一种采用UPLC法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法与流程

本发明涉及药物分析领域中的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法。

背景技术：

0、技术背景

1、复方甘草口服溶液，英文名为compound glycyrrhiza oral solution，本品为棕色或棕黑色液体；有香气，久置偶有沉淀。复方甘草口服溶液收载于《中国药典》2020年版二部，主要由甘草流浸膏、复方樟脑酊、愈创甘油醚、甘油、浓氨溶液等组成，是治疗上呼吸道感染、支气管炎和感冒时所产生的咳嗽及咳痰不爽的常用药。其中，甘草流浸膏为保护性祛痰剂；复方樟脑酊为镇咳药；愈创甘油醚为祛痰止咳剂，并有一定的防腐作用；甘油、浓氨溶液为辅料，可保持制剂稳定，防止沉淀生成及析出。上述成分组成复方制剂，有镇咳、祛痰的协同作用。《中国药典》(2020年版)中复方甘草口服溶液有效成分吗啡、愈创甘油醚与甘草酸分别采用两个完全不同的液相色谱系统进行检测，其中吗啡测定时，样品首先在固相萃取柱提取后，于辛烷基硅烷键合硅胶柱检测，该方法操作复杂、精密度低、耗时长、成本高；愈创甘油醚与甘草酸测定时，对高效液相色谱系统的要求非常高，否则愈创甘油醚及甘草酸与其相邻杂质峰的分离度达不到要求。目前为止，尚没有检索到关于同时测定复方甘草口服溶液有效成分含量的方法。因此，研制开发一种同时测定复方甘草口服溶液中有效成分的检测方法一直是亟待解决的新课题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，该方法采用uplc法(流动相浓度、梯度淋洗、变波长法)进行检测，该方法具有可同时检测多种有效成分含量、试剂易得、操作简便、检测周期短、精密度高等优点。

2、本发明的目的是这样实现的：一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，该检测方法包括如下步骤：

3、(1)色谱条件：

4、色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂

5、流动相：磷酸盐缓冲液和乙腈

6、所述色谱条件采用流动相浓度、梯度淋洗，变波长法；

7、(2)磷酸盐缓冲液的制备

8、(3)供试品溶液的制备

9、(4)对照品溶液的制备

10、(5)测定方法：

11、精密量取对照品溶液及供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中，所述有效成分峰与相邻色谱峰的分离度应符合要求，按外标法以峰面积计算；

12、所述有效成分选自吗啡、愈创甘油醚、甘草酸中的一种或几种；所述色谱柱的规格选自(30-150)×(1.8-2.5)mm，1.6-10μm；优选的，所述色谱柱的规格包括选自(75-150)×(2.0-2.2)mm，2-3.5μm；所述色谱柱的品牌选自halo、waters、安捷伦、迪马、资生堂；所述供试品溶液色谱图中，吗啡峰的理论板数不得低于2000；

13、所述磷酸盐缓冲液的制备方法包括如下步骤：取磷酸盐，加水溶解，加入三乙胺，用有机酸溶液调ph至弱酸性；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或几种；所述有机酸选自磷酸、醋酸中的一种或几种；所述弱酸性指ph为3.5-5.5；优选的，所述弱酸性指ph为4-5；所述有机酸的浓度选自1-30％；优选的，所述有机酸的浓度选自5-20％；所述磷酸盐的质量：所述水的体积：所述三乙胺的体积＝(1-10):(500-1500):(0.5-10)，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升；优选的，所述磷酸盐的质量：所述水的体积：所述三乙胺的体积＝(2-5):(800-1250):(1-5)，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升；

14、所述色谱条件还包括：柱温：20℃～45℃；优选的，柱温：25℃～40℃；流速：0.25ml/min～0.38ml/min；优选的，流速：0.30ml/min～0.36ml/min；紫外检测器波长：210-230nm、240-260nm；优选的，紫外检测器波长：215-225nm、245-255nm；进样量：0.5μl～5μl；优选的，进样量：0.5μl～2μl；

15、所述供试品溶液的制备包括如下步骤：取所述复方甘草口服溶液，超声，置容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；所述超声的时间为1-60min，优选的，所述超声的时间为1-30min；

16、所述对照品溶液的制备包括如下步骤：精密称取吗啡、愈创甘油醚和甘草酸铵中的一种或几种，置于容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液；所述对照品溶液中吗啡的含量为0.005-0.03mg/ml；优选的，所述对照品溶液中吗啡的含量为0.008-0.02mg/ml；所述对照品溶液中愈创甘油醚的含量为0.1-2mg/ml；优选的，所述对照品溶液中愈创甘油醚的含量为0.2-1mg/ml；所述对照品溶液中甘草酸的含量为0.05-1mg/ml；优选的，所述对照品溶液中甘草酸的含量为0.15-0.5mg/ml；

