氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法与流程

本发明属于医药检测分析，特别涉及一种氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法。

背景技术：

1、氟比洛芬是非甾体消炎镇痛药中优秀品种之一，主要用于治疗类风湿关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、外伤疼痛和其他疼痛，氟比洛芬的化学结构式为：

2、。

3、杂质研究为药物研发过程中的重要部分，与药品的安全性和有效性直接相关。遗传毒性杂质（genotoxic impurities，gtis）是指能引起遗传毒性的杂质，包括致突变性杂质和其他无致突变性的杂质。其主要来源于原料药或制剂的生产过程，如起始原料、反应物、催化剂、试剂、溶剂、中间体、副产物、降解产物等。根据ich m7指导原则，氟比洛芬中的11个硝基苯类及1个氯苯杂质均含有遗传毒性警示结构，由起始物料引入，与原料药结构无关，且无致突变性数据，归属于第3类，因此我们通过ttc（毒理学关注阈值）算法拟定其可接受限度。参考氟比洛芬片（商品名：ansaid）的fda说明书，本制剂日均最大摄入量300mg，按日均单个杂质最大摄入量为1.5μg计算，得出杂质限度为5ppm。因该类杂质限度较低，一般气相、高效液相色谱仪等检测仪器不能满足检测灵敏度的要求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种gc-ms/ms法检测氟比洛芬中基因毒性杂质的方法，能够针对氟比洛芬中硝基苯类及氯苯这些基因毒性杂质在微量水平上进行定量检测。

2、根据本发明的一个方面，提供一种氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，采用gc-ms/ms法对供试品溶液进行测定；

3、供试品溶液配制方法为：取氟比洛芬，用氢氧化钠溶液处理，超声，用乙腈定容即得。

4、进一步地，气相色谱条件为：

5、气相色谱柱：vf-1701ms；

6、升温程序：起始温度为75~85℃，维持1分钟，以每分钟5℃的速率升温至170℃，再以每分钟10℃的速率升温至250℃，维持10分钟；

7、进样口温度：245~255℃；

8、柱流量：0.9~1.1ml/min；分流进样，分流比：10:1；进样量：1μl。

9、进一步地，质谱条件为：

10、ei源温度：230℃；

11、电子能量：70ev；

12、溶剂延迟时间：3min；

13、扫描模式：多反应离子检测（mrm）。

14、进一步地，所述基因毒性杂质包括3,4-二氟硝基苯、2,6-二氟硝基苯、对氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、硝基苯、1-氟-2-硝基苯、对硝基氯苯、邻硝基氯苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯、氯苯。

15、进一步地，所述的多反应离子检测所采用的的定性定量的离子对和碰撞能如下：

16、。

17、进一步地，供试品溶液配制中，所述氢氧化钠溶液的浓度为5~10 mg/ml。

18、本发明的有益效果：

19、本发明的氟比洛芬基因毒性杂质的分析方法，采用gc-ms/ms法测定，可以将同分异构体杂质（如杂质3,4-二氟硝基苯、2,6-二氟硝基苯与2,4-二氟硝基苯；对氟硝基苯与1-氟-2-硝基苯；对硝基氯苯与邻硝基氯苯；2,6-二氯硝基苯与2,4-二氯硝基苯）通过气相模块进行分离，根据气相出峰位置的不同对上述杂质进行区分；对于在气相分离度较差或出峰位置一致的杂质（如杂质2,4-二氟硝基苯与1-氟-4-硝基苯）可以通过质谱分子量的不同将杂质进行区分；从而本发明的分析方法大大提升了杂质分离度的要求，可将多个杂质在同一方法进行检测，不需要开发多个方法分别对不同的杂质进行检测，降低了检测和方法开发成本。

20、本发明的氟比洛芬基因毒性杂质的分析方法，最低检测限可达到约0.04ng/ml，极大地提高了氟比洛芬中的杂质检测灵敏度，能够在微量水平上定性定量检测出氟比洛芬中硝基苯类及氯苯基因毒性杂质，本发明的检测方法经方法学验证，各项检测指标均符合规定，检测结果准确，可靠，为监控氟比洛芬的质量稳定性和临床用药安全提供了保证。

技术特征：

1.一种氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，采用gc-ms/ms法对供试品溶液进行测定；

2.根据权利要求1所述的氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，

3.根据权利要求1或2所述的氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，

4.根据权利要求1~3任一项所述的氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，所述基因毒性杂质包括3,4-二氟硝基苯、2,6-二氟硝基苯、对氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、硝基苯、1-氟-2-硝基苯、对硝基氯苯、邻硝基氯苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯、氯苯。

5.根据权利要求1~4任一项所述的氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，所述的多反应离子检测所采用的的定性定量的离子对和碰撞能如下：

6.根据权利要求1所述的氟比洛芬基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，

技术总结
本发明提供了一种氟比洛芬中基因毒性杂质的分析方法，采用GC‑MS/MS法对供试品溶液进行测定；本发明的分析方法可以对氟比洛芬原料药中的多个基因毒性杂质进行分析，提升了杂质分离度的要求，不需要开发多个方法分别对不同的杂质进行检测，降低了检测和方法开发成本；同时，本发明的分析方法极大地提高了氟比洛芬中的杂质检测灵敏度，能够在微量水平上定性定量检测出氟比洛芬中硝基苯类及氯苯基因毒性杂质。

技术研发人员：苏艳红,徐汨,王皖,张幸
受保护的技术使用者：湖南九典宏阳制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15