一种针对性检测来自四川产地的金钗石斛药用茎的方法

本发明属于指纹图谱领域，具体涉及一种针对性检测来自四川产地的金钗石斛药用茎的方法。

背景技术：

1、金钗石斛(dendrobium nobile lindl)是多年生附生草本植物，具有广泛且卓越的药用价值。金钗石斛在临床上多用于治疗慢性咽炎、肠胃疾病、眼科疾病、血栓闭塞性疾病、糖尿病、关节炎、癌症等。金钗石斛主要分布于贵州赤水、习水以及四川泸州一带，其中尤其以四川泸州合江产的金钗石斛为佳，并已取得“合江金钗石斛”国家地理标志的保护。

2、然而，近年来石斛中药材产业出现种源混杂、以次充好的情况，难以针对性鉴定特定产区、特定采收季节、特定品种的石斛。

3、中药材指纹图谱是指中药材经过适当处理后，采用一定的分析手段和检测仪器得到的，能够标示该中药材特性的图谱。目前尚未出现针对川产道地产区药用金钗石斛茎的研究。已有研究中，虽有部分针对其他地区或者品种的石斛建立指纹图谱的研究，但普遍存在如下缺陷：1)色谱图中共有峰过少，不能建立金钗石斛的特征指纹图谱，易与铁皮石斛、叠鞘石斛等混用；2)区别川产道地产区与其他产区的金钗石斛；3)无法区分最佳采摘季节与其他季节采收的金钗石斛。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种针对性检测来自四川产地的金钗石斛药用茎的方法。

2、为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种石斛指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

3、(1)将待测石斛粉末与甲醇混合，超声处理后，取出、放冷、过滤；将滤液减压蒸干，残渣加甲醇溶解，过滤，摇匀，得供试溶液；

4、(2)吸取所述供试溶液，进行高效液相色谱检测，记录指纹图谱；

5、所述色谱检测的色谱条件为：色谱柱为c18反相色谱柱；柱温为30℃；检测波长为270nm；总流速为0.8ml/min。

6、优选的，步骤(1)中，第一次过滤后、滤液减压蒸干前，将第一次过滤得到的药渣及滤纸剪碎同置于锥形瓶中，与80％甲醇混合，超声处理后，取出、放冷、过滤，合并2次滤液，再将滤液减压蒸干。

7、优选的，步骤(2)的色谱条件中，流动相a为乙腈，流动相b为0.2％甲酸溶液。

8、优选的，步骤(2)的色谱条件中，供试溶液的上样量为10μl。

9、优选的，步骤(2)的色谱条件中，洗脱程序为：0～10min，流动相a占总流动相体积的5％-10％，余量为流动相b；10～35min，流动相a占总流动相体积的10％-20％，余量为流动相b；35～55min，流动相a占总流动相体积的20％-28％，余量为流动相b；55～60min，流动相a占总流动相体积的28％-80％，余量为流动相b；60～75min，流动相a占总流动相体积的80％-85％，余量为流动相b。

10、相应的，所述方法在鉴定来自四川产地冬季采收的金钗石斛中的应用。

11、相应的，利用所述方法获得的标准指纹图谱，所述标准指纹图谱包含15个特征峰。

12、相应的，所述标准指纹图谱在鉴定来自四川产地冬季采收的金钗石斛中的应用，将待测石斛按所述方法获得指纹图谱，与所述标准指纹图谱进行对比，同时具有所述标准指纹图谱15个特征峰的指纹图谱对应的石斛鉴定为来自四川产区、冬季采收的金钗石斛。

13、本发明具有以下有益效果：本发明构建了一种新的金钗石斛hplc指纹图谱构建方法，确定15个主要特征峰作为共有峰，首次建立了川产道地金钗石斛药材的hplc标准指纹图谱。该图谱能够分离川产道地金钗石斛药材中多数化学成分，特征性较强，可以较全面反映川产道地金钗石斛药材的化学成分信息，可高特异性鉴定川产道地金钗石斛药材的真伪。本发明提供方法简单、特征性成分保留完整、供试品溶液稳定；精密度高、重现性好。

技术特征：

1.一种石斛指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(1)中，第一次过滤后、滤液减压蒸干前，将第一次过滤得到的药渣及滤纸剪碎同置于锥形瓶中，与80％甲醇混合，超声处理后，取出、放冷、过滤，合并2次滤液，再将滤液减压蒸干。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(2)的色谱条件中，流动相a为乙腈，流动相b为0.2％甲酸溶液。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(2)的色谱条件中，供试溶液的上样量为10μl。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(2)的色谱条件中，洗脱程序为：0～10min，流动相a占总流动相体积的5％-10％，余量为流动相b；10～35min，流动相a占总流动相体积的10％-20％，余量为流动相b；35～55min，流动相a占总流动相体积的20％-28％，余量为流动相b；55～60min，流动相a占总流动相体积的28％-80％，余量为流动相b；60～75min，流动相a占总流动相体积的80％-85％，余量为流动相b。

6.权利要求1～5任意一项所述方法在鉴定来自四川产地冬季采收的金钗石斛中的应用。

7.利用权利要求1～5任意一项所述方法获得的标准指纹图谱，其特征在于：所述标准指纹图谱包含15个特征峰。

8.权利要求7所述标准指纹图谱在鉴定来自四川产地冬季采收的金钗石斛中的应用，其特征在于：将待测石斛按权利要求1～5任意一项所述方法获得指纹图谱，与权利要求7所述标准指纹图谱进行对比，同时具有所述标准指纹图谱15个特征峰的指纹图谱对应的石斛鉴定为来自四川产区、冬季采收的金钗石斛。

技术总结
本发明属于指纹图谱领域，具体涉及一种针对性检测来自四川产地的金钗石斛药用茎的方法。具体技术方案为：一种石斛指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：将待测石斛粉末与甲醇混合，超声处理后，取出、放冷、过滤；将滤液减压蒸干，残渣加甲醇溶解，过滤，摇匀，得供试溶液；吸取所述供试溶液，进行高效液相色谱检测，记录指纹图谱；所述色谱检测的色谱条件为：色谱柱为C<subgt;18</subgt;反相色谱柱；柱温为30℃；检测波长为270nm；总流速为0.8mL/min。本发明提供的方法操作简单、特征性成分保留完整、供试品溶液稳定；精密度高、重现性好。

技术研发人员：赵若茜,郑世刚,胡亚东,张恒
受保护的技术使用者：中国科学院成都生物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8