一种多肽类样本稳定剂的制作方法

本发明属于医学体外诊断，具体涉及一种多肽类样本稳定剂。

背景技术：

1、肽(peptide)是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。肽具有重要的生物学功能，是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，增强和发挥人体生理活性。

2、人体代谢途径中，多肽作为其中的关键中间产物，其在体液中含量能够反应很多人体机能状态。在体外诊断领域，很多疾病检测的病理标志物均为多肽抗原，根据其在体液中的增高或降低可直接反应出某种疾病。

3、其中，反应胃功能状态的胃泌素-17由17个氨基酸组成，由胃窦和十二指肠的g细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用，胃泌素含量的高低反映胃黏膜损伤情况的重要指标。反应心血管功能的利钠肽(bnp)，可以作为充血性心力衰竭和轻度心脏功能障碍的辅助诊断指标。

4、c肽是由31个氨基酸(aa 33-63)组成的单链多肽，c肽是胰岛素生物合成过程中胰岛素原裂解成为胰岛素的伴随产物，有证据显示c肽作为胰岛素的替代，可阻止i型糖尿病长期并发症的进展。

5、诸如此类的多肽类病理标志物还有很多，随着诊断试剂的不断发展，以多肽类病理标志物为核心指标的人体血清检测，属于一项无创、无痛且安全、经济的检测方法。目前用于多肽类检测的方法主要包括酶免法、荧光层析法、磁微粒化学发光法等。

6、多肽类在体外(血清/血浆/全血)会进一步变化，其变化机理目前并未有确切结论，但已有研究表明，多肽类在体外的变化可能是有多重原因导致，比较广泛的说法包括以下几种：

7、第一种：样本中的内肽酶、外肽酶会对多肽类抗原进一步降解。

8、第二种：多肽体外聚集也是导致多肽类结构改变，导致检测试剂无法检测。

9、第三种：样本中的补体蛋白也会对多肽类产生降解作用。

10、无论是何种原因，采血之后样本中多肽类会快速改变，理论上在2-8℃稳定保存时间只有数十分钟，随着温度升高，其降解速度会更快，意味着从采血到检测必须在很短时间内完成，而实际工作中很多医院无法做到短时间内及时检测。这也就导致临床上很容易出现多肽类检测结果不准，无法准确反应病人病情。

11、针对多肽类在离体血液中不稳定的情况，本领域技术人员做了很多研究。

12、中国专利公开号cn115702637a公开了“一种胃泌素17血液样本的保护剂”，提出了以2-二(2-羟乙基)氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇和/或-1,3-双[(三羟甲基)甲基氨基]丙烷作为稳定剂，可有效避免多肽类的降解，大大延长多肽类血液样本的保存时间，从而保证检测结果的准确性。该专利仅用一种缓冲液就可起到抑制胃泌素17降解的机理并不清晰。

13、中国专利公开号cn1950398a公开了“肽的稳定”，该专利中显示使用dmso能够使血清或血浆样品中胃泌素保存时间从3h延长至72h，但dmso作为有机溶剂会使红细胞破碎，导致检测结果有误差。

14、现有稳定剂仅均是针对胃泌素类多肽在血液样品中的稳定，针对性太单一，且稳定效果并不理想。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种多肽类样本稳定剂，突破了传统稳定剂针对种类的限制，可以应用于各种多肽类样品的稳定，提高多肽类在离体血液中的稳定性，使多肽类在体外(血清/血浆/全血)不容易分解，从而提高多肽类检测结果准确性。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案：

3、一种多肽类样本稳定剂，其特征在于，以质量百分比包括：乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐：1～3％；n-乙基顺丁烯二酸亚胺：1～3％；环糊精：1～2％；亮肽素：1～3％；防腐剂0.02～0.1％；其余为ph为2.0～4.0的酸性缓冲液。

