检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒

本发明涉及生物检测领域，具体而言，涉及检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒。

背景技术：

1、结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病。结核病的诊断，尤其是肺外结核病的诊断仍然比较困难。结核性胸膜炎(tuberculous pleurisy，tp)是最常见的肺外结核病之一，其诊断仍然是临床面临的一大挑战。非痰液生物标志物对肺外结核病和无痰结核病的诊断至关重要。结核分枝杆菌细胞壁成分脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan，lam)是非常有潜力的非痰液生物标志物。lam是分枝杆菌细胞壁上的一种重要糖脂组分，分子量为17.5kda。在结核分枝杆菌(mtb)感染期间，可溶性的脂阿拉伯甘露聚糖(lam)可以通过细菌代谢或细菌降解释放出来，并在体液(如痰、血和尿等)中被检测到，但局限于活动性结核病患者中。依据该特征，lam已被用作辅助诊断活动性结核病的靶点。

2、酶联免疫吸附实验和侧流尿lam检测已被开发用于测定lam。低成本、快速的侧流尿lam检测试剂盒(lf-lam；determine tb-lam；alere,usa)已经被who批准用于cd4阳性t淋巴细胞计数低于200cells/μl或重症艾滋病患者中结核病的诊断，该试剂盒应用兔抗lam多克隆抗体检测该抗原。尽管该方法在分枝杆菌lam抗原检测方面具有较好的特异性，具有低成本和快速便捷的突出特点。但该方法也存在不足之处，其检测敏感性局限于1ng/ml，此法并未被推荐用于非艾滋病的结核病筛查，而这部分人群占据了结核病人群的绝大多数(85％)，限制了其在全球范围内的应用。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明实施例提供了组合物在制备用于检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖或结核病的产品中的应用，所述组合物包括捕获抗体和检测抗体；

4、其中，所述捕获抗体包括bjrbl01、bjrbl03、bjrbl20、bjrbl52和bjrbl76任意一种或多种抗体的组合；

5、bjrbl01的重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:1-3所示，轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:4-6所示；

6、bjrbl03的重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:7-8以及seq id no:3所示，轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seqid no:seq id no:9、seq id no:5以及seq id no:6所示；

7、bjrbl20的重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:7、seq id no:10以及seq id no:3所示，轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:9和seq id no:11-12所示；

8、bjrbl52的重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:7、seq id no:10以及seq id no:3所示，轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:9、seq id no:5以及seq id no:6所示；

9、bjrbl76的重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:13-15所示，轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no:16-18所示；

10、所述检测抗体包括生物素标记的bjrbl01-bio、bjrbl03-bio、bjrbl20-bio、bjrbl52-bio和bjrbl76-bio任意一种或多种抗体的组合；

11、第二方面，本发明实施例提供了捕获抗体在制备具有以下用途的产品中的应用，所述捕获抗体为前述任意实施例所述的捕获抗体，所述用途包括：检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖、诊断或辅助诊断结核病中的任意一种或多种。

12、第三方面，本发明实施例提供了检测抗体在制备具有以下用途的产品中的应用，所述检测抗体为前述实施例所述的检测抗体，所述用途包括：检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖、诊断或辅助诊断结核病中的任意一种或多种。

13、第四方面，本发明实施例提供了一种试剂盒，其包括：前述实施例所述的组合物。

14、第五方面，本发明实施例提供了一种分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的双抗夹心elisa检测方法，所述检测方法采用的捕获抗体如前述任意实施例所述，所述检测方法采用的检测抗体如前述任意实施例所述；所述检测方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

15、第六方面，本发明实施例提供了目标抗体在制备检测白色念珠菌或其相关疾病的产品中的应用，所述目标抗体为前述实施例中所述的bjrbl20、bjrbl52、bjrbl20-bio和bjrbl52-bio中的任意一种或多种的组合。

16、第七方面，本发明实施例提供了目标抗体在检测白色念珠菌中的应用，所述目标抗体为前述实施例中所述目标抗体，所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

17、本发明具有以下有益效果：

18、本申请的发明人利用多种类型的样本进行筛选和鉴定，确定了适宜用于lam抗原捕获的捕获抗体和适宜用于lam抗原检测的检测抗体，形成了lam抗原检测的优势抗体组合，具有较高的检测灵敏度和特异性，可用于纯化lam、结核分枝杆菌标准株、临床分离株、胸水和血浆等体液中lam抗原的检测，为lam抗原检测提供新的抗体组合和新方法，为活动性结核病的辅助诊断提供新方法和新试剂盒。

技术特征：

1.组合物在制备用于检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖或诊断结核病的产品中的应用，其特征在于，所述组合物包括捕获抗体和检测抗体；其中，所述捕获抗体包括bjrbl01、bjrbl03、bjrbl20、bjrbl52和bjrbl76任意一种或多种抗体的组合；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，bjrbl01重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:19和seq id no:20所示；

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗体或其功能性片段的重链恒定区选自：igd、ige、igm、iga和igg中任意一种抗体的重链恒定区；所述抗体或其功能性片段的轻链恒定区为κ型或λ型轻链恒定区；

4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述分枝杆菌包括慢速生长型分枝杆菌；

5.捕获抗体在制备具有以下用途的产品中的应用，其特征在于，所述捕获抗体为权利要求1～4任一项中所述的捕获抗体；所述用途包括：检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖、诊断或辅助诊断结核病中的任意一种或多种；

6.检测抗体在制备具有以下用途的产品中的应用，其特征在于，所述检测抗体为权利要求1～4任一项中所述的检测抗体；所述用途包括：检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖、诊断或辅助诊断结核病中的任意一种或多种；

7.一种试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求1～4任一项所述的组合物；

8.一种分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的双抗夹心elisa检测方法，其特征在于，所述检测方法采用的捕获抗体为权利要求1～4任一项中所述的捕获抗体，采用的检测抗体为权利要求1～4任一项中所述的检测抗体；

9.目标抗体或其组合在制备检测白色念珠菌或其相关疾病的产品中的应用，其特征在于，所述目标抗体选自：权利要求1～4任一项中所述的bjrbl20、bjrbl52、bjrbl20-bio和bjrbl52-bio中的任意一种。

10.目标抗体在检测白色念珠菌中的应用，其特征在于，所述目标抗体为权利要求9中所述的目标抗体；所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

技术总结
本发明公开了检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒，涉及生物检测领域。本申请的发明人利用多种类型的样本进行筛选和鉴定，确定了适宜用于LAM抗原捕获的捕获抗体，以及适宜用于LAM抗原检测的检测抗体，形成了LAM抗原检测的优势抗体组合，具有较高的检测灵敏度和特异性，可用于纯化LAM、结核分枝杆菌标准株、临床分离株、胸水和血浆等体液中LAM抗原的检测，为LAM抗原检测提供新的抗体组合和新方法，为活动性结核病的辅助诊断提供新方法和新试剂盒。

技术研发人员：闫卓红,吴羽华,易玲,王小珏,王敬慧,杨新婷,张洪涛,逄宇,韦攀健,阮洪云
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京胸科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13