一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林C的方法与流程

本发明属于中药质量检测领域，具体涉及一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法。

背景技术：

1、蜂胶为工蜂釆集胶原植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶黏性物质。蜂胶提取物是蜂胶原料通过溶剂提取法、临界流体萃取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超高压加工提取法等得到的物质。

2、巴西蜂胶主要指以酒神菊属(baccharis)为胶原植物的蜂胶。阿替匹林c(3,5-二异戊烯基-4-羟基肉桂酸)是巴西蜂胶中的主要活性酚酸类物质，含量远高于其他地区蜂胶。中国的蜂胶主要植物来源为杨树属及其杂交属，主要活性成分为类黄酮，蜂胶标准中也是以类黄酮含量的高低为依据判断蜂胶质量优劣。2020年版《中国药典》收载的蜂胶鉴别项中使用薄层色谱法，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10：3：0.5)为展开剂，对白杨素、高良姜素、乔松素进行鉴别，含量测定项中使用了2种高效液相色谱法对白杨素、高良姜素、乔松素进行含量测定。上述鉴别项中采用的展开剂中含有易制毒试剂甲苯，且实验发现上述方法并不适用于鉴别巴西蜂胶或测定巴西蜂胶中阿替匹林c的含量。

3、阿替匹林c成分的有无是评判是否为巴西蜂胶产品的主要指标，而其含量高低是评价巴西蜂胶质量优劣的主要指标。由于巴西蜂胶的售价要高出中国杨树型蜂胶的数倍，目前市场上出现以中国杨树型蜂胶冒充巴西蜂胶的现象。因此，亟需一种适用于检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法。

4、行业标准则采用高效液相色谱法测定了蜂胶中阿替匹林c含量(gh/t1114-2015)，检测时间较长，且不能多批次同时检测。高效薄层扫描法能够采用薄层色谱对成分进行分离，并通过扫描对其测定成分定量分析，能够对多个样品同时进行分析。高效薄层扫描法目前有用于测定茶叶中咖啡因含量、测定三七细粉中皂苷含量、测定滁菊中木犀草素、芹菜素、金合欢素含量、测定北芪菇中黄芪苷含量等。采用高效薄层扫描法测定不同成分，对展开剂的选择以及扫描参数的设定均有特殊要求。目前还没有适用于测定巴西蜂胶的薄层色谱方法，也没有将高效薄层扫描法应用于巴西蜂胶中测定阿替匹林c含量的相关报道。薄层扫描法在薄层色谱鉴别实验的基础上，无需显色环节，按照定量操作要求，即可获得与高效液相色谱法具有可比性的测定结果。因此，亟需开发一种用于测定巴西蜂胶中阿替匹林c含量的新方法，为巴西蜂胶质量控制提供技术支持。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中的不足，并提供一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法。

2、本发明所采用的具体技术方案如下：

3、本发明提供一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法，具体方法如下：

4、采用薄层色谱法，吸取经过预处理的蜂胶供试品溶液点于作为固定相的薄层层析硅胶板上，使蜂胶供试品溶液呈条状；采用石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合体系作为展开剂，使展开剂流过点有蜂胶供试品溶液的固定相，展开达到各成分相互分离的目的后晾干，得到待测样品；

5、采用薄层扫描仪对待测样品中的层析斑点进行扫描，得到待测样品的吸收度积分值，与阿替匹林c标准曲线进行换算，得到待测样品中阿替匹林c的含量。

6、作为优选，上述展开剂中石油醚、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～14)：(3～6)：(0.2～1)。

7、作为优选，上述薄层色谱仪扫描参数设定如下：测试波长为290～320nm，参比波长为400～800nm。

8、作为优选，上述预处理过程如下：将蜂胶供试品溶于甲醇中，并超声处理10～60分钟，使其混合均匀，得到混合物；混合物中蜂胶供试品的浓度范围为5～100mg/ml；将上述混合物过滤，取滤液作为蜂胶供试品溶液。

9、进一步的，上述蜂胶供试品为巴西蜂胶原料或蜂胶提取物。

10、进一步的，上述混合物过滤采用粒径为30～120μm的定性滤纸。

11、作为优选，上述蜂胶供试品溶液的吸取量为1～10μl，采用智能点样仪进行点样。

12、作为优选，上述薄层层析硅胶板的型号为高效g型。

13、作为优选，上述阿替匹林c标准曲线获取方式如下：

14、取阿替匹林c标准品，加甲醇制成阿替匹林c标准溶液；所述阿替匹林c标准溶液的浓度范围为0.1～0.5mg/ml；分别吸取阿替匹林c标准溶液1～10μl，采用智能点样仪点于薄层层析硅胶板上，使阿替匹林c标准溶液呈条状，采用所述展开剂流过点有阿替匹林c标准溶液的薄层层析硅胶板，展开达到各成分相互分离的目的后晾干，得到不同质量的阿替匹林c标准样品；

15、采用薄层扫描仪对不同质量的阿替匹林c标准样品中的层析斑点进行扫描，得到不同质量阿替匹林c标准样品的吸收度积分值；以阿替匹林c质量为横坐标，吸收度积分值为纵坐标，进行线性回归，得到阿替匹林c标准曲线。

16、本发明相对于现有技术而言，具有以下有益效果：

17、(1)本发明通过大量实验优化得到一种薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法，选择石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合体系作为展开剂，将扫描参数设定为测试波长290～320nm，参比波长400～800nm，使供试品薄层色谱中阿替匹林c的色谱峰分离良好、扫描稳定。与现有技术2020年版《中国药典》收载的蜂胶测定方法相比，本发明采用的展开剂中不含易制毒试剂甲苯。

18、(2)本发明可在同一块薄层层析硅胶板上同时分离、分析多个蜂胶样品，具有操作简便、分析速度快、溶剂消耗少、分析成本低等优点。

技术特征：

1.一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林c的方法，其特征在于，具体方法如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述展开剂中石油醚、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～14)：(3～6)：(0.2～1)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述薄层色谱仪扫描参数设定如下：测试波长为290～320nm，参比波长为400～800nm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理过程如下：将蜂胶供试品溶于甲醇中，并超声处理10～60分钟，使其混合均匀，得到混合物；所述混合物中蜂胶供试品的浓度范围为5～100mg/ml；将上述混合物过滤，取滤液作为蜂胶供试品溶液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述蜂胶供试品为巴西蜂胶原料或蜂胶提取物。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述混合物过滤采用粒径为30～120μm的定性滤纸。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蜂胶供试品溶液的吸取量为1～10μl，采用智能点样仪进行点样。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述薄层层析硅胶板的型号为高效g型。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阿替匹林c标准曲线获取方式如下：

技术总结
本发明公开了一种使用薄层扫描仪检测巴西蜂胶中阿替匹林C的方法，属于中药质量检测领域。本发明提供的方法具体包括：吸取经过预处理的蜂胶供试品溶液，点于薄层层析硅胶板上；采用体积比为(8～14)：(3～6)：(0.2～1)的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合体系作为展开剂，使展开剂流过点有蜂胶供试品溶液的固定相，展开晾干得到待测样品；采用薄层扫描仪对待测样品中的层析斑点进行扫描，测试波长为290～320nm，参比波长为400～800nm，得到待测样品的吸收度积分值，与阿替匹林C标准曲线进行换算，得到待测样品中阿替匹林C的含量。本发明提供的方法可同时测定多批蜂胶供试品中阿替匹林C的含量，阿替匹林C的色谱峰分离良好、扫描稳定，具有检测速度快、成本低的优点。

技术研发人员：姜慧洁,周丹英,章越
受保护的技术使用者：浙江省中药研究所有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15