一种蜂蜜中二氯喹啉酸的检测方法与流程

本发明属于化学检测，具体而言，涉及一种蜂蜜中二氯喹啉酸的检测方法。

背景技术：

1、二氯喹啉酸化学名为3,7-二氯喹啉-8-羧酸，英文名为quinclorac，分子式为c10h5cl2no2，相对分子量为242.06，cas号：84087-01-4，熔点为274℃，沸点为405.4±40.0℃。二氯喹啉酸属于有机氯类农药，是一种激素型喹啉羧酸类除草剂，主要用于防除稻田单子叶杂草，尤其对稗草有极高活性，是我国稻田主要除草剂品种之一。然而二氯喹啉酸有一定的毒性，残留在环境中的二氯喹啉酸会导致动物生长发育不良，生殖异常以及变态发育，且其性质稳定，在环境中残留时间较长，对人体健康具有潜在威胁。若含有较高二氯喹啉酸残留的食品被人体长期食用，将会严重危害到人类的身体健康。因此，多个国家、国际组织均对食品中的二氯喹啉酸残留做出了限量。

2、我国最新实施的食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量gb 2763-2016》对糙米、高粱和越橘的二氯喹啉酸残留做出了限量，限量浓度为0.1-1.5mg/kg。日本肯定列表对大米、小麦、大麦和其他粮谷中的二氯喹啉酸的限量做出了规定，限量浓度范围为0.5-6mg/kg。因此，研究建立食品中二氯喹啉酸的检测方法，对于保障食品安全，维护国家经济利益和保护国民健康和安全具有重要的意义。

3、我国针对各类食品中二氯喹啉酸的检测方法已有若干标准，(1)gb 23200.43-2016对粮谷及油籽中的二氯喹啉酸残留的检测方法做出了规定，该方法是直接采用丙酮对目标物进行提取，然后通过调节酸碱的方式，通过水和二氯甲烷反复萃取除杂，然后经重氮甲烷衍生，生成二氯喹啉酸甲酯，再通过硅酸镁固相萃取柱萃取净化，最后通过气相色谱质谱进行检测。(2)sn/t 2228-2008对进出口食品中31中酸性除草剂残留的检测方法做出了规定，采用丙酮提取，再使用乙酸乙酯提取净化，再通过凝胶色谱净化，采用三甲基硅烷化重氮甲烷为衍生试剂，再通过弗罗里硅土固相萃取柱净化，进气相色谱质谱检测。这两个方法虽然能够实现对目标物的准确定性定量检测，但是方法前处理过程复杂，有机溶剂消耗量大，且使用易爆和具有致癌性的衍生试剂，其操作危险性较高。

4、基于此，提出本发明。

技术实现思路

1、本发明首先涉及一种蜂蜜样本中的二氯喹啉酸的定量检测方法，所述方法包括如下步骤：

2、(1)向待测蜂蜜样本中添加五氟苄基溴试剂，与二氯喹啉酸发生衍生化反应生成(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯；

3、(2)检测衍生化反应的产物(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯的响应，从而定量待测蜂蜜样本中的二氯喹啉酸的含量。

4、所述的二氯喹啉酸分子式为c10h5cl2no2，相对分子量为242.06，cas号：84087-01-4；

5、所述的五氟苄基溴的分子式为c6f5ch2br，相对分子量为260.99，cas号：1765-40-8。

6、所述的衍生化反应的反应式如下式所示：

7、

8、步骤(1)的具体步骤为：

9、1)取蜂蜜样品，加入去离子水进行溶解和均质；

10、2)在固相萃取柱进行提取净化洗脱，将洗脱液中的溶剂吹干，并用丙酮溶解充分；

11、3)加入适量五氟苄基溴和碳酸钾催化剂进行衍生化反应。

12、优选的，所述的步骤(1)具体为：

13、1)取蜂蜜样品1g，加入去离子水进行溶解和均质；

14、2)sax固相萃取小柱安装在真空抽滤装置上，上样溶解后的蜂蜜样品溶液，上样后的淋洗液为水和甲醇；固相萃取柱淋洗后洗脱液为5％(v/v)的甲酸甲醇溶液；

15、3)氮气吹干溶剂后，加入丙酮880μl；催化剂碳酸钾水溶液的用量为20μl，浓度为0.1mol/l；五氟苄基溴的丙酮溶液用量为100μl，浓度为0.5％(v/v)；衍生温度为40℃，衍生反应时间为12h。

