一种十大功劳叶特征图谱的构建方法与流程

本发明属于药材分析，具体涉及一种十大功劳叶特征图谱的构建方法。

背景技术：

1、2020版《中国药典》规定功劳木为小檗科植物阔叶十大功劳mahonia bealei(fort.)carr.或细叶十大功劳mahonia fortunei(lindl.)fedde的干燥茎。十大功劳叶收载于地方标准中，《贵州省中药材、民族药材质量标准》规定本品为小檗科植物长柱十大功劳mahonia duclouxiana gagnep.、小果十大功劳mahonia bodinieri gagnep.、宽苞十大功劳mahonia eurybracteata fedde、细叶十大功劳mahonia fortunei(lindl.)fedde及阔叶十大功劳mahonia bealei(fort.)carr.的干燥叶。现有技术在获得十大功劳叶特征图谱时，存在特征峰与杂质峰接近、对流动相ph值要求高、且特征峰出峰时间比较分散。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中十大功劳叶特征图谱的特征峰分离度不好，其与杂质峰比较接近，易混淆特征峰和杂质峰等缺陷，从而提供一种十大功劳叶特征图谱的构建方法。

2、为此，本发明提供了以下技术方案。

3、本发明提供了一种十大功劳叶特征图谱的构建方法，包括：

4、供试品溶液的制备：将供试品制成供试品溶液；

5、参照物溶液的制备：将对照药材制成参照物溶液；

6、测定：按照超高效液相色谱法，测定；

7、其中，超高效液相色谱法的色谱条件包括：以乙腈为流动相a，以磷酸二氢钾水溶液为流动相b，梯度洗脱；梯度洗脱条件如下：0-15min，9％流动相a，91％流动相b；15-30min，9→17％流动相a，91→83％流动相b。

8、所述超高效液相色谱条件还包括：以waters cortecs shield rp18为色谱柱，色谱柱规格为：内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.6μm；和/或，

9、柱温为25-35℃；和/或，

10、波长为280-350nm；和/或，

11、进样量为1-5μl；和/或，

12、以0.01-0.1mol/l磷酸二氢钾水溶液为流动相b。

13、所述供试品为十大功劳叶药材、十大功劳叶饮片、十大功劳叶标准汤剂冻干粉、十大功劳叶配方颗粒中的至少一种。

14、所述十大功劳叶为小果十大功劳叶。

15、当所述供试品为药材或饮片时，所述供试品溶液的制备方法包括：取供试品，加水，加热回流，滤过，蒸干，得到水提物，在水提物中加入提取溶剂，提取，过滤；

16、当所述供试品为冻干粉或配方颗粒时，所述供试品溶液的制备方法包括：取供试品，加提取溶剂，提取，过滤。

17、所述提取包括有机溶剂和无机溶剂；

18、优选地，所述有机溶剂和无机溶剂的体积比为100:(1-2.5)；

19、优选地，所述有机溶剂为甲醇；

20、优选地，所述无机溶剂为盐酸。

21、当所述供试品为药材或饮片时，在制备所述供试品溶液时，水提物质量(g)与提取溶剂体积(ml)的比值为(0.05-0.5):(10-50)；

22、当所述供试品为冻干粉或配方颗粒时，在制备所述供试品溶液时，供试品质量(g)与提取溶剂体积(ml)的比值为(0.05-0.5):(10-50)。

23、所述参照物溶液的制备方法包括：取对照药材，加水提取，过滤后蒸干，得到水提物；在水提物中加提取溶剂，提取，过滤；

24、优选地，所述提取包括有机溶剂和无机溶剂；

25、优选地，所述有机溶剂和无机溶剂的体积比为100:(1-2.5)；

26、优选地，所述有机溶剂为甲醇；

27、优选地，所述无机溶剂为盐酸；

28、优选地，水提物质量(g)与提取溶剂体积(ml)的比值为(0.05-0.5):(10-50)。

29、所述构建方法得到的特征图谱包括10个特征峰；

30、以6号峰为参照物峰，1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、7号峰、8号峰、9号峰和10号峰的相对保留时间的规定值分别为：0.32、0.41、0.47、0.61、0.79、1.08、1.20、1.41、1.60；

31、其中，特征峰的相对保留时间在规定值的±10％。

32、所述构建方法还包括对照品溶液的制备；

33、优选地，所述对照品包括4-o-咖啡酰基奎宁酸甲酯、绿原酸甲酯和咖啡酸甲酯中的至少一种；

34、优选地，每1ml所述对照品溶液中包括10-100μg的对照品。

35、本发明技术方案，具有如下优点：

36、1.本发明提供的十大功劳叶特征图谱的构建方法，该构建方法包括：供试品溶液的制备，参照物溶液的制备，采用超高效液相色谱法测定，并限定了特定的梯度洗脱程序。该构建方法得到的特征峰的分离度高，峰形良好且无干扰，特征峰保留时间分布均匀，能与杂质峰进行很好的区分；本发明提供的构建方法发现了4-o-咖啡酰基奎宁酸甲酯、绿原酸甲酯和咖啡酸甲酯此三种含量高、特异性强的新指标物质，指标物质新颖且专属性强，可以鉴别十大功劳叶的真伪以及检测十大功劳叶的质量，为十大功劳叶提供了更完善的鉴别方法。

37、此外，本发明提供的构建方法准确度高、时间短、精密度高、重复性和稳定性好，能够更加全面地对十大功劳叶进行质量监控。

技术特征：

1.一种十大功劳叶特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱条件还包括：以waters cortecs shield rp18为色谱柱，色谱柱规格为：内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.6μmmm；和/或，

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述供试品为十大功劳叶饮片、十大功劳叶药材、十大功劳叶标准汤剂冻干粉、十大功劳叶配方颗粒中的至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述十大功劳叶为小果十大功劳叶。

5.根据权利要求1-4任一项所述的构建方法，其特征在于，当所述供试品为药材或饮片时，所述供试品溶液的制备方法包括：取供试品，加水，加热回流，滤过，蒸干，得到水提物，在水提物中加入提取溶剂，提取，过滤；

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述提取包括有机溶剂和无机溶剂；

7.根据权利要求5或6所述的构建方法，其特征在于，当所述供试品为药材或饮片时，在制备所述供试品溶液时，水提物质量(g)与提取溶剂体积(ml)的比值为(0.05-0.5):(10-50)；

8.根据权利要求1-7任一项所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液的制备方法包括：取对照药材，加水提取，过滤后蒸干，得到水提物；在水提物中加提取溶剂，提取，过滤；

9.根据权利要求1-8任一项所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法得到的特征图谱包括10个特征峰；

10.根据权利要求1-9任一项所述的构建方法，其特征在于，还包括对照品溶液的制备；

技术总结
本发明属于药材分析技术领域，具体涉及一种十大功劳叶特征图谱的构建方法。该构建方法包括：供试品溶液的制备，参照物溶液的制备，采用超高效液相色谱法测定，并限定了特定的梯度洗脱程序。该构建方法得到的特征峰的分离度高，峰形良好且无干扰，特征峰保留时间分布均匀，能与杂质峰进行很好的区分；本发明提供的构建方法发现了4‑O‑咖啡酰基奎宁酸甲酯、绿原酸甲酯和咖啡酸甲酯此三种含量高、特异性强的新指标物质，指标物质新颖且专属性强，可以鉴别十大功劳叶的真伪以及检测十大功劳叶的质量，为十大功劳叶提供了更完善的鉴别方法。

技术研发人员：詹智洪,魏家保,张辉,谭沛,黄凯伟
受保护的技术使用者：华润三九现代中药制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15