一种胶体金试纸及其制备方法和应用与流程

本发明涉及疾病诊断，具体涉及一种胶体金试纸及其制备方法和应用。

背景技术：

1、潜在的慢性前列腺炎或慢性骨盆疼痛患者众多，同时由化学品、物理因素或生物制剂引起的炎症过程还是人类癌症的发病机制中重要因子，在前列腺癌中，炎症的存在及细胞上皮组织损伤后再生被认为是恶性转化的关键因素，前列腺组织受到炎性细胞的浸润，从而释放出各种活性物质，这些物质的释放还与细菌及病毒感染、尿酸增高及食用前列腺致癌物有关。在过去10年中，炎症和癌症之间的联系，以及前列腺炎作为前列腺癌高危因素的假说已经在流行病学、临床、形态学、病原学、细胞和分子水平上进行充分的研究并得到证实，事实上文献中指出，大约12％以上前列腺炎症，如不及时治疗可转化为前列腺癌，所以前列腺炎严重影响男性健康。

2、目前的前列腺按摩液检查和直肠指检对患者有一定侵入性，而大多数诊断却仍然依赖于临床表征和医生经验，不能及时发现、及时隔离和治疗，传统检测方法不仅步骤繁琐、检测周期长，而且检测结果不稳定，不能准确可靠的进行诊断。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种胶体金试纸及其制备方法和应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、本发明解决技术问题采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种胶体金试纸，包括底板、样品垫、结合垫、吸水垫、硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中部，所述样品垫和吸水垫粘贴在硝酸纤维素膜的左右两侧，所述结合垫粘贴在样品垫与硝酸纤维素膜之间，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述硝酸纤维素膜上结合有癌胚抗原和胶体金。

4、优选地，所述吸水垫与硝酸纤维素膜之间有2mm的重叠；所述样品垫与结合垫之间有2mm的重叠，所述结合垫与硝酸纤维素膜之间有2mm的重叠。

5、一种胶体金试纸的制备方法，包括如下步骤：

6、步骤一、选取存在于患者血液内的自身癌抗原的cd8+t细胞表位，然后将肽及白细胞介素一同包含在自体血浆的培养基中，培养从患者的血液中分离的外周血单个核细胞10-15天；

7、步骤二、在培养的外周血单个核细胞中添加相同的肽来诱导4-1bb并进行培养12-30小时；

8、步骤三、将培养的细胞在rpmi补充性培养基中贴壁培养，培养基中加入10-12％的胎牛血清，将细胞的浓度调节在500-600个/ml；

9、步骤四、倒去培养液，用预冷的1×pbs缓冲液洗细胞2-4次，用3-5ml的细胞裂解缓冲液将裂解液冲洗并收集细胞，且在5℃下旋转反应50-80分钟，悬液以高转速下离心分离20-30分钟，重复离心及取上清液3-5次，最后收集上清液得到癌胚抗原提取液，

10、步骤五、将胶体金溶液与癌胚抗原提取液混合并涂覆在玻璃纤维膜上，冷冻干燥，得到冻干的抗体硝酸纤维素膜：

11、步骤六、裁切硝酸纤维素膜，将样品垫、结合垫和吸水垫贴在底板上即得胶体金试纸，然后切割包装。

12、优选地，所述细胞裂解缓冲液的ph值为8.0，其中包括如下成分：0.2％叠氮化钠、17.4μg/ml pmsf、150mmnacl、5umedta和1％chaps。

13、优选地，所述胶体金溶液采用tris辅助法制备或由柠檬酸钠还原氯金酸得到，制备时观察胶体金的颜色和透明度的外观特征，其中胶体金颗粒的平均直径为30nm。

14、优选地，所述胶体金溶液制备时将胶体金颗粒研磨成粉末并添加水混合，然后加热至450-550℃，持续2-5小时后获得黄色晶体，然后添加8-10mg/ml柠檬酸盐水溶液、30-40mg/ml的氯金酸水溶液，最后加热至50-70℃，然后高速搅拌2-6小时后离心清洗，得到胶体金溶液。

15、优选地，所述步骤五中调节胶体金溶液的ph值至中性，加入抗氧化酶的抗体并持续搅拌，然后加入大分子聚合物，搅拌后离心分离，然后取上清液再次离心分离，留取沉淀涂在玻璃纤维膜上。

