一种紫麻药材的HPLC指纹图谱建立方法与流程

本发明涉及一种紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，属于医药领域。

背景技术：

1、紫麻来源于葡萄科vitaceae蛇葡萄属ampelopsis michx.植物异叶蛇葡萄ampelopsis humulifolia bunge.var.heterophylla(thunb.)k.koch.和三裂蛇葡萄ampelopsis delavayana planch.的干燥根，主要分布于贵州、湖南、湖北、广西等地。为贵州省少数民族习用药材，具有清热补虚、散瘀通络、解毒等功效，常用于治疗产后心烦口渴、中风半身不遂、跌扑损伤等症。收载于2019版《贵州省中药材民族药材质量标准》(第二卷)，其仅对紫麻的基源、形状及显微鉴别等进行了记述，其质量标准水平较低，不利于该药材及相关制剂的质量控制。

2、本发明申请人经查阅整理相关文献，确定目前紫麻药材中主要含有黄酮类、酚类、低聚茋类和鞣质类等化学成分。鉴于此，以(+)-儿茶素、白藜芦醇、没食子酸、没食子酸甲酯为对照品，采用hplc波长切换法，按照中药注射剂指纹图谱研究的技术要求，通过供试品溶液制备、色谱条件等测定条件的优化，建立紫麻hplc指纹图谱方法，以对照品指认共有峰，构建紫麻药材对照指纹图谱，旨在为该药材的质量控制和质量评价提供科学的依据。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法。所建立hplc指纹图谱方法简便可靠、重现性较好、专属性强，可用于紫麻药材的质量控制，为该药材的质量标准研究奠定了理论基础。

2、本发明的技术方案：一种紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，所述指纹图谱鉴别方法是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：

3、(1)混合对照品溶液的制备：分别精密称取1mg没食子酸、2mg没食子酸甲酯、1mg白藜芦醇及20mg(+)-儿茶素于10ml容量瓶中，加60-80％甲醇溶液溶解，分别制成质量浓度为0.10、0.20、0.10、2.0mg/ml的单一对照品储备液，再精密吸取不同体积的单一对照品储备液，置于同一量瓶中，加60-80％甲醇溶液定容，分别制得没食子酸质量浓度为0.035-0.050mg/ml、没食子酸甲酯质量浓度为0.010-0.030mg/ml、白藜芦醇质量浓度为0.030-0.050mg/ml与(+)-儿茶素质量浓度为0.75-0.90mg/ml的混合对照品溶液，备用；

4、(2)供试品溶液的制备：取紫麻粉末0.9-1.1g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加入60-80％甲醇溶液20.0-30.0ml，回流提取1.5-2.5h，过滤，挥干滤液，滴加60-80％甲醇溶液溶解，并转入到容量瓶中，定容至5ml，充分振摇，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得；

5、(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：diamonsil spursil-c18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相a为0.1％磷酸水，流动相b为乙腈，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min；进样量为5-15μl；柱温为20-30℃；检测波长：0-25min为273nm；25-50min为278nm；50-71min为365nm；71-75min为340nm。

6、(4)将供试品溶液和混合对照品溶液分别在色谱条件下进行hplc测定，采用波长切换法，建立紫麻药材的hplc指纹图谱方法，构建紫麻药材hplc对照指纹图谱；

7、(5)采用国家药典委员会推荐的中药指纹图谱相似度评价软件2004a版(sa)方法建立紫麻药材之间的判别模型及相似度考察，进行相似度评价分析；

8、(6)运用spss19.0软件对样品进行系统聚类，以系统聚类法结合欧氏距离为测度进行分析，绘出树状图，再进行主成分分析，主成分的特征值及贡献率作为主成分选择的根据，最终选取能够表征紫麻药材化学指纹特征的特征指纹峰。

9、前述步骤(1)中，混合对照品溶液的制备：分别精密称取1mg没食子酸、2mg没食子酸甲酯、1mg白藜芦醇及20mg(+)-儿茶素于10ml容量瓶中，加65-75％甲醇溶液溶解，分别制成质量浓度为0.10、0.20、0.10、2.0mg/ml的单一对照品储备液，再精密吸取不同体积的单一对照品储备液，置于同一量瓶中，加65-75％甲醇溶液定容，分别制得没食子酸质量浓度为0.040-0.050mg/ml、没食子酸甲酯质量浓度为0.015-0.025mg/ml、白藜芦醇质量浓度为0.035-0.045mg/ml与(+)-儿茶素质量浓度为0.75-0.85mg/ml的混合对照品溶液，备用。

10、具体的说，前述步骤(1)中，混合对照品溶液的制备：分别精密称取1mg没食子酸、2mg没食子酸甲酯、1mg白藜芦醇及20mg(+)-儿茶素于10ml容量瓶中，加70％甲醇溶液溶解，分别制成质量浓度为0.10、0.20、0.10、2.0mg/ml的单一对照品储备液，再精密吸取不同体积的单一对照品储备液，置于同一量瓶中，加70％甲醇溶液定容，分别制得没食子酸质量浓度为0.043mg/ml、没食子酸甲酯质量浓度为0.019mg/ml、白藜芦醇质量浓度为0.040mg/ml与(+)-儿茶素质量浓度为0.83mg/ml的混合对照品溶液，备用。

