一种土壤磷组分含量的检测方法及其检测试剂盒

本发明属于土壤检测，具体涉及一种土壤磷组分含量的检测方法及其检测试剂盒。

背景技术：

1、土壤无机磷以正磷酸盐为主，焦磷酸盐、无机聚磷酸盐、偏磷酸盐等少量存在；又可分为矿物态、水溶态和吸附态三种形态，土壤无机磷约有99wt％以矿物态存在，难以被植物吸收利用；土壤溶液中的h2po4-和hpo42-，在全磷中占比小于0.1％，在土体中主要通过扩散作用迁移，是植物吸收利用的有效形态；吸附态磷是指通过范德华力、化学键等能吸附在粘土矿物、有机物等固相表面的磷，以阴离子交换吸附和配位吸附为主。

2、土壤磷化学分级是指用化学连续提取法表征土壤磷素状态。从土壤磷形态组分提出开始，世界各地学者针对其分析方法做出了大量的研究。酸性土壤无机磷分级方法，不能够很好的区分石灰性土壤中不同形态的钙磷酸盐ca-p，蒋柏潘和顾益初(顾益初,蒋柏藩.石灰性土壤无机磷分级的测定方法[j].土壤,1990,22(2):101-102.)提出石灰性土壤无机磷分析方法，在我国石灰性土壤磷形态研究中广泛应用，但该分析方法分级较粗，且忽略了土壤中有机磷组分，难以了解土壤磷的总体变化。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对现有问题，提供一种土壤磷组分含量的检测方法及其检测试剂盒。本发明的检测方法能够检测出各形态磷素含量，包括活性磷h2o-p、nahco3-pi、nahco3-po，中活性磷naoh-pi、naoh-po，稳定态磷hcl-p、residual-p以及全磷。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种土壤磷组分含量的检测方法，所述土壤磷组分包括活性磷、中活性磷、稳定态磷和全磷，所述活性磷包括h2o-p、nahco3-pi和nahco3-po，所述中活性磷包括naoh-pi和naoh-po，所述稳定态磷包括hcl-p和residual-p；包括以下步骤：

4、1)将待测土壤样品与水混合后，依次进行第一震荡和固液分离，分别得到第一浸提液和第一残余土壤；

5、将所述第一浸提液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a1和预定的第一标准曲线，得到h2o-p含量；

6、2)将所述第一残余土壤与nahco3溶液混合后，依次进行第二震荡和固液分离，分别得到第二浸提液和第二残余土壤；

7、将所述第二浸提液、水、硫酸溶液和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a2i和预定的第二标准曲线，得到nahco3-pi含量；

8、将所述第二浸提液、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第一高压消化，将得到的第一消化液、第一naoh溶液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a2t和预定的第三标准曲线，得到nahco3-pt含量，所述nahco3-pt含量与nahco3-pi含量的差值为nahco3-po含量；

9、3)将所述第二残余土壤与第二naoh溶液混合后，依次进行第三震荡和固液分离，分别得到第三浸提液和第三残余土壤；

10、将所述第三浸提液、水、硫酸溶液和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a3i和预定的第四标准曲线，得到naoh-pi含量；

11、将所述第三浸提液、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第二高压消化，将得到的第二消化液、第一naoh溶液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a3t和预定的第五标准曲线，得到naoh-pt含量，所述naoh-pt含量与naoh-pi含量的差值为naoh-po含量；

12、4)将所述第三残余土壤与hcl溶液混合后，依次进行第四震荡和固液分离，分别得到第四浸提液和第四残余土壤；

13、将所述第四浸提液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a4i和预定的第六标准曲线，得到hcl-p含量；

14、5)将所述第四残余土壤、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第三高压消化，将得到的第三消化液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a5和预定的第七标准曲线，得到residual-p含量；

15、6)将待测土壤样品、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第四高压消化，将得到的第四消化液、去离子水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a6和预定的第八标准曲线，得到全磷含量；

