一种清宁散冻干粉指纹图谱构建方法及指纹图谱

本发明属于中药检测领域，尤其涉及儿科经典名方清宁散冻干粉指纹图谱构建方法及指纹图谱。

背景技术：

1、

2、“清宁散”来源于《直指小儿方》卷一，临床主治小儿心肺蕴热所致发惊、咳嗽等病证。研究根据儿童咳嗽痰热郁肺证的具体病机发展，在西医常规治疗基础上采取清宁散加减治疗，取得满意治疗效果。“清宁散”处方组成：桑白皮(蜜炒)、甜葶苈(微炒)、赤茯苓(酒炒)、车前子(炒)各等分，甘草(炙)减半，具有清热解毒等功效，临床一般用来治疗小儿肺蕴热而引起的咳嗽等症状，而且适当的使用，还能起到利小便的作用。但目前对清宁散成分分析的研究较少，无法为其质量提供控制与评价依据。

技术实现思路

1、为了解决上述现有技术的问题，本发明提供一种清宁散冻干粉指纹图谱构建方法及指纹图谱，对清宁散的成分鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。

2、本发明通过以下技术方案实现：

3、一种清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，包括以下步骤：

4、s1、取清宁散冻干粉，加入甲醇水溶液，超声提取，得供试品溶液；

5、s2、取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，记录色谱图；

6、s3、将供试品溶液进行质谱分析，得到质谱结果图；

7、s4、根据色谱图和质谱结果图，构建得到指纹图谱。

8、优选的，s1中，甲醇水溶液的体积浓度为80％。

9、优选的，s1中，超声时间为30～60min，更优选60min。

10、优选的，s2中，色谱柱为kromasil 100-5-c18色谱柱。

11、优选的，s2中，色谱条件为：流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液；采用紫外可见吸收检测器多波长切换检测，检测波长：0～15min，254nm；15～43min，280nm；43～120min，254nm；梯度洗脱程序为：0～10min乙腈体积10％；10～20min乙腈体积10％～20％；20～30min乙腈体积20％～23％；30～40min，乙腈体积23～30％；40～60min乙腈体积30％～40％；60～80min乙腈体积40％～45％；80～100min乙腈体积45％～58％；100～120min乙腈体积58％～63％时可实现指纹图谱中各色谱峰的良好分离度。

12、优选的，s2中，色谱分析时流动相的流速为0.6～1ml/min，更优选0.6ml/min。

13、优选的，s4为：将s2中获得的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得指纹图谱并进行相似度分析；

14、根据质谱结果图，确定指纹图谱中各色谱峰的化学成分，分别为1号峰为异甘草素/甘草素，2号峰为异鼠李素，3号峰为甘草苷，4号峰为芥子碱硫氰酸盐，5号峰为β-胡萝卜苷，6号峰为松苓新酸，7号峰为去氢土莫酸/3-表去氢土莫酸，8号峰为甘草酸铵，9号峰为槲皮素，10号峰为新绿原酸/绿原酸，11号峰为甘草查耳酮a，12号峰为桑黄酮g，13号峰为京尼平苷酸，14号峰为桑辛素，15号峰为芹菜素。

15、采用所述的构建方法得到的清宁散冻干粉指纹图谱。

16、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

17、本发明公开了儿科经典名方清宁散冻干粉指纹图谱检测方法，根据清宁散中所含的活性成分的结构性质特点，通过对提取方式、流动相、柱温、流速等条件进行筛选，建立了指纹图谱测定方法并进行了方法学考察，根据多批样品建立了清宁散的指纹图谱，包括针对方中桑白皮、甜葶苈、赤茯苓、车前子、甘草五味中药材，共计15个特征峰的指纹图谱，所得到的色谱图相似度较高；以其相对保留时间和相对峰面积来计算稳定性、重复性和精密度，相对保留时间和相对峰面积的rsd值均小于5.0％。本发明提供的清宁散的指纹图谱检测方法，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，能全面的反应其中所含化学成分的种类与数量。利用本发明方法对中药清宁散所含主要化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立清宁散的指纹图谱分析检测快速、便捷准确，客观全面地表征了清宁散的质量，且方法具有简便、稳定性好、精密度高、重现性好的优点。

技术特征：

1.一种清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s1中，甲醇水溶液的体积浓度为80％。

3.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s1中，超声时间为30～60min。

4.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s2中，色谱柱为kromasil 100-5-c18色谱柱。

5.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s2中，色谱条件为：流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液；采用紫外可见吸收检测器多波长切换检测，检测波长：0～15min，254nm；15～43min，280nm；43～120min，254nm；梯度洗脱程序为：0～10min乙腈体积10％；10～20min乙腈体积10％～20％；20～30min乙腈体积20％～23％；30～40min，乙腈体积23～30％；40～60min乙腈体积30％～40％；60～80min乙腈体积40％～45％；80～100min乙腈体积45％～58％；100～120min乙腈体积58％～63％时可实现指纹图谱中各色谱峰的良好分离度。

6.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s2中，色谱分析时流动相的流速为0.6～1ml/min。

7.根据权利要求1所述的清宁散冻干粉指纹图谱构建方法，其特征在于，s4为：将s2中获得的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得指纹图谱并进行相似度分析；

8.采用权利要求1～7任一项所述的构建方法得到的清宁散冻干粉指纹图谱。

技术总结
本发明提供一种清宁散冻干粉指纹图谱构建方法及指纹图谱，包括以下步骤：S1、取清宁散冻干粉，加入甲醇水溶液，超声提取，得供试品溶液；S2、取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，记录色谱图；S3、将供试品溶液进行质谱分析，得到质谱结果图；S4、根据色谱图和质谱结果图，构建得到指纹图谱。本发明方法对中药清宁散所含主要化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立清宁散的指纹图谱分析检测快速、便捷准确，客观全面地表征了清宁散的质量，且方法具有简便、稳定性好、精密度高、重现性好的优点。

技术研发人员：梁承远,柯昌华,张云飞,杨珊,胡津荣,周晶晶,刘玉婷,赵宇晴
受保护的技术使用者：陕西科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14