T3夹心法检测试剂盒的制作方法

本发明涉及生化检测，更具体地，涉及一种t3夹心法检测试剂盒。

背景技术：

1、三碘甲状腺原氨酸(3,5,3’-l-三碘甲状腺原氨酸，t3)是由甲状腺合成和分泌(占大约20％)或由甲状腺素在5’位脱碘转化而来(占大约80％)的一种激素，分子量为651道尔顿，是目前已知生物活性最强的甲状腺激素，其生物活性为甲状腺素(t4)的3～5倍。在血液循环中，99.7％的t3与结合蛋白结合，发挥生理活性的是游离的t3(ft3)。甲状腺素(t4)，即3,5,3’,5’-四碘甲腺原氨酸，分子量约为776.93道尔顿，是甲状腺腺体分泌的主要激素，以游离形式释放进入血循环中，绝大多数(99％以上)与血浆中的蛋白质结合，称为结合态，还有极微量的t4未与血浆中的蛋白质结合，称为游离态t4(ft4)。临床上t3、ft3、t4与ft4的联合检测，是临床诊断甲状腺功能障碍的重要指标，可用于区分复杂的甲状腺疾病。

2、目前t3的诊断试剂盒主要由罗氏、西门子、雅培、贝克曼的国外四大企业垄断，其性能较受市场认可。t3分子量较小，只存在一个抗体识别位点，故市面上厂家的t3诊断试剂盒均为基于抗原-抗体特异性识别机制的竞争免疫分析法。竞争法属于试剂有限型分析，只有当抗体亲和力常数超过1011l/mol时，灵敏度才有可能达到ppt水平，但超高亲和力的抗体难以制备。故市面上的t3诊断试剂盒均存在灵敏度受限于抗体亲和力、交叉反应率较高、易出现假阳性等问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种t3夹心法检测试剂盒，夹心免疫分析属于试剂过量型分析，比竞争免疫分析法具有更高的灵敏度、特异性以及检测范围，可为临床t3项目的检测提供更稳定、更准确的结果。

2、为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

3、一种t3夹心法检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，

4、所述试剂1包括第一t3特异性结合体，所述第一t3特异性结合体为t3特异性抗体单条重链或t3特异性抗体vh片段；

5、所述试剂2包括第二t3特异性结合体，所述第二t3特异性结合体为t3特异性抗体单条轻链或t3特异性抗体vl片段；

6、所述第一t3特异性结合体和所述第二t3特异性结合体二者之一还结合有化学发光剂。

7、实施本发明实施例，将具有如下有益效果：

8、t3特异性抗体属于igg抗体，由四条多肽链构成，分别为两条结构相同的轻链和两条结构相同的重链，四条链形成典型的“y”型抗体结构。igg抗体轻链的2个ig结构域分别为vl和cl，重链的4个ig结构域分别为vh、c1、c2、c3，在抗原抗体结合过程中，抗体的重链vh片段与轻链的vl片段可以组成抗原识别区，共同识别抗原位点。本发明利用上述原理，选择了t3特异性抗体单条重链(其包括vh片段)或t3特异性抗体vh片段与t3特异性抗体单条轻链(其包括vl片段)或t3特异性抗体vl片段作为配对的两抗体组合，即t3特异性抗体单条重链与t3特异性抗体单条轻链、t3特异性抗体单条重链与t3特异性抗体vl片段、t3特异性抗体vh片段与t3特异性抗体单条轻链、t3特异性抗体vh片段与t3特异性抗体vl片段，分别对待测抗原进行捕获和检测，形成对单一抗原位点的夹心法识别。游离的重链、轻链、vh片段和vl片段之间的互相作用非常微弱，加入待测样本后，重链或vh片段与轻链或vl片段会通过t3抗原的“桥梁”作用而结合在一起。基于此，本发明可形成一种t3开放夹心式免疫分析方法，待测物质的检测浓度与检测信号成正比，能够显著提升t3检测试剂盒的灵敏度、准确性，避免了t3竞争法试剂盒由于单个抗体识别导致的高交叉反应率、假阳性问题以及灵敏度较差的问题。

技术特征：

1.一种t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，

2.根据权利要求1所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述第一t3特异性结合体和所述第二t3特异性结合体二者之另一还结合有磁珠。

3.根据权利要求2所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠的表面还修饰有羧基、氨基或甲苯磺酰基中的一种，所述磁珠通过修饰基团与所述第一t3特异性结合体或所述第二t3特异性结合体相结合。

4.根据权利要求2或3所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为1μm～12μm；

5.根据权利要求1～3中任意一项所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述第一t3特异性结合体的浓度为0.1ug/ml～5ug/ml。

6.根据权利要求1～3中任意一项所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述第二t3特异性结合体的浓度为0.1ug/ml～5ug/ml。

7.根据权利要求1所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光剂为吖啶酯。

8.根据权利要求7所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯的浓度为10ng/ml～200ng/ml。

9.根据权利要求1所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1还包括0.01m～0.2m的第一缓冲液；

10.根据权利要求9所述的t3夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液包括pbs缓冲液、tris缓冲液、hepes缓冲液、pipes缓冲液、mops缓冲液中的一种或两种以上；

技术总结
本发明公开了一种T3夹心法检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括第一T3特异性结合体，所述第一T3特异性结合体为T3特异性抗体单条重链或T3特异性抗体VH片段；所述试剂2包括第二T3特异性结合体，所述第二T3特异性结合体为T3特异性抗体单条轻链或T3特异性抗体VL片段；所述第一T3特异性结合体和所述第二T3特异性结合体二者之一还结合有化学发光剂。本发明的夹心检测法属于试剂过量型分析，比现有技术的竞争免疫分析法具有更高的灵敏度、特异性以及检测范围，可为临床T3项目的检测提供更稳定、更准确的结果。

技术研发人员：赵博文
受保护的技术使用者：深圳市科曼医疗设备有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15