一种免疫组化抗体质量测试芯片制备方法与流程

本发明涉及测试芯片制备，尤其涉及一种免疫组化抗体质量测试芯片制备方法。

背景技术：

1、随着个体化诊疗时代的来临，精准医学的快速发展，免疫组织化学已成为病理医生不可或缺的辅助诊断手段。同时随着免疫组织化学染色过程逐步自动化，免疫组织化学在病理诊断中的作用日益广泛。如今，免疫组织化学技术已不仅仅用于判断肿瘤的来源、分类及鉴别诊断，而且广泛应用于检测相关指标来判断预后和指导临床个性化治疗，因此其准确性和可靠性至关重要。免疫组织化学染色在临床病理诊断的应用超过40年，但质量控制的标准化仍有待进一步完善，免疫组织化学染色过程中有很多因素可对染色结果产生不同程度的影响。免疫组化项目的准确性和可靠性70％以上由抗体试剂质量决定，因此抗体生产厂家的质量把控是解决免疫组化结果的准确性和可靠性的重要途径，目前国内免疫组化的厂家生产的抗体质量不一，为了提高染色结果的可靠性，确保免疫组织化学染色抗体及相关试剂的有效性，特研发此种组织芯片进行验证抗体。

2、目前免疫组化抗体生产厂家抗体质量控制面临着以下问题：免疫组化标准化程度低，不确定性强；制备管理控制所需的阳性对照组织花费大量精力；部分靶标所需质控组织难以获取；组织差异性为质控过程增加了更多的不可控过程；伦理问题导致质控体系难以平移。目前免疫组化抗体生产厂家对生产的抗体进行质检是通过单张的组织切片进行验证，这种验证方法优点是检测使用的标本面积大，阳性区域面积总体而言比较多；但高品质的病理诊断抗体需要多组织标本进行验证，且要设置阴性对照，单张组织切片根本不能满足高特异性、高亲和性抗体的筛选，所以需要进行改进。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种免疫组化抗体质量测试芯片制备方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种免疫组化抗体质量测试芯片制备方法，包括以下步骤：

4、s1、芯片微阵列设计：选取多种阴阳性组织标本设计15个点；设计5×3点组织阵列；

5、s2、收集相关蜡块：挑选需求的组织蜡块，根据he切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记；

6、s3、tma受体蜡块制备：取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡混合，制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块，在该蜡块20mm×16mm范围内设计5×3点组织阵列；组织四周预留0.5cm-0.7cm空间，用组织仪打孔制成tma蜡块；

7、s4、在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔，孔径设计为5mm；

8、s5、同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯；孔径同样为5mm；

9、s6、将组织芯转移到受体模块的孔中，每个组织芯之间的间距以0.5mm为佳；

10、s7、将构建好的tma芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内，并严密固定防止移位；放入55℃温箱中约10分钟，在蜡将要完全溶解前(半融化状态)，取出室温下冷却，使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体，取下蜡块，于4℃冰箱中保存备用；

11、s8、切片前，蜡块需在4℃中预冷4h左右，然后夹在切片机上进行修正，等修到全部组织完整为止；用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10min左右，快速连续切片30-50张左右，再用冰袋冷冻组织块，也可直接在冰冻切片机内进行，直至将组织切完为止；将4μm连续切片分别漂在凉水中，让其自然展开，按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右，将其贴在浸有apes切片黏合剂的载玻片上晾干，60℃中烤片3min左右，58℃中继续烤片18h，-20℃保存备用。

12、与现有技术相比，本技术将操作方法和操作时所需注意的技术问题和所需控制的时间和温度进行了明确的说明，从而能充分保证相应工作人员在操作时的质量，以保证测试效果，同时本方法能有效提升测试时测试芯片的数量，能有效满足高特异性、高亲和性抗体的筛选。

13、优选地，所述s1中15个点中位于同一侧的3个点为一组，五组点分别采用扁桃体、肝脏、阑尾、肾脏、胰腺为样板。

14、进一步的，能有效形成对照组。

15、优选地，所述s7中的塑料盒子包括壳体，所述壳体内固定有隔板件，所述壳体的下端设有调节机构，所述调节机构上设有第一齿轮件，所述第一齿轮件上由上至下依次啮合有四个第一直齿条，相邻两个第一直齿条之间呈直角设置，所述第一直齿条滑动安装在隔板件的下端，所述第一直齿条上设有适应机构，所述适应机构上设有同步杆件，所述隔板件上等间距设有四个开口，四个同步杆件分别滑动安装在四个开口内，四个同步杆件的上端均固定有夹板件。