16、步骤6)的顺序号没有时间顺序的限定。

17、优选的，所述步骤1)中待测土壤样品和水的用量比为0.15g:7ml。

18、优选的，所述nahco3溶液的浓度为0.6mol/l。

19、优选的，所述步骤2)、3)、5)和6)中硫酸溶液的浓度均为0.9mol/l。

20、优选的，所述第一naoh溶液的浓度为10mol/l。

21、优选的，所述第二naoh溶液的浓度为0.3mol/l。

22、优选的，所述hcl溶液的浓度为1mol/l。

23、优选的，所述第一震荡、第二震荡、第三震荡和第四震荡的温度独立地为25～30℃，时间独立地为10～16h，转速均为60rpm。

24、优选的，所述第一高压消化、第二高压消化、第三高压消化和第四高压消化的温度均为121℃，压力均为15psi，时间均为90min。

25、本发明还提供了一种土壤磷组分含量的检测试剂盒，包括nahco3溶液、hcl溶液、硫酸溶液、钼锑抗显色剂、过硫酸钾和naoh溶液。

26、本发明提供了一种土壤磷组分含量的检测方法，所述土壤磷组分包括活性磷、中活性磷、稳定态磷和全磷，所述活性磷包括h2o-p、nahco3-pi和nahco3-po，所述中活性磷包括naoh-pi和naoh-po，所述稳定态磷包括hcl-p和residual-p；包括以下步骤：

27、1)将待测土壤样品与水混合后，依次进行第一震荡和固液分离，分别得到第一浸提液和第一残余土壤；

28、将所述第一浸提液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a1和预定的第一标准曲线，得到h2o-p含量；

29、2)将所述第一残余土壤与nahco3溶液混合后，依次进行第二震荡和固液分离，分别得到第二浸提液和第二残余土壤；

30、将所述第二浸提液、水、硫酸溶液和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a2i和预定的第二标准曲线，得到nahco3-pi含量；

31、将所述第二浸提液、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第一高压消化，将得到的第一消化液、第一naoh溶液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a2t和预定的第三标准曲线，得到nahco3-pt含量，所述nahco3-pt含量与nahco3-pi含量的差值为nahco3-po含量；

32、3)将所述第二残余土壤与第二naoh溶液混合后，依次进行第三震荡和固液分离，分别得到第三浸提液和第三残余土壤；

33、将所述第三浸提液、水、硫酸溶液和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a3i和预定的第四标准曲线，得到naoh-pi含量；

34、将所述第三浸提液、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第二高压消化，将得到的第二消化液、第一naoh溶液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a3t和预定的第五标准曲线，得到naoh-pt含量，所述naoh-pt含量与naoh-pi含量的差值为naoh-po含量；

35、4)将所述第三残余土壤与hcl溶液混合后，依次进行第四震荡和固液分离，分别得到第四浸提液和第四残余土壤；

36、将所述第四浸提液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a4i和预定的第六标准曲线，得到hcl-p含量；

37、5)将所述第四残余土壤、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第三高压消化，将得到的第三消化液、水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a5和预定的第七标准曲线，得到residual-p含量；

38、6)将待测土壤样品、过硫酸钾和硫酸溶液混合后进行第四高压消化，将得到的第四消化液、去离子水和钼锑抗显色剂混合后进行吸光度测定，根据得到的吸光度值a6和预定的第八标准曲线，得到全磷含量；

39、步骤6)的顺序号没有时间顺序的限定。

40、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

41、本发明提供的土壤磷组分含量的检测方法，依次采用水、nahco3溶液、naoh溶液和hcl溶液四种浸提剂，与土壤样品充分震荡提取不同形态的磷，用钼锑抗比色法进行含量的测定，能够检测出土壤中各形态磷素含量，包括活性磷h2o-p、nahco3-pi、nahco3-po，中活性磷naoh-pi、naoh-po，稳定态磷hcl-p、residual-p。本发明将待测土壤样品采用水浸提后，得到活性磷h2o-p；将水浸提后的残余土壤用nahco3溶液浸提，得到活性磷nahco3-pi、nahco3-po；再将nahco3溶液浸提后的残余土壤用naoh溶液浸提，得到中活性磷naoh-pi、naoh-po；然后将naoh溶液浸提后的残余土壤用hcl溶液浸提，得到稳定态磷hcl-p、residual-p；将土壤样品采用酸化的过硫酸钾高温消化后测定，得到土壤全磷含量。本发明的检测方法能够节省测试样品。

42、本发明还提供了一种土壤磷组分含量的检测试剂盒，形成标准化的试剂盒可大大提高样品测定的精度和工作效率，节省测定时间，节约检测成本。