一种注射用双半胱氨酸中双半胱氨酸含量的检测方法与流程

本发明属于医药化学，具体涉及一种注射用双半胱氨酸中双半胱氨酸含量的检测方法。

背景技术：

1、药物的含量是评价药物质量的重要指标，在评价药品优劣性方面发挥着重要作用，含量测定也是控制药品质量必不可少的重要手段。注射用双半胱氨酸是用于一次制备锝[99mtc]双半胱氨酸注射液的肾显像剂，临床上能反映肾脏的三维影像，提供肾脏功能参数，诊断多种肾脏疾病。注射用双半胱氨酸主要成分为双半胱氨酸，双半胱氨酸结构含有两个羧基，极性较大，其在普通反向色谱中的保留情况较差。同时双半胱氨酸结构中含有两个巯基，巯基在空气中易氧化形成二硫键，样品的不稳定性也大大增加了其准确检测的难度。普通的化合物双半胱氨酸通常采用化学滴定法中的碘量法(氧化还原法)进行含量测定。但是由于注射用双半胱氨酸中含有其他辅料和赋形剂，干扰氧还原反应，用碘量法无法进行含量测定；另外，实际应用中采用部颁标准中的含量测定方法高效液相色谱法时存在明显问题，在普通c18柱上、甲醇-水为60:40的流动相比例下，双半胱氨酸基本无保留，与溶剂峰及相关杂质峰无法达到基线分离，即使在原方法下调整甲醇-水比例至5:95，主成分的保留情况仍无改善趋势。这严重影响了注射用双半胱氨酸中双半胱氨酸(ec)含量测定结果的准确性和可靠性，不利于该品种的质量控制和提升，所以开发稳定可靠的含量测定方法，完善质量标准，是十分迫切且必要的。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于现有技术无法准确测量注射用双半胱氨酸中双半胱氨酸含量的问题，从而提供一种注射用双半胱氨酸中双半胱氨酸含量的检测方法。

2、为此，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供一种注射用双半胱氨酸中的双半胱氨酸含量的检测方法，采用反向离子对色谱法检测，所述反向离子对色谱法的色谱条件为：

4、色谱柱：waters x-bridge c18，柱体积为4.6×150mm，粒度为5μm；

5、流动相：体积比为10:90的甲醇-10mmol/l磷酸氢二钠溶液；

6、流速：1.0ml/min；

7、柱温：30℃；样品室温度为20℃；检测波长：210nm；进样体积为20μl；分析时间为15min；

8、所述磷酸氢二钠溶液中含有7.5mmol/l四丁基硫酸氢铵，ph为8.0。

9、进一步的，所述检测方法包括如下步骤：

10、s1：分别配制稀释剂，双半胱氨酸线性储备液，待测样品溶液；

11、s2：将双半胱氨酸线性储备液配制为一系列标准溶液；

12、s3：使用反向离子对色谱法对一系列标准溶液进行检测，然后将检测结果与一系列标准溶液的浓度进行线性回归得到标准曲线；

13、s4：使用反向离子对色谱法对待测样品溶液进行检测，然后将检测结果代入步骤s3中得到的标准曲线进行计算；

14、所述稀释剂与流动相成分相同。

15、优选地，所述双半胱氨酸线性储备液的配制方法为，精密称取双半胱氨酸15mg置于10ml量瓶中，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液0.2ml溶解，然后加入稀释剂稀释至刻度既得。

16、所述待测样品溶液的配制方法为，取待检测注射用双半胱氨酸，加入稀释剂溶解后转移至量瓶中，取稀释剂进行洗涤，将洗涤液全部转移至量瓶，加入稀释剂稀释至刻度，混匀即得。

17、所述一系列标准溶液的配制方法为，分别精密移取双半胱氨酸线性储备液0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.2ml、1.3ml至10ml量瓶中，加稀释剂定容，制得双半胱氨酸浓度分别为0.105mg/ml、0.120mg/ml、0.135mg/ml、0.150mg/ml、0.180mg/ml、0.195mg/ml的一系列标准溶液。

18、本发明技术方案，具有如下优点：

19、(1)本发明根据注射用双半胱氨酸的结构及性质，建立了特定的反向离子对高效液相色谱法的体系对注射用双半胱氨酸进行含量检测，以四丁基硫酸氢铵作为离子化试剂，对影响反向离子对色谱保留的主要因素，如流动相的ph值、离子对试剂的浓度等，进行了限定。同时为确保该分析方法适用于注射用双半胱氨酸的含量测定，对该分析方法的专属性、线性、准确度、精密度、进样稳定性和耐用性等项目进行了考察，以期为注射用双半胱氨酸的质量控制与提升研究提供参考。

20、(2)由于双半胱氨酸结构中含有2个可离子化的羧基，四丁基硫酸氢铵作为常用的四丁基铵类离子对试剂，可以与其作用生成中性离子对(rcoo-·tba+)，增强其在非极性固定相中的保留，相较于普通的反向色谱法，双半胱氨酸在反向离子对色谱中的保留情况得到了明显改善。相比其他方法考察结果，双半胱氨酸在离子对色谱法中出峰明确，保留理想，方法简便，且重现性好。

技术特征：

1.一种注射用双半胱氨酸中的双半胱氨酸含量的检测方法，其特征在于，采用反向离子对色谱法检测，所述反向离子对色谱法的色谱条件为：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述双半胱氨酸线性储备液的配制方法为，精密称取双半胱氨酸15mg置于10ml量瓶中，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液0.2ml溶解，然后加入稀释剂稀释至刻度既得。

4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品溶液的配制方法为，取待检测注射用双半胱氨酸，加入稀释剂溶解后转移至量瓶中，取稀释剂进行洗涤，将洗涤液全部转移至量瓶，加入稀释剂稀释至刻度，混匀即得。

5.根据权利要求2-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述一系列标准溶液的配制方法为分别精密移取双半胱氨酸线性储备液0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.2ml、1.3ml至10ml量瓶中，加稀释剂定容，制得双半胱氨酸浓度分别为0.105mg/ml、0.120mg/ml、0.135mg/ml、0.150mg/ml、0.180mg/ml、0.195mg/ml的一系列标准溶液。

技术总结
本发明公开一种注射用双半胱氨酸中的双半胱氨酸含量的检测方法，采用反向离子对色谱法检测，所述反向离子对色谱法的色谱条件为：色谱柱：Waters X‑Bridge C18，柱体积为4.6×150mm，粒度为5μm；流动相：体积比为10:90的甲醇‑10mmol/L磷酸氢二钠溶液；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；样品室温度为20℃；检测波长：210nm；进样体积为20μL；分析时间为15min；所述磷酸氢二钠溶液中含有7.5mmol/L四丁基硫酸氢铵，pH为8.0。本发明建立了特定的反向离子对色谱法体系对注射用双半胱氨酸进行含量检测，并对影响反向离子对色谱保留的主要因素进行了限定。

技术研发人员：陈志明,汪洋,代谊彬,吴二明,邹霈
受保护的技术使用者：江苏省原子医学研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16