16、进一步的，通过调节机构和适应机构的作用能控制夹板件的移动，通过夹板件的移动能有效夹紧tma芯片蜡块。

17、优选地，所述调节机构包括安装在壳体内底部的安装架，所述安装架的一侧滑动安装有第二直齿条，所述第二直齿条上啮合有第二齿轮件，所述第二齿轮件内固定套装有竖轴件，所述竖轴件的下端转动连接在壳体内的底部中心，所述竖轴件的上端固定在第一齿轮件的下端，所述壳体的下端一侧转动套接有螺杆件，所述第二直齿条的一侧螺合在螺杆件上。

18、进一步的，便于工作人员快速使螺杆件转动，以便通过相应部件的配合使夹板件进行移动。

19、优选地，所述适应机构包括固定在第一直齿条一侧的固定板，所述固定板上滑动安装有滑杆件，所述滑杆件的一端和同步杆件固定连接，所述滑杆件上套设有弹簧件，所述弹簧件的两端分别固定在固定板和滑杆件上。

20、进一步的，通过弹簧件和滑杆件的作用，能适应多种规格的tma芯片蜡块，更好的对其进行夹固。

21、优选地，所述第一齿轮件的直径大于第二齿轮件的直径。

22、进一步的，通过第一齿轮件和第二齿轮件的直径差，第一齿轮件的转动周长即齿数较多，提升第一直齿条的移动速度。

23、优选地，所述s3中的97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡混合通过混合机构进行制备，所述混合机构包括承载架，所述承载架的两侧均转动套接有转轴件，所述承载架内安装有调控机构，所述调控机构和其中一个转轴件相连接，两个转轴件之间共同固定有料斗件，所述料斗件的下端设有动力机构，所述动力机构上设有升降杆和立轴件，所述立轴件转动套接在料斗件上，所述升降杆的上端固定有横杆件，所述横杆件的一端转动套接有套管件，所述套管件滑动安装在立轴件上，所述套管件上安装有搅拌件，所述立轴件的下端一侧固定有安装板件，所述安装板件上安装有刮板件，所述刮板件和料斗件的内壁相抵触。

24、进一步的，能有效保证莱卡石蜡和蜂蜡自动混合的效果。

25、优选地，所述调控机构包括固定在承载架内底部的液压缸件，所述液压缸件的活塞杆末端固定有第三直齿条，其中一个转轴件上固定有转动齿轮件，所述第三直齿条和转动齿轮件相啮合，所述第三直齿条滑动安装在承载架内的一端侧壁上。

26、进一步的，通过液压缸件推拉第三直齿条进行升降，能使转动齿轮件带动其中一个转轴件进行正反向转动，便于快速使料斗件摆动，便于其内蜡液的排出。

27、优选地，所述动力机构包括安装在料斗件下端一侧的连接架，所述连接架的一侧安装有电机组件，所述电机组件的输出轴和立轴件同轴设置，所述电机组件的输出轴和立轴件的下端共同固定有u型杆，所述u型杆上转动套接有推杆件，所述推杆件的一端转动连接有斜杆件，所述斜杆件的下端转动连接在升降杆的下端，所述升降杆滑动安装在料斗件的一侧。

28、进一步的，通过电机组件能为料斗件内壁刮除和料斗件内物料的混合提供动力。

29、优选地，所述料斗件上安装有电加热器。

30、进一步的，电加热器能提升料斗件内的温度，有助于将蜡形成蜡液，便于根据需要将其制备成合适形态。

31、本发明的有益效果是：

32、1、通过将测试芯片制备的方法进行明确，便于后续工作人员能精准的按照步骤、时间和温度进行操作，能充分保证芯片制作的效率和质量，同时能有效形成多片测试芯片，以便有效的进行对照，满足高特异性、高亲和性抗体的筛选，提升测试的效果和质量；

33、2、通过对制备时所用物品进行明确，能有效保证制备的效果，充分提升制备的效率；

34、3、通过搅拌和加热，能充分提升莱卡石蜡和蜂蜡混合的效果，同时便于快速将混合制备后的蜡液排出，方便其成型。