一种鉴别HCC亚型的标志物HNF1B及DPHCC体外模型的构建

本发明属于生物医药，尤其涉及一种鉴别hcc亚型的标志物hnf1b及dphcc体外模型的构建。

背景技术：

1、原发性肝癌是世界上第六大最常被诊断的癌症，也是癌症患者的第三大死因，且发病率不断上升。根据原发性肝癌的病理类型，who将原发性肝癌分为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,hcc)、肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,icc)和肝细胞-胆管癌复合癌(hepatocellular-cholangiocarcinoma compositecarcinoma,chc)，hcc和icc是最常见的肝癌恶性类型(90％)。由于肝癌患者在确诊时多为中晚期，且没有理想的治疗方法，通常预后不佳，5年生存率不足5％。因此，有效预测患者术后生存期将可以帮助选择合适的治疗方式，为及时有效诊治提供有力的支持。

2、目前，针对肝癌的诊断方法多种多样，包括影像学检查、肝功能检查、肝癌标志物检查、组织学检查等，诊断效率越来越高。然而对于同一种类型的诊断，不同的患者可能有不同的预后状况。例如同诊断为hcc的患者，tp53抑癌基因突变的患者往往预后较差。在hcc的亚型中存在一种双表型肝细胞癌(dual-phenotype hepatocellular carcinoma,dphcc)，2011年于国内首次报道，发生率约占hcc的10％，属于新定义亚型。dphcc在组织病理形态上与普通型hcc相似，但该亚型可同时表达hcc和icc的免疫表型。临床上观察到，dphcc的微血管侵犯、肝内外转移以及术后复发率更高，这类亚型患者的预后明显差于普通型hcc。针对不同的预后状态，首选的诊疗方式也不相同。在icc和dphcc的病例中，如果可行，手术切除是主要的治疗选择，由于淋巴结转移的高频率，往往伴随着淋巴结清扫。hcc的治疗方案包括切除、消融、移植、经动脉化疗和放疗，以及全身治疗。普通型hcc的切除术不涉及淋巴结清扫。因此，明确诊断dphcc和普通型hcc对于指导临床诊疗意义重大。

3、目前，针对icc，胆管标志物检测(c反应蛋白、ck7、ck19)是主要的诊断方式。然而，针对dphcc尚没有明确有效的鉴别诊断指标。因此，icc的诊断方式通常也用来鉴别hcc中的胆管型，但有研究表明，c反应蛋白对于icc诊断的敏感性只有75％，而对于dphcc的诊断效率尚不明确。另外，目前对dphcc的研究大多处在临床表型上的鉴定，缺乏深入机制的探究。

4、hnf1b位于17q12染色体上，是pou顺式结构转录因子家族的成员，参与调节全身的脂质、碳水化合物和蛋白质代谢，并在调节肝脏发育和肝细胞分化中发挥重要作用。近年来，有研究表明，hnf1b与卵巢透明细胞癌、前列腺癌、胰腺癌等肿瘤的发生和发展明显相关。然而，hnf1b在肝脏恶性肿瘤中的表达意义及其临床应用仍未得到充分研究。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明通过生物信息学分析发现hnf1b与hcc患者的预后有重要的关系，结合基础实验探究了该基因对肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的调控，发现hnf1b可以促进hcc细胞icc免疫表型的表达，从而提出了hnf1b在dphcc亚型诊断中的作用价值，也提供了一种制备dphcc细胞模型的方法。

