区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法与流程

本发明涉及中药质量控制领域，具体为一种区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法。

背景技术：

1、地锦草，又称草血竭、血见愁草等，其为来源于大戟科植物的全草，具有清热、利湿、退黄、止血等功效，还具有显著的抗菌、抗寄生虫以及抗氧化、保肝、解毒等作用。中国药典2020年版一部收载地锦草为大戟科植物地锦euphorbia humifusa willd.或斑地锦euphorbia maculate l.的干燥全草。此外，地锦草也是一味蒙药，称为“马拉干-札拉-乌布斯”，固定基原为地锦euphorbia humifusa willd.。据产地调研，在实际应用中除地锦草的两种基原地锦、斑地锦外，尚有小叶大戟euphorbia makinoi hayata.等因外形与地锦草极其相似，常一起混采混收，在个别地区也用作地锦草入药。但在制剂(如配方颗粒)的标准中，需要固定基原为一种，不能混用。在保证用药的同时，更有利于药品的监管。正因为实际生产过程中对地锦草有固定基原的需求，现有技术出于该目的，也针对地锦草的鉴别方法进行了一系列的开发和研究。

2、在针对不同基原的地锦草的鉴别方法的研究中，引用文献1公开了采用显微镜观察叶片能够区别地锦和斑地锦，但该方法不适用于失去叶片形态的地锦草的相关产品的鉴别。

3、在针对地锦草及其制剂的薄层鉴别方法的研究中，除中国药典(2020年版)一部中的规定以外，引用文献2还公开了一种地锦草中药制剂的检测方法，以槲皮素为对照，鉴别地锦草片中的药物成分；引用文献3也对地锦草中的有效成分槲皮素进行了探讨，选择乙醇作为溶剂进行索氏提取，之后采用水煮醇沉酸水解提取，之后进行薄层鉴别。但药典法、引用文献2、3在供试品溶液的制备中，均采用了酸水解的方式，使地锦草中的黄酮苷类成分水解为黄酮苷元(槲皮素)，然后以单一的槲皮素对照品的薄层斑点进行鉴别评价与质量控制，该方法不能充分反映地锦草中原有的化学成分信息，且薄层色谱的斑点信息量有限，不利于全面地对地锦草及其相关产品进行质量评价与控制，此外，在多种中药材中均含有槲皮素成分，因此，该方法也无法区分含有槲皮素成分的混淆品或伪品等。

4、引用文献4公开了一种地锦草及其制剂的薄层鉴别方法，虽然该方法在供试品溶液的制备过程中未采用酸水解的步骤，薄层色谱的信息量有所增加，但采用聚酰胺薄层板，旨在分析非水解成分，并非基原及真伪鉴别。虽然从结果来看，不同基原和真伪的色谱斑点有差异，但其色谱图上斑点与斑点之间未能完全分离，单个斑点不圆整、拖尾严重，说明该方法并不适用于不同基原的地锦草及地锦草的真伪鉴别。引用文献5中公开了地锦草的薄层色谱法，其色谱图清晰度欠佳，且同样没有关注地锦草的基原以及真伪鉴别。此外，上述现有技术中使用的展开剂中大多含有甲苯，在生产实践中不利于环境安全及人体健康，有待于进一步改进。

5、虽然上述现有技术中，针对地锦草及其制剂提供了一些质量控制方法，其中在薄层鉴别方法上也进行了不断地探索与改进，但对于提供一种简便、安全、低成本的地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，还需要进一步地提升和开发。

6、引用文献：

7、引用文献1：魏胜华,孟娜,柴瑞娟.地锦与斑地锦的显微鉴别研究[j].湖南农业科学,2012,(1):42-43,49.

8、引用文献2：cn102078363a

9、引用文献3：余琳.地锦草中槲皮素的薄层分析[j].南昌大学学报(工科版),1996,18(3):85-87.

10、引用文献4：cn115436557a

11、引用文献5：cn109085285b

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、为了解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于建立一种区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，该方法高效、安全、准确，操作简便易行，鉴别特征明显，结果易于判断，专属性较好，更能体现地锦草及其制剂的整体质量，并且还能够同时区分地锦草的基原和真伪。

3、用于解决问题的方案

4、[1].本发明首要的是提供一种区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，所述方法包括供试品溶液的制备、对照药材溶液的制备和薄层鉴别，

5、其中，所述供试品溶液的制备包括取供试品，加水处理，过滤，滤液使用有机溶剂振摇提取，静置使分层，取上清液浓缩至干，残渣加醇类溶剂使溶解；

6、所述对照药材溶液的制备包括取地锦草对照药材，加水煎煮或加热回流处理，过滤，滤液使用有机溶剂振摇提取，静置使分层，取上清液浓缩至干，残渣加醇类溶剂使溶解；所述地锦草对照药材包括地锦草(斑地锦)药材、地锦草(地锦)药材；

7、所述薄层鉴别包括取供试品溶液和对照药材溶液，分别点样于薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂展开，检视。

8、[2].根据[1]所述的薄层鉴别方法，其中，所述供试品包括不同基原的地锦草药材及其相关产品、地锦草伪品药材及其相关产品；所述不同基原的地锦草药材包括地锦草(地锦)药材、地锦草(斑地锦)药材；所述地锦草伪品药材为小叶大戟药材；所述相关产品选自饮片、标准汤剂以及配方颗粒中的一种或多种。

