一种盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量检测方法与流程

：本发明涉及一种药物的检测方法，特别涉及一种盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量检测方法。

背景技术：

1、盐酸多巴酚丁胺注射液是一种已经上市的注射用药物，适应症为用于器质性心脏病时心肌收缩力下降引起的心力衰竭，包括心脏直视手术后所致的低排血量综合征，作为短期支持治疗。

2、盐酸多巴酚丁胺注射液的活性成分为盐酸多巴酚丁胺，其化学名称:4-[2-[[1-甲基-3-(4-羟苯基)丙基]氨基]乙基]-1，2-苯二酚盐酸盐。

3、分子式:c18h23no2hcl

4、分子量:337.85

5、结构式：

6、

7、盐酸多巴酚丁胺注射液为液体制剂，在制备时需要加入抗氧剂等物质，如亚硫酸氢钠，对某些敏感性人员亚硫酸氢钠可引起过敏性反应，出现包括过敏症状，致命性的或稍轻的严重哮喘发作，因此现有标准均对亚硫酸氢钠的含量加以限制，为此需要找到合适的检测方法。

8、现有技术中公开了以下方法：

9、《分光光度法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量》

10、《hilic-elsd法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠的含量》《离子色谱法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量》

11、由于亚硫酸氢钠不稳定，现有技术在检测过程中亚硫酸氢钠含量的重复性差，因此需要建立一种更有效的方法来检测。

技术实现思路

1、本发明提供一种盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量检测方法，所述方法，步骤如下：

2、供试品溶液的配制：取盐酸多巴酚丁胺注射液1.5-2.5ml，置15-25ml量瓶中，加0.05-0.2％依地酸二钠溶液适量，超声4-6分钟，用溶剂稀释至刻度，摇匀；对照品溶液的配制：取亚硫酸氢钠对照品45-50mg，精密称定，置80-120ml量瓶中，加0.05-0.2％依地酸二钠溶液适量，超声4-6分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取4-6ml，置40-60ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；测定：取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算亚硫酸氢钠含量；

3、色谱条件：用磺化交联苯乙烯二乙烯基苯共聚氢型强阳离子交换柱；以磷酸4.2-4.7g，加水800-1200ml使溶解为流动相；柱温为45-55℃；检测波长为270-280nm；进样体积5-20μl。

4、优选的，本发明所述的检测方法，步骤如下：

5、供试品溶液的配制：取盐酸多巴酚丁胺注射液2ml，置20ml量瓶中，加0.1％依地酸二钠溶液适量，超声5分钟，用溶剂稀释至刻度，摇匀；

6、对照品溶液的配制：取亚硫酸氢钠对照品48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加0.1％依地酸二钠溶液适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；

7、测定：取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算亚硫酸氢钠含量；

8、色谱条件：

9、用磺化交联苯乙烯二乙烯基苯共聚氢型强阳离子交换柱；以磷酸4.6g，加水1000ml使溶解为流动相；柱温为50℃；检测波长为275nm；进样体积20μl。本发明是经过筛选得到的，筛选过程如下：

10、试验仪器或耗材

11、

12、

13、试验试剂

14、 名称 来源 级别(最低) 磷酸 科密欧 ar 水 屈臣氏 纯化水 乙二胺四醋酸二钠 科密欧 ar

15、标准品与对照品

16、

17、供试品

18、

19、

20、采用本发明实施例1的方法进行检测，结果与结论如下：

21、按定量法进行了系统的方法学验证，专属性(杂质定位与分离)、线性与范围、精密度(系统精密度、重复性、中间精密度)、准确度、溶液稳定性、耐用性验证均符合可接受标准，适用于盐酸多巴酚丁胺注射液亚硫酸氢钠含量检测。亚硫酸氢钠含量分析方法验证结果汇总见表1。

22、盐酸多巴酚丁胺注射液亚硫酸氢钠含量方法学验证结果

23、

24、

25、验证内容

26、专属性干扰试验

27、溶液的配制：

28、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

29、空白贮备液：取盐酸多巴酚丁胺约1120mg，甘露醇约2.9g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

30、空白溶液：精密量取空白贮备液2ml，置20ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

31、对照品溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

32、供试品溶液：精密量取本品(2ml：20mg)2ml，置20ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以亚硫酸氢钠计0.048mg/ml)。

33、杂质贮备液：取杂质a、杂质b、杂质c对照品各约2mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

34、混合溶液：精密量取本品(2ml：20mg)2ml，置20ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟，再加入杂质贮备液1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

35、精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。

36、杂质定位与分离结果汇总

37、

38、

39、结论：溶剂、空白溶液及各杂质不干扰测定；供试品溶液和对照品溶液中亚硫酸氢钠峰保留时间基本一致；混合溶液中亚硫酸氢钠峰角度均小于阈值，峰纯度合格。故本法测定专属性良好。

40、标准曲线的制备：

41、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

42、线性贮备液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以亚硫酸氢钠计0.48mg/ml)

43、配制各线性溶液：

44、 线性溶液 量取线性贮备液体积 相当于限度(％) 1 7ml→50ml 140 2 6ml→50ml 120 3 5ml→50ml 100 4 4ml→50ml 80 5 3ml→50ml 60 6 2ml→50ml 40

45、精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度(μg/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标作曲线，计算相关系数。

46、线性关系试验结果(浓度以so2计)

