一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法与流程

本发明属于药物分析检测，具体涉及一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法。

背景技术：

1、在药物分析中所称的“有关物质(related substances)”是指在原料药生产过程中带入的起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、贮藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和制剂工艺密切相关，药物在合成和制剂过程中的任何一个因素的改变都可能导致其有关物质的种类不同，因而有关物质的检测和控制过程相对复杂。有关物质的检测是控制药品质量的重要指标。

2、富马酸伏诺拉生(1-[5-(2-氟苯基)-1-(吡啶-3-基磺酰基)-1h-吡咯-3-基]-n-甲基甲胺单富马酸盐)，是一种新型k+竞争性酸阻滞剂(p-cab)，主要用于治疗反流性食管炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、幽门螺杆菌的根除治疗等酸相关疾病。其抑酸效果迅速、有效、持续，能规避传统质子泵抑制剂(ppis)对酸不稳定且个体差异大等缺点。

3、富马酸伏诺拉生性质较稳定，不易降解，最终引入的杂质主要是合成过程中的工艺杂质和降解杂质。专利cn113390983b公开了一种同时测定富马酸伏诺拉生中3种杂质的检测方法，该法采用十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱，在260nm检测波长，25～45℃柱温，0.8～1.2ml/min流速条件下，以0.02～0.05mol/l磷酸氢二钾溶液作为流动相a，以乙腈作为流动相b，在梯度洗脱条件下进行检测。然而该法仅适用于同时测定富马酸伏诺拉生中吡啶-3-磺酸、吡啶-3-磺酸甲酯、吡啶-3-磺酸乙酯3种杂质，检测杂质个数有限，并未对富马酸伏诺拉生合成工艺过程中所产生的其他杂质进行系统检测，其应用范围较小。为加强富马酸伏诺拉生的质量控制，亟需一种同时检测富马酸伏诺拉生片有关物质的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，以解决现有技术中利用rp-hplc同时检测富马酸伏诺拉生片有关物质种类较少的问题，有效控制产品质量。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，包括以下步骤：

4、以体积比为14:5:1的磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈溶液作为流动相a，体积比为3:7的磷酸盐缓冲液-乙腈溶液为流动相b进行rp-hplc检测，所述rp-hplc检测的色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取富马酸伏诺拉生片本品和富马酸伏诺拉生原料分别用流动相a溶解稀释制备供试品溶液和对照品溶液，将对照品溶液用流动相a稀释为灵敏度溶液。

5、进一步的，所述磷酸盐缓冲溶液具体为：取磷酸二氢钾3.40g和磷酸氢二钠8.94g，加水溶解并稀释至2000ml，用磷酸或氢氧化钠试液调节ph值至6.8，浓度为0.02-0.03mol/l。

6、进一步的，所述色谱柱为shim-packgistc18-aq，4.6mm×100mm，3μm或效能相当的色谱柱。

7、进一步的，所述rp-hplc检测的梯度洗脱程序为：以所述流动相的总体积为100％计，

8、在第0～10min，所述流动相a的体积由90％增加到100％，所述流动相b的体积由10％减少到0％；

9、在第10～30min，所述流动相a的体积由100％减少到40％，所述流动相b的体积由0％增加到60％；

10、在第30～40min，所述流动相a的体积由40％减少到10％，所述流动相b的体积由60％增加到90％；

11、在第40～45min，所述流动相a的体积为10％，所述流动相b的体积为90％；

12、在第45～45.1min，所述流动相a的体积由10％增加到90％，所述流动相b的体积由90％减少到10％；

13、在第45.1～55min，所述流动相a的体积为90％，所述流动相b的体积为10％。

14、进一步的，所述rp-hplc检测的流速为0.5-1.5ml/min；柱温为20-30℃；检测波长为210-250nm；进样体积20μl。

15、进一步的，所述供试品溶液浓度为0.3mg/ml，对照品溶液浓度为4μg/ml，灵敏度溶液浓度为0.4μg/ml。

16、进一步的，将所述灵敏度溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，再精密量取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

17、进一步的，所述对照品溶液色谱图中伏诺拉生峰的理论塔板数不得低于20000，拖尾因子不得大于1.5，重复进样6次，伏诺拉生峰面积的相对标准偏差不得过2.0％；灵敏度溶液主峰峰高信噪比大于10。

18、本发明的有益效果：

19、1.本发明的检测方法灵敏度高，准确度高，能有效检出低浓度药液中的5种杂质，节约富马酸伏诺拉生药物的检测成本。

20、2.本发明的检测方法专属性强，有效控制富马酸伏诺拉生片的质量，对工艺和质量控制具有积极意义。

21、3.本发明利用反相-高效液相色谱法进行检测，具有柱效高、使用寿命长，重现性好的优势，与大多数检测器相匹配。

技术特征：

1.一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，其特征在于，以体积比为14:5:1的磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈溶液作为流动相a，体积比为3:7的磷酸盐缓冲液-乙腈溶液为流动相b进行rp-hplc检测，所述rp-hplc检测的色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取富马酸伏诺拉生片本品和富马酸伏诺拉生原料分别用流动相a溶解稀释制备供试品溶液和对照品溶液，将对照品溶液用流动相a稀释为灵敏度溶液；

2.根据权利要求1所述的一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.02-0.03mol/l。

3.根据权利要求1所述的一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为0.3mg/ml，对照品溶液浓度为4μg/ml，灵敏度溶液浓度为0.4μg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，其特征在于，所述rp-hplc检测的流速为0.5-1.5ml/min；柱温为20-30℃；检测波长为210-250nm；进样体积为20μl。

技术总结
本发明公开了一种富马酸伏诺拉生片有关物质测定方法，属于药物分析检测技术领域。该方法以磷酸盐缓冲液‑甲醇‑乙腈溶液作为流动相A，磷酸盐缓冲液‑乙腈溶液为流动相B，利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂进行反相‑高效液相色谱梯度洗脱程序检测，可以在一个色谱条件下同时检测富马酸伏诺拉生片中5种杂质，各色谱峰的分离度均较好，灵敏度高，检测方法稳定，可用于富马酸伏诺拉生中生产过程中对杂质的监控，有利于控制、提高富马酸伏诺拉生片的质量；同时操作简单，适用于大规模产业化生产中对原料药的质量监控。

技术研发人员：徐宁,马莉,仲达
受保护的技术使用者：海南卫康制药（潜山）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16