17、所述稀释剂的制备包括如下步骤：取醋酸、水、甲醇，混匀；所述醋酸选自冰醋酸；所述醋酸、水、甲醇的体积比为(1-10):(100-1000):(100-1000)；优选的，所述醋酸、水、甲醇的体积比为(2-8):(200-800):(200-800)；所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

18、

19、所述磷酸盐缓冲液与乙腈为体积比；

20、优选的，所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

21、

22、所述磷酸盐缓冲液与乙腈为体积比；

23、所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

24、

25、所述磷酸盐缓冲液与乙腈为体积比；

26、优选的，所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

27、

28、

29、所述磷酸盐缓冲液与乙腈为体积比；

30、所述按外标法以峰面积计算的公式为：

31、

32、a供：供试品溶液中相应有效成分的峰面积；

33、a对：对照品溶液中相应有效成分的峰面积；

34、c对：对照品溶液中相应有效成分对照品的浓度，mg/ml；

35、p对：相应有效成分对照品的纯度；

36、计算甘草酸含量时应在所述公式中的分子乘以换算系数0.9797。

37、本发明的要点在于它的检测方法，采用uplc(浓度、梯度淋洗、变波长法)进行检测。

38、一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法与现有技术相比，具有可同时检测多种有效成分含量、试剂易得、操作简便、每批检测时间由2天缩短为不到1天、精密度高等优点，将广泛地应用于药物分析领域中。

技术特征：

1.一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，该检测方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述有效成分选自吗啡、愈创甘油醚、甘草酸中的一种或几种；所述色谱柱的规格选自(30-150)×(1.8-2.5)mm，1.6-10μm；优选的，所述色谱柱的规格选自(75-150)×(2.0-2.2)mm，2-3.5μm；所述色谱柱的品牌选自halo、waters、安捷伦、迪马、资生堂；所述供试品溶液色谱图中，吗啡峰的理论板数不得低于2000。

3.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的制备方法包括如下步骤：取磷酸盐，加水溶解，加入三乙胺，用有机酸溶液调ph至弱酸性；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或几种；所述有机酸选自磷酸、醋酸中的一种或几种；所述弱酸性指ph为3.5-5.5；优选的，所述弱酸性指ph为4-5；所述有机酸的浓度选自1-30％；优选的，所述有机酸的浓度选自5-20％；所述磷酸盐的质量：所述水的体积：所述三乙胺的体积＝1-10:500-1500:0.5-10，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升；优选的，所述磷酸盐的质量：所述水的体积：所述三乙胺的体积＝2-5:800-1250:1-5，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升。

4.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：柱温：20℃～45℃；优选的，柱温：25℃～40℃；流速：0.25ml/min～0.38ml/min；优选的，流速：0.30ml/min～0.36ml/min；紫外检测器波长：210-230nm、240-260nm；优选的，紫外检测器波长：215-225nm、245-255nm；进样量：0.5μl～5μl；优选的，进样量：0.5μl～2μl。

5.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括如下步骤：取所述复方甘草口服溶液，超声，置容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；所述超声的时间为1-60min，优选的，所述超声的时间为1-30min。

6.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备包括如下步骤：精密称取吗啡、愈创甘油醚和甘草酸铵中的一种或几种，置于容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液；所述对照品溶液中吗啡的含量为0.005-0.03mg/ml；优选的，所述对照品溶液中吗啡的含量为0.008-0.02mg/ml；所述对照品溶液中愈创甘油醚的含量为0.1-2mg/ml；优选的，所述对照品溶液中愈创甘油醚的含量为0.2-1mg/ml；所述对照品溶液中甘草酸的含量为0.05-1mg/ml；优选的，所述对照品溶液中甘草酸的含量为0.15-0.5mg/ml。

7.根据权利要求5或6所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述稀释剂的制备包括如下步骤：取醋酸、水、甲醇，混匀；所述醋酸选自冰醋酸；所述醋酸、水、甲醇的体积比为1-10:100-1000:100-1000；优选的，所述醋酸、水、甲醇的体积比为2-8:200-800:200-800。

8.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述流动相浓度、梯度淋洗，变波长法包括如下步骤：

10.根据权利要求1所述的一种采用uplc法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法，其特征在于，所述按外标法以峰面积计算的公式为：

技术总结
本发明涉及药物分析领域中的一种采用UPLC法检测复方甘草口服溶液中有效成分含量的方法。该检测方法包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸盐缓冲液和乙腈；所述色谱条件采用流动相浓度、梯度淋洗，变波长法；(2)磷酸盐缓冲液的制备；(3)供试品溶液的制备；(4)对照品溶液的制备；(5)测定方法。该方法具有可同时检测多种有效成分含量、检测结果直观准确、检测速度快、检测所需的原材料易得等特点。

技术研发人员：刘宇,陈莹,李翱,徐小娇
受保护的技术使用者：东北制药集团沈阳第一制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15