11、前述步骤(2)中，供试品溶液的制备：取紫麻粉末0.95-1.05g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加入65-75％甲醇溶液25.0-30.0ml，回流提取1.5-2h，过滤，挥干滤液，滴加65-75％甲醇溶液溶解，并转入到容量瓶中，定容至5ml，充分振摇，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

12、具体的说，前述步骤(2)中，供试品溶液的制备：取紫麻粉末1.0g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加入70％甲醇溶液25.0ml，回流提取2h，过滤，挥干滤液，滴加70％甲醇溶液溶解，并转入到容量瓶中，定容至5ml，充分振摇，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

13、前述步骤(3)中，梯度洗脱条件如下：洗脱程序为0-22min，0％-5％b；22-25min，5％-8％b；25-40min，8％b；40-50min，8％-8.5％b；50-75min，8.5％-40％b。

14、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

15、1、构建紫麻药材的hplc对照指纹图谱，共标定了11个共有峰，采用对照品比较指认其中4个共有峰；相似度评价结果为0.62-0.94；hca分析以欧氏距离为10时，可分为三类；pca综合评价的结果与聚类分析相一致。

16、2、所建立hplc指纹图谱方法简便可靠、重现性较好、专属性强，可用于紫麻药材的质量控制，为该药材的质量标准研究奠定了理论基础。

技术特征：

1.一种紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，其特征在于：所述指纹图谱鉴别方法是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：

2.据权利要求1所述紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤(1)中，混合对照品溶液的制备：分别精密称取1mg没食子酸、2mg没食子酸甲酯、1mg白藜芦醇及20mg(+)-儿茶素于10ml容量瓶中，加65-75％甲醇溶液溶解，分别制成质量浓度为0.10、0.20、0.10、2.0mg/ml的单一对照品储备液，再精密吸取不同体积的单一对照品储备液，置于同一量瓶中，加65-75％甲醇溶液定容，分别制得没食子酸质量浓度为0.040-0.050mg/ml、没食子酸甲酯质量浓度为0.015-0.025mg/ml、白藜芦醇质量浓度为0.035-0.045mg/ml与(+)-儿茶素质量浓度为0.75-0.85mg/ml的混合对照品溶液，备用。

3.据权利要求2所述紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤(1)中，混合对照品溶液的制备：分别精密称取1mg没食子酸、2mg没食子酸甲酯、1mg白藜芦醇及20mg(+)-儿茶素于10ml容量瓶中，加70％甲醇溶液溶解，分别制成质量浓度为0.10、0.20、0.10、2.0mg/ml的单一对照品储备液，再精密吸取不同体积的单一对照品储备液，置于同一量瓶中，加70％甲醇溶液定容，分别制得没食子酸质量浓度为0.043mg/ml、没食子酸甲酯质量浓度为0.019mg/ml、白藜芦醇质量浓度为0.040mg/ml与(+)-儿茶素质量浓度为0.83mg/ml的混合对照品溶液，备用。

4.据权利要求1所述紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中，供试品溶液的制备：取紫麻粉末0.95-1.05g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加入65-75％甲醇溶液25.0-30.0ml，回流提取1.5-2h，过滤，挥干滤液，滴加65-75％甲醇溶液溶解，并转入到容量瓶中，定容至5ml，充分振摇，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

5.据权利要求4所述紫麻药材的hplc指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中，供试品溶液的制备：取紫麻粉末1.0g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加入70％甲醇溶液25.0ml，回流提取2h，过滤，挥干滤液，滴加70％甲醇溶液溶解，并转入到容量瓶中，定容至5ml，充分振摇，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

6.根据权利要求1所述紫麻药材的hplc指纹图谱鉴别方法，其特征在于：所述步骤(3)中，梯度洗脱条件如下：洗脱程序为0-22min，0％-5％b；22-25min，5％-8％b；25-40min，8％b；40-50min，8％-8.5％b；50-75min，8.5％-40％b。

技术总结
本发明公开了一种紫麻药材的HPLC指纹图谱鉴别方法。通过优化色谱条件，采用波长切换法，建立紫麻药材的HPLC指纹图谱方法，构建紫麻药材HPLC对照指纹图谱，并采用国家药典委员会推荐的中药指纹图谱相似度评价软件2004A版(SA)与聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)软件进行分析评价。所建立HPLC指纹图谱方法简便可靠、重现性较好、专属性强，可用于紫麻药材的质量控制，为该药材的质量标准研究奠定了理论基础。

技术研发人员：潘国吉,贺俊,王健,邓祯,陈园
受保护的技术使用者：黔西南州中医院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21