2、本发明的第一个目的是提供一种鉴别肝细胞癌亚型的生物标志物，所述生物标志物为肝细胞核因子1β(hnf1b)。

3、进一步地，所述肝细胞癌亚型为普通型肝细胞癌或双表型肝细胞癌(dphcc)。

4、进一步地，所述生物标志物在普通型肝细胞癌中表达水平低，在双表型肝细胞癌中表达水平高。

5、本发明的第二个目的是提供上述生物标志物在制备肝细胞癌亚型的检测试剂中的应用。

6、进一步地，检测样本为肝癌组织或肝癌癌旁组织。

7、进一步地，所述检测试剂用于检测待检组织中hnf1b表达水平。

8、进一步地，所述检测试剂可为免疫组化检测试剂。

9、本发明的第三个目的是提供上述生物标志物在制备肝细胞癌患者预后的检测试剂中的应用。

10、进一步地，肝癌预后预测为肝癌切除术后患者生存期预测。

11、本发明的第四个目的是提供一种用于检测肝细胞癌患者预后的试剂盒，所述试剂盒包括检测hnf1b表达的试剂。

12、本发明的第五个目的是提供一种双表型肝细胞癌体外细胞模型，所述细胞模型通过向肝癌细胞中导入hnf1b编码基因得到。

13、进一步地，所述hnf1b编码基因的核苷酸序列为nm_000458.4。

14、进一步地，所述肝癌细胞可来自肝癌组织、肝癌癌旁组织或肝癌细胞系，其中，肝癌细胞系包括但不限于smmc-7721、bel-7402、mhcc97、hepg2、hep3b、huh-7、plc/prf/5等。

15、本发明的第六个目的是提供上述双表型肝细胞癌体外细胞模型在筛选双表型肝细胞癌治疗药物中的应用。

16、进一步地，根据施用不同药物后双表型肝细胞癌体外细胞模型的肿瘤生物学行为差异对待筛选药物进行评价。

17、本发明的有益效果：

18、(1)目前针对dphcc的诊断需同时检测hcc和icc的多种免疫表型标志物，既增加了临床工作量，也增加了患者负担。本发明仅通过hnf1b即可鉴别hcc患者中的dphcc亚型和普通型，相比于现有多种标志物检测的方法，经济且高效，同时可及时发现hcc患者中的高危亚型，便于医生采取积极的治疗措施，提高患者生存期。

19、(2)目前对dphcc的研究大多处在临床表型上的鉴定，缺乏深入机制的探究，有一部分原因是缺少dphcc体外细胞模型。本发明发现hcc细胞系上调hnf1b基因后，可表达icc免疫表型。同时，细胞的增殖、迁移和侵袭能力也有显著提高，符合dphcc的临床特征。获得了一种可在体外针对dphcc开展相关研究的细胞模型。

20、(3)缺乏体外研究dphcc的细胞模型，限制了有关dphcc药物筛选，机制探究等方面的研究。本发明提供了一种体外dphcc细胞模型，便于开展针对性的研究实验。

技术特征：

1.一种鉴别肝细胞癌亚型的生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为肝细胞核因子1β。

2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于：所述肝细胞癌亚型为普通型肝细胞癌或双表型肝细胞癌。

3.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于：所述生物标志物在普通型肝细胞癌中表达水平低，在双表型肝细胞癌中表达水平高。

4.权利要求1所述的生物标志物在制备肝细胞癌亚型检测试剂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：检测样本为肝癌组织或肝癌癌旁组织。

6.权利要求1所述的生物标志物在制备肝细胞癌患者预后的检测试剂中的应用。

7.一种用于检测肝细胞癌患者预后的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测肝细胞核因子1β的试剂。

8.一种双表型肝细胞癌体外细胞模型，其特征在于：所述细胞模型通过向肝癌细胞中导入肝细胞核因子1β的编码基因得到。

9.根据权利要求8所述的细胞模型，其特征在于：所述肝细胞核因子1β的编码基因的核苷酸序列为nm_000458.4。

10.权利要求8或9所述的双表型肝细胞癌体外细胞模型在筛选双表型肝细胞癌治疗药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鉴别HCC亚型的标志物HNF1B及DPHCC体外模型的构建，属于生物医药技术领域。本发明通过检测原位肝癌中HNF1B的表达鉴别DPHCC亚型和普通型HCC，可以更加有效地预测患者的生存时间，为有效的诊断治疗提供更加有力的支持，从而帮助医生选择更适合治疗的患者人群和方法，进行更加精准的个性化治疗。同时，本发明提供一种制备DPHCC体外细胞模型的方法，有利于开展针对DPHCC的药物筛选和机制探究等方面的研究。

技术研发人员：曲静,张洪涛,赵丕乾
受保护的技术使用者：苏州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14