16、步骤(2)所述的检测衍生化反应的产物(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯的含量的方法为，使用气相色谱质谱法(gc-ms)检测；

17、优选的，所述的检测方法为：

18、色谱柱：安捷伦db-5ms色谱柱(15m×0.25mm×0.25μm)；

19、色谱柱温度：初始温度60℃，保持1min，以30℃/min升至300℃，保持3min；

20、进样口温度：300℃；

21、载气：高纯氦气，纯度≥99.999％；

22、柱流量：1.2ml/min；

23、进样量：1.0μl；

24、进样方式：无分流进样，1min后打开分流阀；

25、检测器类型：单四极杆质谱检测器；

26、离子源为电子轰击电离(ei)源，温度230℃，电子能量70ev；

27、传输线温度300℃；

28、检测方式：选择离子扫描(sim)模式。溶剂延迟6min。选择离子扫描参数为：

29、

30、*代表定量离子

31、更优选的，检测结果通过标准曲线进行外标法定量，

32、所述的标准曲线的制备方法为：

33、1)取不含二氯喹啉酸的蜂蜜样品，向其中分别加入适量二氯喹啉酸标准品，混匀，使得其中二氯喹啉酸为梯度浓度，所述浓度梯度分别为0、0.01、0.02、0.1、0.2、0.5mg/kg；

34、2)按照前述衍生反应方法，进行衍生反应，生成(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯，并进行检测，以二氯喹啉酸浓度为横坐标，二氯喹啉酸衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，即为二氯喹啉酸的基质标准曲线。

35、所述的外标法为：

36、1)通过前述方法计算待测样品中衍生产物(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯的定量离子峰面积；

37、2)采用前述标准曲线，进行定量计算，得出样品中二氯喹啉酸的含量。

38、所述方法的检出下限为0.003mg/kg，定量下限为0.01mg/kg；

39、所述方法的回收率大于75％。

40、本发明还涉及一种如下式(1)所示的化合物，其gc-ms质谱图如图2所示：

41、

42、本发明还涉及一种以二氯喹啉酸和五氟苄基溴为反应底物，合成(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯的方法，所述方法包括如下步骤：

43、(1)在丙酮溶液中，按照五氟苄基溴：二氯喹啉酸的摩尔比大于或等于32：1的比例混匀两种反应底物，催化剂k2co3(0.1mol/l)溶液用量为10μl/ml；

44、或，在含有蜂蜜基质的丙酮溶液中，按照五氟苄基溴：二氯喹啉酸的摩尔比大于或等于160：1的比例混匀两种反应底物，催化剂k2co3(0.1mol/l)用量为20μl/ml；

45、(2)40℃条件下衍生反应12h，即制备获得(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯。

46、本发明的有益效果在于：

47、(1)本发明采用五氟苄基溴为衍生试剂，具有直接反应的特性，避免使用毒性较强、危险度较高的重氮甲烷试剂，与之前报道的重氮甲烷衍生相比较，使用五氟苄基溴衍生的更加方便快捷，前处理操作更加简便。

48、(2)本发明采用气相色谱质谱法进行检测，具有分析时间短和灵敏度高的优点，(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯的气相色谱质谱的eic图见图1。

49、(3)本发明首次对二氯喹啉酸的五氟苄基溴衍生产物：(全氟苯基)甲基3,7-二氯喹啉-8-甲酸酯，进行了报道，获得了衍生物在电子轰击离子源(ei)电离条件下的气相色谱-质谱(gc-ms)图(图2)，并对其衍生机理(图3)和衍生物碎裂方式(图4)进行了解析。。