一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法与流程

本发明涉及中成药检测分析，具体涉及一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法。

背景技术：

1、藿香正气水由苍术、陈皮、厚朴(姜制)、白芷、茯苓、大腹皮、生半夏、甘草浸膏、广藿香油、紫苏叶油十味药组成，具有解表化湿，理气和中之功效。处方中生半夏为天南星科植物半夏 pinellia ternata(thunb.)breit.的干燥块茎，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效。根据市场调研得知，生半夏的价格远高于其余9味药，其价格成本约占到整个藿香正气水处方的一半，且生半夏的价格远高于其他伪品。随之而来的是藿香正气水生产企业不按规定投料生半夏或者生半夏掺伪的现象增多。市场上生半夏伪品主要是山珠半夏、天南星和虎掌南星，后者与生半夏的功效不同，毒性也高于生半夏。

2、然而，目前藿香正气水中的质量标准并未对生半夏进行质量控制。基于此，建立一种藿香正气水中生半夏的检测方法，来鉴别不按规定投料生半夏或者生半夏伪品替代投料情况，对于评估藿香正气水质量和安全性评估具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法。该方法用于鉴别不按规定投料生半夏或者生半夏伪品替代投料的情况，具有专属性强、检测稳定可靠，检测限和定量限低的优势，对于藿香正气水质量和安全性评估具有十分重要的意义。

2、为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：

3、一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，包括以下步骤：

4、1）将藿香正气水采用稀酸调节ph 5～6，加入乙醚萃取，静置分层后收集水层，水层加入甲醇定容，滤过，取续滤液，得供试品溶液；

5、2）取生半夏作为对照药材，用冷水浸泡至透心后，加入干姜，加水煎煮，滤过，取续滤液，得对照药材溶液；

6、3）采用uplc-ms/ms法测定供试品溶液和对照药材溶液，比较供试品溶液和对照药材溶液的提取离子色谱图，对藿香正气水中生半夏进行鉴别；

7、所述uplc-ms/ms法采用的色谱柱为acquity uplc hss c18 sb，100mm×2.1mm×1.8μm；并采用甲醇为流动相a，0.02mol/l甲酸铵-0.1%甲酸水溶液为流动相b进行梯度洗脱。

8、进一步地，所述梯度洗脱的程序为：0～10min,10%～65%流动相a,90%～35%流动相b;10～10.1min,65%～90%流动相a,35%～10%流动相b;10.1～12min,90%流动相a,10%流动相b。

9、进一步地，所述供试品溶液的制备方法为：取25ml藿香正气水，用1%的盐酸调节ph至5，加入20ml乙醚萃取3次，静置分层后收集水层，水层加入甲醇定容至50ml，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

10、进一步地，所述对照药材溶液的制备方法为：取生半夏对照药材2.0g，精密称定，用冷水浸泡，每8小时换水1次，泡至透心后，加入干姜0.15g，加水煎煮2次，第一次3小时，第二次2小时，合并水煎液，滤过，转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

11、进一步地，步骤3）所述对藿香正气水中生半夏进行鉴别的方法为：比较供试品溶液和对照药材溶液的提取离子色谱图，若供试品溶液提取离子色谱图出现与对照药材溶液提取离子色谱图保留时间一致的色谱峰，且多反应监测色谱峰信噪比大于3:1，则判断待测藿香正气水样品中有生半夏，反之，则藿香正气水样品中不含有生半夏。

12、进一步地，步骤3）中uplc-ms/ms法质谱采集的检测离子对为m/z 555.3→383.0和m/z 555.3→283.7；离子对m/z 555.3→383.0的碎裂电压为124v，碰撞能量为18v；离子对m/z 555.3→283.7的碎裂电压为124v，碰撞能量为26v；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式，扫描方式：多反应监测；雾化器压力：45 psi；干燥气流速：6l/min；干燥气温度：350℃；鞘气温度：350℃；喷雾电压：500 v；毛细管电压：3500 v。

13、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

14、1. 藿香正气水处方原料组成复杂，采用常规的处理方法制备供试品溶液进行进样进行测定，发现供试品其他组分对于生半夏检测特征峰的分析有显著的抑制作用，生半夏检测特征物质的响应值较低，对藿香正气水中生半夏的鉴别结果的准确性产生严重影响，经过对供试品的制备方法进行优化，在酸性条件下采用乙醚萃取除去藿香正气水原料的脂质成分，并对检测条件进行优化，结果显示优化后的检测方法可显著降低藿香正气水中其他组分对于生半夏专属特征峰检测的基质抑制作用，生半夏特征峰响应值高。

15、2. 本发明提供的检测方法，经方法学验证，该方法对藿香正气水处方其他原料和生半夏常见伪品无假阳性，检测的专属性强；进行线性考察，结果显示线性范围宽，线性相关性好；重复进样6次rsd值为0.71%，供试品溶液在24h内峰面积无明显变化，具有很好的精密度和稳定性。对生半夏检测特征物质的检出限为1.03mg/ml，定量限为3.31mg/ml，说明该方法灵敏度较高，可见，该方法可以很好的实现藿香正气水中生半夏的鉴别，弥补了现有技术未对藿香正气水中生半夏进行质量和安全性评估控制的缺陷，对藿香正气水的生产、日常监督检验具有重要的意义，有助于提升该药品的质量，降低人们的用药风险。

技术特征：

1.一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0～10min,10%～65%流动相a,90%～35%流动相b;10～10.1min,65%～90%流动相a,35%～10%流动相b;10.1～12min,90%流动相a,10%流动相b。

3.根据权利要求1所述一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：取25ml藿香正气水，用1%的盐酸调节ph至5，加入20ml乙醚萃取3次，静置分层后收集水层，水层加入甲醇定容至50ml，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

4.根据权利要求1所述一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，其特征在于，所述对照药材溶液的制备方法为：取生半夏对照药材2.0g，精密称定，用冷水浸泡，每8小时换水1次，泡至透心后，加入干姜0.15g，加水煎煮2次，第一次3小时，第二次2小时，合并水煎液，滤过，转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.根据权利要求1所述一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，其特征在于，步骤3）所述对藿香正气水中生半夏进行鉴别的方法为：比较供试品溶液和对照药材溶液的提取离子色谱图，若供试品溶液提取离子色谱图出现与对照药材溶液提取离子色谱图保留时间一致的色谱峰，且多反应监测色谱峰信噪比大于3:1，则判断待测藿香正气水样品中有生半夏，反之，则藿香正气水样品中不含有生半夏。

技术总结
本发明涉及中成药检测分析技术领域，具体涉及一种藿香正气水中生半夏的鉴别方法，包括以下步骤：1）将藿香正气水采用稀酸调节pH 5～6，加入乙醚萃取，静置分层后收集水层，水层加入甲醇定容，滤过，取续滤液，得供试品溶液；2）取生半夏作为对照药材，用冷水浸泡至透心后，加入干姜，加水煎煮，滤过，取续滤液，得对照药材溶液；3）采用UPLC‑MS/MS法测定供试品溶液和对照药材溶液，比较供试品溶液和对照药材溶液的提取离子色谱图，对藿香正气水中生半夏进行鉴别；该方法用于鉴别不按规定投料生半夏或者生半夏掺伪的情况，具有专属性强、检测稳定可靠，检测限和定量限低的优势。

技术研发人员：肖小武,周志强,许妍,杨甲玺,任琦,付辉政
受保护的技术使用者：江西省药品检验检测研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12