47、

48、结论：亚硫酸氢钠在浓度12.4～43.3μg/ml(40％～140％)浓度范围内，r＞0.999，峰面积与浓度呈良好线性关系，见图2。

49、系统精密度测定：

50、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

51、对照品溶液，同“标准曲线的制备”项下配制的线性溶液3(相当于限度100％)；精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续进样6针，记录主峰的峰面积及保留时间，计算平均值和rsd值。

52、系统精密度试验结果

53、

54、结论：同一溶液连续进样6次，保留时间的rsd值为0.07％，峰面积的rsd值为0.67％，本法系统精密度良好。

55、重复性测定

56、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

57、对照品溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以亚硫酸氢钠计0.048mg/ml)(同法配制2份，进样5+2)

58、供试品溶液：精密量取本品(2ml：20mg)2ml，置20ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以亚硫酸氢钠计0.048mg/ml)(同法配制6份，每份进样双针)

59、精密量取20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

60、重复性结果(规格2ml：20mg)

61、

62、结论：分别重复配制6份供试品溶液(规格2ml：20mg)，结果的rsd为0.00％，重复性良好。

63、中间精密度

64、中间精密度试验结果(规格2ml：20mg)

65、

66、结论：不同分析人员用不同仪器测定供试品，供试品(2ml：20mg)结果的rsd(n＝12)为1.70％，中间精密度良好。

67、准确度

68、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

69、对照品溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以亚硫酸氢钠计0.048mg/ml)

70、空白贮备液：取盐酸多巴酚丁胺约1120mg，甘露醇约2.9g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

71、空白溶液：精密量取空白贮备液2ml，置20ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

72、回收率溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品适量(分别为38mg、48mg、58mg，各三份)，精密称定，分别置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml、空白贮备液5ml，置同一50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为80％、100％、120％的回收率溶液。(以亚硫酸氢钠计回收率80％、100％、120％浓度分别为0.038mg/ml、0.048mg/ml、0.058mg/ml)精密量取20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

73、准确度试验结果

74、

75、

76、结论：回收率介于97.5％～100.9％之间，rsd为1.18％，本法测定本品含量准确度良好。

77、耐用性

78、溶液稳定性

79、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

80、对照品溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

81、对照品溶液于室温放置，分别于不同时间分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。计算主峰面积的平均值及rsd值。

82、对照品溶液稳定性试验结果

83、

84、结论：对照品溶液室温条件下放置28.6h，峰面积的rsd值为2.97％，溶液稳定性良好。

85、系统耐用性

86、溶剂：0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液。

87、对照品溶液：取亚硫酸氢钠工作对照品约48mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量超声5分钟用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

88、供试品溶液：精密量取盐酸多巴酚丁胺注射液2ml，置20ml量瓶中，加溶剂适量超声5分钟用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

89、精密量取上述供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。分别调整柱温(±5℃)、流速(±0.1ml/min)、波长(±2nm)、流动相(±0.002mol/l)、色谱柱及仪器等因素，同法试验。

90、系统耐用性试验考察条件

91、

92、系统耐用性试验考察条件

93、

94、结论：在柱温45℃～55℃范围内，流速0.9ml/min～1.1ml/min范围内，盐浓度0.038mol/l～0.042mol/l范围内，波长273nm～277nm范围内，更换仪器与色谱柱(色谱柱编号u-036，hplc1408-a；色谱柱编号u-118，hplc1403-a)，结果rsd为2.90％，系统耐用性良好。

95、以下通过试验数据进一步说明本发明的有益效果。

96、本发明的检测方法和现有技术的区别比较如下：

97、

98、其中，现有技术方法1为，文献《两种方法测定复方氨基酸注射液(18aa-v)中亚硫酸氢钠含量》天津药学，tianjin pharmacy 2017年第29卷第3期中hplc法测定复方氨基酸注射液(18aa-v)中亚硫酸氢钠的含量测定方法数据为采用本发明检测方法和现有技术中的检测方法对盐酸多巴酚丁胺中亚硫酸氢钠的含量测定的对比数据，结果如下：

99、对照品亚硫酸氢钠溶液稳定性对比表：(hplc法亚硫酸氢钠)

100、

101、

102、结论：由对比数据可以看出，本发明方法在对照品亚硫酸氢钠溶液的稳定性方面优于现有技术1。

103、供试品溶液稳定性对比表：(hplc法盐酸多巴酚丁胺注射液批号：32230317)

104、

105、本发明方法在供试品溶液中的亚硫酸氢钠的稳定性优于现有技术1。

106、重复性结果对比：

107、

108、结论：本发明方法在rsd值优于现有技术1重复性考察结果rsd值。

109、采用文献《hilic-elsd法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠的含量》，中国药品标准-2013年06期中的方法和本发明也作了比较，表格如下，

110、

111、

112、现有技术方法2：《hilic-elsd法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠的含量》，中国药品标准-2013年06期中的方法

113、本发明方法在多方面的指标上也优于现有技术2，特别是现有技术2采用蒸发光散射检测器测定其含量，但需要蒸发光散射检测仪，不利于广泛应用。

114、本发明的优点总结如下：

115、1.亚硫酸氢钠溶液稳定性考察，采用不同的溶剂(水与0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液)进行溶液稳定性考察，溶剂为0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液时优于溶剂为水，故检测亚硫酸氢钠时采用溶剂为0.1％乙二胺四醋酸二钠溶液，稳定性考察稳定性良好；

116、2.重复测定供试品中亚硫酸氢钠的含量，结果重现性良好；

117、3.亚硫酸氢钠可以采用蒸发光散射检测器测定其含量，但需要蒸发光散射检测仪，不利于广泛应用。采用液相仪器，检测方便快捷，精密度好,灵敏度高，重现性好。