4、优选的，所述乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸钠盐或乙二胺四乙钾盐。

5、优选的，所述酸性缓冲液为甘氨酸-盐酸、柠檬酸-柠檬酸钠、乙酸-乙酸钠缓冲液中的一种或多种。

6、优选的，所述亮肽素为其盐酸盐、硫酸盐中的一种或多种。

7、优选的，所述防腐剂为叠氮钠、p300、bro中的一种或多种。

8、经过研究发现，多肽类分子在体外降解是由多重因素共同决定，其主要影响因素和多肽结构、样本类型、储存条件等都有关系。

9、本发明中酸性缓冲液能够使得等电点较高的多肽带有正电荷，从而减少多肽间的静电吸附，保证多肽的分散性。环糊精环糊精分子具有略呈锥形的中空圆筒立体环状结构，其外缘亲水而内腔疏水，能够提供一个稳定的微环境，对于疏水性较强的多肽，能够有效规避疏水键的结合导致多肽聚集。酸性体系搭配环糊精，能够有效解决因物理、化学作用(静电吸附、疏水结合等)而导致的多肽失活。

10、edta作为金属螯合剂，能够抑制多种金属酶活性。单一酶抑制剂只能针对某一种多肽有很好的稳定作用，要想从根本上改善多肽稳定性，本发明edta、nemi、亮肽素复合添加，利用环糊精和酸性缓冲液的联合作用，可有效抑制血液中内肽酶、补体等生物活性物质的活性，多种抑制剂的协同性能够从多角度提升不同种类多肽稳定性，本发明或的稳定剂可以有两种使用方式，其一，作为独立稳定剂，采血后将所述稳定剂加入到装有血液的采血管中，混合均匀。

11、其二，在采血管生产过程中，将所述稳定剂加入到采血管中，作为采血管的组成部分，需要采血时直接使用该采血管采血。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果：

13、本发明通过添加多种种类的稳定剂，酸性体系搭配环糊精，能够有效解决因物理、化学作用(静电吸附、疏水结合等)而导致的多肽失活，从根本上改善多肽在离体样本中的稳定性。

14、所得稳定剂具有通用性强、可实现性强、成本低，可以检测对多肽类病理标志物(例如胃泌素-17、利钠肽等)在血液样本中的稳定性，操作简便，能够适配不同方法学(poct、酶免、磁微粒)检测。

技术特征：

1.一种多肽类样本稳定剂，其特征在于，以质量百分比计包括：乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐：1～3％；n-乙基顺丁烯二酸亚胺：1～3％；环糊精：1～2％；亮肽素：1～3％；防腐剂0.02～0.1％；其余为ph为2.0～4.0的酸性缓冲液。

2.根据权利要求1所述的多肽类样本稳定剂，其特征在于，所述乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸钠盐或乙二胺四乙钾盐。

3.根据权利要求1所述的多肽类样本稳定剂，其特征在于，所述酸性缓冲液为甘氨酸-盐酸、柠檬酸-柠檬酸钠、乙酸-乙酸钠缓冲液中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的多肽类样本稳定剂，其特征在于，所述亮肽素为其盐酸盐、硫酸盐中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的多肽类样本稳定剂，其特征在于，所述防腐剂为叠氮钠、p300、bro中的一种或多种。

6.一种如权利要求1～5任一项所述多肽类样本稳定剂的使用方法，其特征在于，按照所述成分混合均匀获得稳定剂备用，采血后将所述稳定剂加入装有血液的采血管中，混合均匀。

7.一种如权利要求1～5任一项所述多肽类样本稳定剂的使用方法，其特征在于，在采血管生产过程中，将所述稳定剂加入到采血管中，作为采血管的组成部分，需要采血时直接使用该采血管采血。

技术总结
本发明公开了一种多肽类样本稳定剂，以质量百分比计包括：乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐：1～3％；N‑乙基顺丁烯二酸亚胺：1～3％；环糊精：1～2％；亮肽素：1～3％；防腐剂0.02～0.1％；其余为pH为2.0～4.0的酸性缓冲液。该多肽类样本稳定剂突破了传统稳定剂针对种类的限制，可以应用于各种多肽类样品的稳定，提高多肽类在离体血液中的稳定性，使多肽类在体外(血清/血浆/全血)不容易分解，从而提高多肽类检测结果准确性。

技术研发人员：孙国龙,李奎,许灿灿,唐亮亮,刘登辉,翟改萍,武慧锋
受保护的技术使用者：上海品峰医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15