本发明涉及scd14-st化学发光检测,特别涉及用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂。
背景技术:
1、脓毒症(sepsis)是感染所致的全身炎症反应综合症(sirs),其临床表现多样、病情进展迅猛,不仅使患者生存质量下降,治疗费用高昂,而且死亡率居高不下。目前,对该病症治疗手段的共识是在早期给予以有效抗感染治疗为主的综合治疗。然而,由于诸多非感染性危重症患者也存在sirs,如何从中早期识别感染性疾病、鉴别sirs和脓毒症成了多年来交叉学科讨论的话题和研究的方向。2004年,日本学者发现了一种新的生物标志物可溶性cd14亚型(soluble cd14 subtype,即scd14-st,又称presepsin),其对脓毒症的诊断、评估及预后评价显示了良好的临床意义。
2、cd14是脂多糖(lps)-脂多糖结合蛋白(lbp)复合体的受体,一旦与lps-lbp复合物结合,参与激活toll样受体4(tlr4)/md2复合物等一系列信号传导通路,活化炎症级联反应,导致全身炎症反应。cd14以膜结合型(mcd14)形式锚定于单核-巨噬细胞表面,或以可溶性(scd14)形式分布于血浆中。
3、化学发光免疫分析技术,是利用化学发光试剂直接标记抗原/抗体的免疫分析方法。常用的化学发光物质有吖啶酯类化合物。大分子抗原一般采用夹心法,例如使用吖啶酯标记的抗体/抗原做为标记抗体/标记抗原,以另一种抗体/抗原作为捕获抗体/抗原,标记抗体/标记抗原、捕获抗体/抗原与对应的抗原/抗体形成夹心复合物,利用磁珠吸附、分离和洗涤后,加入预激发液和激发液后进行化学发光检测。此外,也可以用亲和素标记捕获抗体/抗原,以提高与磁珠的亲和力。
4、化学发光分析过程中,预激发液的作用是将标记物从复合物上裂解下来,并提供酸性环境,防止反应过早发生。激发液的作用是提供碱性环境,激发化学发光反应。常用预激发液为h2o2溶液,有的还加入hno3;激发液为naoh溶液,有的还加入了triton x-100。但是这些预激发液和激发液,对化学发光反应过程、发光强度等存在一定影响,进而影响检测灵敏度。
技术实现思路
1、针对以上现有技术的不足,本发明提供了一种用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂及其应用,具体通过以下技术实现。
2、一种用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂,包括预激发剂和激发剂;所述预激发剂包括h2o2 0.5-1.5wt%、甲醇1.2-1.8wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.1-0.5wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.05-0.1wt%,剩余为水;
3、所述激发剂为naoh 0.05-1mol/l、甲醇1.2-1.8wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.1-0.5wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.05-0.1wt%,剩余为水。
4、优选地,所述预激发剂包括h2o2 1wt%、甲醇1.6wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.4wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.08wt%,剩余为水;
5、所述激发剂为naoh 0.5mol/l、甲醇1.6wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.4wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.08wt%,剩余为水。
6、优选地,还包括清洗剂,所述清洗剂为含有tween-20的pbs缓冲液。
7、一种上述用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂的应用,其特征在于,用于检测scd14-st的检测抗体为单克隆抗体并使用10,10'-二甲基-9,9'-双吖啶标记,用于捕获scd14-st的捕获抗体为生物素标记的单克隆抗体并偶联在磁珠上。
8、一种用于scd14-st的化学发光检测的试剂盒,包括上述任意一种所述的辅助试剂。
9、优选地,上述化学发光检测的试剂盒还包括校准品,所述标准品是将scd14-st标准品用pbs缓冲液按系列浓度梯度配置而成。
10、与现有技术相比,本发明的有益之处在于:本发明提供了一种用于scd14-st的化学发光检测的,由预激发剂和激发剂组成的辅助试剂,该辅助试剂与10,10'-二甲基-9,9'-双吖啶标记的检测抗体和偶联在磁珠上的捕获抗体联合使用,相比于使用常规的预激发液和激发液,采用上述试剂组合的化学发光效果明显增强,灵敏度和准确度有明显的提升。
1.一种用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂,其特征在于,包括预激发剂和激发剂;所述预激发剂包括h2o2 0.5-1.5wt%、甲醇1.2-1.8wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.1-0.5wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.05-0.1wt%,剩余为水;
2.根据权利要求1所述的用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂,其特征在于,所述预激发剂包括h2o2 1wt%、甲醇1.6wt%、1-羟乙基-2-十一烷基-1-羧甲基咪唑啉0.4wt%,还包括月桂酰谷氨酸钠或椰油酰谷氨酸钠或肉豆蔻酰谷氨酸钠0.08wt%,剩余为水;
3.根据权利要求1所述的用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂,其特征在于,还包括清洗剂,所述清洗剂为含有tween-20的pbs缓冲液。
4.一种权利要求1-3任一项所述的用于scd14-st的化学发光检测的辅助试剂的应用,其特征在于,用于检测scd14-st的检测抗体为单克隆抗体并使用10,10'-二甲基-9,9'-双吖啶标记,用于捕获scd14-st的捕获抗体为生物素标记的单克隆抗体并偶联在磁珠上。
5.一种用于scd14-st的化学发光检测的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1-3任一项所述的辅助试剂。
6.根据权利要求5所述的用于scd14-st的化学发光检测的试剂盒,其特征在于,还包括校准品,所述标准品是将scd14-st标准品用pbs缓冲液按系列浓度梯度配置而成。