9、[3].根据[2]所述的薄层鉴别方法，其中，在所述供试品溶液的制备中，所述加水处理包括加水溶解、加水煎煮和加热回流处理中的任一种；所述相关产品选自饮片时，饮片与所述加水处理的所用水的质量体积比为1g：(10～25)ml；所述相关产品选自标准汤剂时，标准汤剂与所述加水处理的所用水的质量体积比为1g：(20～60)/ml；所述相关产品选自配方颗粒时，配方颗粒与所述加水处理的所用水的质量体积比为1g：(20～60)/ml；所述加水处理的时间为10～20min。

10、[4].根据[1]～[3]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，在所述供试品溶液的制备中，所述有机溶剂选自乙醚、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或乙酸乙酯中的一种或多种；所述振摇提取的次数为至少1次，所述滤液与所述有机溶剂的体积比为(1～2)：(1～1.5)；所述醇类溶剂为甲醇或甲醇的水溶液。

11、[5].根据[1]～[4]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，在所述对照药材溶液的制备中，地锦草对照药材与所述加水煎煮或加热回流处理的所用水的质量体积比为1g：(100～250)ml，所述加水煎煮或加热回流处理时间为10～20min。

12、[6].根据[1]～[5]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，在所述对照药材溶液的制备中，所述有机溶剂选自乙醚、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或乙酸乙酯中的一种或多种；所述振摇提取的次数为至少1次，所述滤液与所述有机溶剂的体积比为(1～2)：(1～1.5)。

13、[7].根据[1]～[6]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，在所述薄层鉴别的所述点样的操作中，分别点样于同一高效硅胶薄层板上，所述供试品溶液的点样量为1～5μl，所述对照药材溶液的点样量为1～5μl；在所述薄层鉴别中，以体积比为(4～7)：(2～3.5)：(1～3)：(0.2～0.9)的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂展开；优选地，以体积比为6：2.5：2：0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂展开。

14、[8].根据[1]～[7]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，所述薄层鉴别还包括展开后晾干，喷以显色剂，加热至斑点显色清晰后置于紫外光下检视；优选地，所述显色剂为浓度为1％～5％的三氯化铝的乙醇溶液；优选地，所述检视为在波长为365nm的紫外光灯下检视。

15、[9].根据[1]～[8]任一项所述的薄层鉴别方法，其中，在所述薄层鉴别中，所述检视包括将供试品色谱图与对照药材色谱图进行比对，判断在rf值相同的一个或多个位置是否显示相同的荧光斑点；

16、优选地，

17、若在rf值为0.19～0.24的范围内显示荧光斑点，而rf值为0.59～0.65范围内不显示荧光斑点，则该供试品为地锦草(地锦)，

18、若在rf值为0.19～0.24的范围内不显示荧光斑点,而rf值为0.59～0.65范围内显示荧光斑点，则该供试品为地锦草(斑地锦)，

19、若在rf值为0.19～0.24及0.59～0.65范围内均不显示荧光斑点，则该供试品为小叶大戟；

20、进一步优选地，

21、若在rf值为0.30～0.35的范围内显示荧光斑点，而rf值为0.65～0.70范围内不显示荧光斑点，则该供试品为地锦草(地锦)饮片，

22、若在rf值为0.30～0.35及0.65～0.70范围内均不显示荧光斑点，则该供试品为地锦草(斑地锦)饮片，

23、若在rf值为0.30～0.35的范围内不显示荧光斑点，而rf值为0.65～0.70范围内显示荧光斑点，则该供试品为小叶大戟饮片。

24、[10].[1]～[9]任一项所述的薄层鉴别方法在区分地锦草药材及其相关产品的基原和/或伪品中的应用，其中，所述相关产品选自饮片、标准汤剂以及配方颗粒中的一种或多种；所述基原包括地锦草(地锦)和/或地锦草(斑地锦)；所述伪品为小叶大戟；优选地为在同时区分地锦草药材及其相关产品的基原和/或伪品中的应用。

25、发明的效果

26、本发明提供的区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，能够较好地展开并分离地锦草及其相关产品中极性较大的化合物，显色后斑点丰富、清晰、亮度较高，分离度较好，斑点符合中国药典规定的rf值范围，鉴别特征明显，结果易于判定，专属性较好；

27、此外，本发明提供的区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，与药典法和上述现有技术中采用的方法相比，操作简便快速，无需酸水解步骤，不破坏地锦草的化学成分，最大程度地呈现了地锦草的原型成分，并且对与对照药材的一致性进行评价，更加准确、科学；

28、进一步地，本发明提供的区分地锦草的基原和真伪的薄层鉴别方法，能够区分地锦草及其相关产品的基原和/或伪品，其中，相关产品包括药材、饮片、标准汤剂以及配方颗粒，基原包括地锦草(地锦)和/或地锦草(斑地锦)；所述伪品为小叶大戟，进一步地，本方法可以同时区分地锦草及其相关产品的基原和/或伪品，为建立地锦草及其相关产品的质量控制标准提供了基础。