SHP-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法与流程

本发明涉及慢性阻塞性肺疾病，尤其涉及shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法。

背景技术：

1、慢性阻塞性肺疾病是一种慢性进行性的呼吸系统疾病，主要特征是气流受限。它通常由长期吸烟、空气污染或其他有害气体和颗粒物引起。shp-1是一种酪氨酸磷酸酶，属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族。它由ptpn6基因编码，是一种负调控蛋白。shp-1主要在免疫细胞中表达，并在免疫调节和信号转导中发挥重要作用。细胞信号通路是指细胞内外信息传递的过程，用于调节和协调细胞的生理功能和行为。细胞信号通路涉及多种分子和蛋白质相互作用，通过化学信号分子的识别和传递来调控细胞的生理状态和行为。肺疾病是指影响肺部结构和功能的各种疾病，可以涉及肺组织、气道、肺泡和肺血管等结构。

2、慢性支气管炎是指气道(支气管)的慢性炎症，导致气道收缩和黏液分泌增加。这会导致咳嗽、咳痰和呼吸困难等症状，可以揭示肺疾病发展中炎症和纤维化的机制，可以干预肺疾病的发展和进展，例如抑制炎症反应、减轻肺纤维化等，为此提出了shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，克服了现有技术的不足，旨在解决背景技术中的问题。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，包括步骤1：设立组别、建立copd小鼠模型；

4、步骤2：取材，48天(末次给药24～48小时后)时行肺功能检测后取血液和肺泡灌洗液，肺组织；

5、步骤3：指标检测；

6、步骤4：观察各组检测指标间差异，统计分析数据；

7、步骤5：根据所获得的结果，探讨shp-1、pi3k/akt与气道重塑和肺气肿的相关性并于临床标本对照验证，探究shp-1调控pi3k/akt干预气道重塑和肺气肿的作用及可能机制。

8、优选的，所述方案利用已构建成功的气道上皮细胞shp-1基因特异性敲除的转基因小鼠和野生型小鼠，构建cse诱导的copd动物模型。

9、优选的，所述步骤一中，需选取野生型雄性c57bl/6小鼠24只，shp-1δ/δ小鼠24只，6-8周龄，将动物按随机数字表法平均分为野生型对照组、野生型copd模型组、shp-1δ/δ对照组、shp-1δ/δcopd模型组。

10、优选的，所述步骤3中指标检测的步骤包括：

11、s1、检测各组别小鼠肺功能：使用有创肺功能检测仪器进行肺功能检测；

12、s2、检测血清和肺泡灌洗液炎症标志物：使用elisa试剂盒检测检测小鼠血清和肺泡灌洗液中il-6、il-8、il-1β含量；

13、s3、qrt-pcr法检测肺组织shp-1、pi3k/aktmrna表达情况；

14、s4、wb检测肺组织shp-1、pi3k/akt蛋白表达情况；

15、s5、肺组织病理：收集肺组织固定后切成，行he染色后观察组织的病理变化，免疫组化分析shp-1、pi3k/akt表达。

16、优选的，所述pi3k/akt通路中，磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)是一个关键的酶，它可以将膜上的磷脂酰肌醇二磷酸(pip2)催化成磷脂酰肌醇三磷酸(pip3)。而pip3则作为第二信使，能够结合到胞内的蛋白质akt(也称为蛋白激酶b)上，激活akt。

17、优选的，所述mrna带有一串由核苷酸组成的序列，称为开放阅读框，orf中的三个核苷酸一组被称为密码子，每个密码子对应着一个氨基酸。在翻译过程中，mrna的密码子将被识别并与适配的trna上的反密码子进行碱基配对，从而在核糖体中合成相应的氨基酸序列，最终形成蛋白质。

18、本发明的有益效果是：

19、本发明：1、收集copd肺组织样本，通过he染色观察气道重塑和肺气肿情况，免疫组化分析shp-1蛋白和pi3k/akt表达，通过基础试验手段检测shp-1、pi3k/akt及炎症因子表达，并与对照组肺组织标本比较，阐述shp-1、pi3k/akt、气道重塑和肺气肿之间的相关性

20、2、利用已构建成功的气道上皮细胞shp-1基因特异性敲除的转基因小鼠和野生型小鼠，参考文献构建cse诱导的copd动物模型，阐明shp-1、pi3k/akt与气道重塑和肺气肿的相关性并于临床标本对照，探究其作用机制。

21、3、培养16hbe、a549和mle细胞系，给予cse刺激后检测细胞增殖凋亡与shp-1、pi3k/akt的表达情况，再将shp-1sirna刺激的细胞给予cse刺激后再次检测shp-1、pi3k/akt的表达，从而阐明shp-1对pi3k/akt的调控作用以及延缓气道重塑及肺气肿的作用及机制。

技术特征：

1.shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，所述方案利用已构建成功的气道上皮细胞shp-1基因特异性敲除的转基因小鼠和野生型小鼠，构建cse诱导的copd动物模型。

3.根据权利要求1所述的shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，所述步骤一中，需选取野生型雄性c57bl/6小鼠24只，shp-1δ/δ小鼠24只，6-8周龄，将动物按随机数字表法平均分为野生型对照组、野生型copd模型组、shp-1δ/δ对照组、shp-1δ/δcopd模型组。

4.根据权利要求1所述的shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，所述步骤3中指标检测的步骤包括：

5.根据权利要求1所述的shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，所述pi3k/akt通路中，磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)是一个关键的酶，它可以将膜上的磷脂酰肌醇二磷酸(pip2)催化成磷脂酰肌醇三磷酸(pip3)。而pip3则作为第二信使，能够结合到胞内的蛋白质akt(也称为蛋白激酶b)上，激活akt。

6.根据权利要求4所述的shp-1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其特征在于，所述mrna带有一串由核苷酸组成的序列，称为开放阅读框，orf中的三个核苷酸一组被称为密码子，每个密码子对应着一个氨基酸。在翻译过程中，mrna的密码子将被识别并与适配的trna上的反密码子进行碱基配对，从而在核糖体中合成相应的氨基酸序列，最终形成蛋白质。

技术总结
本发明涉及慢性阻塞性肺疾病技术领域，尤其涉及SHP‑1、细胞信号通路与肺疾病的相关性检测方法，其包括：步骤1：设立组别、建立COPD小鼠模型；步骤2：取材，48天(末次给药24～48小时后)时行肺功能检测后取血液和肺泡灌洗液，肺组织；步骤3：指标检测；步骤4：观察各组检测指标间差异，统计分析数据；步骤5：根据所获得的结果，探讨SHP‑1、PI3K/AKT与气道重塑和肺气肿的相关性并于临床标本对照验证，探究SHP‑1调控PI3K/AKT干预气道重塑和肺气肿的作用及可能机制。利用已构建成功的气道上皮细胞SHP‑1基因特异性敲除的转基因小鼠和野生型小鼠，参考文献构建CSE诱导的COPD动物模型，阐明SHP‑1、PI3K/AKT与气道重塑和肺气肿的相关性并于临床标本对照，探究其作用机制。

技术研发人员：何权,马小梅,陈子,陆旭之,封伟奇,凌婷
受保护的技术使用者：镇江市中西医结合医院（镇江市第二人民医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15