16、优选地，所述检测线上设置有抗人igm，所述质控线上设置有抗人igg，所述检测线和质控线在37-45℃干燥12-18小时。

17、本发明还提供了上述胶体金试纸在检测前列腺中的应用。

18、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

19、本发明的胶体金试纸，使用试纸条法检测癌胚抗原，简便快速，在几分钟内能用肉眼观察到检测结果，当检测样品溶液中的含量≥1.25ng/ml时，试纸条能够正常的检测出来，检出率较高有利于提高检测效率和准确性，且步骤简单，结果容易观察，适用于各种检测机构的定性分析，为慢性前列腺炎诊断提供了一种全新的非侵入式的无痛检验方法，在医疗领域具有较好的应用前景。

技术特征：

1.一种胶体金试纸，其特征在于，包括底板(1)、样品垫(2)、结合垫(3)、吸水垫(4)、硝酸纤维素膜(5)，所述硝酸纤维素膜(5)粘贴在底板(1)的中部，所述样品垫(2)和吸水垫(4)粘贴在硝酸纤维素膜(5)的左右两侧，所述结合垫(3)粘贴在样品垫(2)与硝酸纤维素膜(5)之间，所述硝酸纤维素膜(5)上设置有检测线(6)和质控线(7)，所述硝酸纤维素膜(5)上结合有癌胚抗原和胶体金。

2.根据权利要求1所述的一种胶体金试纸，其特征在于，所述吸水垫(4)与硝酸纤维素膜(5)之间有2mm的重叠；所述样品垫(2)与结合垫(3)之间有2mm的重叠，所述结合垫(3)与硝酸纤维素膜(5)之间有2mm的重叠。

3.根据权利要求1-2所述的任意一项所述的胶体金试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种胶体金试纸的制备方法，其特征在于，所述细胞裂解缓冲液的ph值为8.0，其中包括如下成分：0.2％叠氮化钠、17.4μg/ml pmsf、150mmnacl、5umedta和1％chaps。

5.根据权利要求4所述的一种胶体金试纸的制备方法，其特征在于，所述胶体金溶液采用tris辅助法制备或由柠檬酸钠还原氯金酸得到，制备时观察胶体金的颜色和透明度的外观特征，其中胶体金颗粒的平均直径为30nm。

6.根据权利要求5所述的一种胶体金试纸的制备方法，其特征在于，所述胶体金溶液制备时将胶体金颗粒研磨成粉末并添加水混合，然后加热至450-550℃，持续2-5小时后获得黄色晶体，然后添加8-10mg/ml柠檬酸盐水溶液、30-40mg/ml的氯金酸水溶液，最后加热至50-70℃，然后高速搅拌2-6小时后离心清洗，得到胶体金溶液。

7.根据权利要求6所述的一种胶体金试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤五中调节胶体金溶液的ph值至中性，加入抗氧化酶的抗体并持续搅拌，然后加入大分子聚合物，搅拌后离心分离，然后取上清液再次离心分离，留取沉淀涂在玻璃纤维膜上。

8.根据权利要求7所述的一种胶体金试纸的制备方法，其特征在于，所述检测线(6)上设置有抗人igm，所述质控线(7)上设置有抗人igg，所述检测线(6)和质控线(7)在37-45℃干燥12-18小时。

9.一种如权利要求1-8任意一项所述的胶体金试纸在检测前列腺中的应用。

技术总结
本发明公开了一种胶体金试纸及其制备方法和应用，包括底板、样品垫、结合垫、吸水垫、硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中部，所述样品垫和吸水垫粘贴在硝酸纤维素膜的左右两侧，所述结合垫粘贴在样品垫与硝酸纤维素膜之间，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述硝酸纤维素膜上结合有癌胚抗原和胶体金；本发明的胶体金试纸，使用试纸条法检测癌胚抗原，简便快速，在几分钟内能用肉眼观察到检测结果，当检测样品溶液中的含量≥1.25ng/ml时，试纸条能够正常的检测出来，检出率较高有利于提高检测效率和准确性，且步骤简单，结果容易观察，适用于各种检测机构的定性分析，在医疗领域具有较好的应用前景。

技术研发人员：冯红,朱天明,潘秀文
受保护的技术使用者：广州合尔拓生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13