2020.収载了薏苡仁，并对该品种的薄层色谱鉴别、液相鉴别、含量测定等检测方法作出相关规定。该标准中的薏苡仁薄层色谱鉴别方法中，使用的展开剂系统为石油醚(60～90℃)-乙醚-冰醋酸，显色剂为5％香草醛硫酸溶液，检视方法为白光，其中乙醚为受管控的易制毒试剂，不易获得，且具有肝毒性、肾毒性、神经毒性，对检测人员肝脏、肾脏、神经系统危害较大；5％香草醛硫酸溶液作为显色剂所获得的薄层色谱图有部分斑点在白光下检视不够直观清晰，影响分析和判别。该标准中的薏苡仁含量测定方法中，使用的流动相为乙腈-二氯甲烷(65:35)，使用二氯甲烷前需要排空高效液相泵内及管道内的水相，增加了实验的繁琐性；使用二氯甲烷会加大高效液相泵部件的磨损，且二氯甲烷中的卤元素对高效液相金属管壁和色谱柱有腐蚀作用；该标准检测指标少，只引进了甘油三油酸酯作为检测指标，没有引进其他活性成分作为检测指标，未能更充分地反映出供试品的真实质量。该标准中的薏苡仁液相鉴别方法与含量测定方法大致相同，且没有对每个特征峰规定相对保留时间，不利于检测人员准确分析。

3、因此，现有技术存在缺陷，需要改进。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：提供一种薏苡仁的薄层鉴别、含量测定及特征图谱测定方法，减少检测过程中对操作人员身体的损伤，能在色谱图上清晰显示，保证判别的准确性；便于对薏苡仁的真实质量进行有效可靠的检测，便于检测人员准确分析。

2、本发明的技术方案如下：提供一种薏苡仁的薄层鉴别方法，包括以下步骤。s1：制备第一供试品溶液；取适量供试品粉末，加入适量石油醚，超声处理，过滤，取滤液，即为供试品溶液。超声处理的时间为10-60分钟。制备对照溶液；取适量薏苡仁药材粉末，加入适量石油醚，超声处理，过滤，取滤液，即为对照药材溶液；取薏苡仁油对照提取物，加石油醚，制成薏苡仁油对照提取物的溶液，作为第一对照提取物溶液。超声处理的时间为10-60分钟。所述石油醚的沸点范围为60～90℃。s2：吸取同体积的第一供试品溶液、对照药材溶液、第一对照提取物溶液三种溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10±1vol％硫酸乙醇溶液，在105±2℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；其中石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸的体积比为：8.5±0.85:0.8±0.08:0.1±0.01。s3：结果判定：第一供试品的色谱，与薏苡仁药材、薏苡仁油对照提取物色谱相应的位置上，是否显示相同颜色的斑点；若显示相同颜色的斑点，则供试品为薏苡仁，若没有显示相同颜色的斑点，则供试品不是薏苡仁。优选的，所述第一对照提取物溶液为每1ml含2±0.2mg薏苡仁油对照提取物的溶液；所述紫外灯发出的紫外光的波长为365nm；其中石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸的体积比为：8.5:0.8:0.1。所述供试品粉末的质量与薏苡仁对照药材粉末的质量相同，两者加入的石油醚的体积相同。

3、本发明还提供一种薏苡仁的含量测定方法，对前述的供试品粉末进行含量检测，包括以下步骤。m1：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，异丙醇为流动相b，进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测器：elsd；柱温：30℃；理论塔板数按甘油三油酸酯峰计算应不低于5000。m2：对照品溶液的制备：分别取甘油三油酸酯对照品、1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯对照品适量，称定重量，置容量瓶中，加乙腈:异丙醇的体积比＝55-65:45-35的混合溶剂，制成每1ml含0.3±0.03mg的甘油三油酸酯、0.4±0.04mg的1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯的第一对照品溶液。m3：制备第二供试品溶液的：取供试品粉末，称定重量，置具塞锥形瓶中，加入乙腈:异丙醇的体积比＝55-65:45-35的混合溶剂，密塞，称定重量，浸泡30min-6h，超声处理10-60min，放冷，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得第二供试品溶液。所述供试品粉末过三号筛；超声处理的功率为250w，频率为50khz。m4：吸取对照品溶液，吸取第二供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得到供试品粉末中甘油三油酸酯、1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯成分的含量。优选的，乙腈:异丙醇的体积比＝60:40。在步骤m4中，两组对照品溶液分别为5μl、10μl，所述第二供试品溶液为10～15μl。

4、本发明还提供一种薏苡仁的特征图谱测定方法，对前述的供试品粉末进行特征图谱测定，包括以下步骤。a1：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，异丙醇为流动相b，进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测器：elsd；柱温：30℃；理论塔板数按甘油三油酸酯峰计算应不低于5000。a2：参照物溶液的制备：分别取甘油三油酸酯对照品、1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯对照品适量，称定重量，置容量瓶中，加乙腈:异丙醇的体积比＝55-65:45-35的混合溶剂制成每1ml含0.3±0.03mg的甘油三油酸酯、0.4±0.04mg的1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯的混合溶液，即得参照物溶液；取薏苡仁油对照提取物，加乙腈:异丙醇的体积比＝55-65:45-35的混合溶剂制成每1ml含1±0.1mg的第二对照提取物溶液。a3：第三供试品溶液的制备：取供试品粉末，称定重量，置具塞锥形瓶中，加入乙腈:异丙醇的体积比＝55-65:45-35的混合溶剂，密塞，称定重量，浸泡30min-6h，超声处理10-60min，放冷，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得第三供试品溶液。所述供试品粉末过三号筛；超声处理的功率为250w，频率为50khz。a4：吸取第二对照提取物溶液，吸取参照物溶液，吸取第三供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测定，得到供试品的特征图谱。优选的，乙腈:异丙醇的体积比＝60:40。在步骤a4中，第二对照提取物溶液为5μl，所述参照物溶液为10μl，所述第三供试品溶液为10～15μl。

5、采用上述方案，本发明提供一种薏苡仁的薄层鉴别、含量测定及特征图谱测定方法，采用乙酸乙酯替换乙醚，能够有效解决现有对薏苡仁鉴别过程可能带来的对检测人员肝脏、肾脏、神经系统危害；同时采用10±1vol％硫酸乙醇溶液作为显色剂所获得的薄层色谱图的斑点有在紫外光下检视能够直观清晰，确保分析和判别的准确性。本发明能同时检测出1，2-亚油酸-3-油酸甘油酯、甘油三油酸酯，供试品图谱中呈现7个主要特征峰，各峰之间分离度高，峰型好，能反映出薏苡仁多成分的全体面貌，结果可靠。