藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法

本发明涉及化学成分分析，具体涉及藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法。

背景技术：

1、二十五味大汤丸，是藏族地区常用的藏药成方，藏药名汤钦尼埃日布，收录于一九九五年版的《中华人民共和国卫生部药品标准藏药》，属于藏药处方中的平息方，该方由红花、诃子、毛诃子、余甘子、藏木香、木香、波棱瓜子、渣驯膏、石榴子、榜嘎、角茴香、紫菀花、乌奴龙胆、豆蔻、木瓜、猪血粉、甘青青兰、骨碎补、芫荽、獐牙菜、兔耳草、秦艽花、绿绒蒿、水柏枝、巴夏嘎二十五味药组成，方中主药为红花，诃子，毛诃子，余甘子调和诸药。具有开胃、愈溃疡、止痛、治疗月经过多等之功能，现代临床常用于急慢性胃炎、浅表性胃炎、胃溃疡、胃酸、胃痛胃胀等胃肠功能紊乱疾病。

2、目前对于二十五味大汤丸的研究主要是临床用药研究及质量标准等方面，对其化学成分及药效物质基础研究未见有报道，为此，确定二十五味大汤丸的主要化学成分对其进一步的药效物质阐明和作用机制研究非常重要。

技术实现思路

1、本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，本发明采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法对二十五味大汤丸中的化学成分进行快速分析鉴定，为进一步研究二十五味大汤丸药效物质基础研究提供依据。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，包括以下步骤：

4、s1.制备供试样品溶液：将藏药二十五味大汤丸粉碎，过筛，采用甲醇溶液提取药丸中的活性成分，提取时料液比为0.2g：5ml，提取液离心取上清液，过膜，得到供试样品溶液；

5、s2.将所述供试样品溶液采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱法进行检测分析，检测条件包括：

6、色谱条件：采用acquity uplc beh c18 色 谱 柱，规格为2.1 mm×100 mm，1.7 μm；以0.1% 甲酸水溶液为流动相a，乙腈为流动相b进行梯度洗脱：正离子模式：0~1 min，5%b；1~4min，5%~10%b；4~10 min，10%~20%b；10~15 min，20%~24%b；15~ 19min，24%~27%b；19~24 min，27%~35%b；24~28min，35%~40% b；28~32min，40%~46% b；32~37min，46%~65% b；37~39min，65%~100% b；39~40min，100%~5%b；40~42min，5%b；负离子模式：0~1 min，5%b；1~7min，5%~20%b；7~12 min，20%~24%b；12~15 min，24%~30%b；15~18min，30%~35%b；18~28min，35%~60%b；28~34min，60%~75% b；34~37min，75%~100% b； 37~39min，100%~5% b；39~40min，5%b；流速 0.3 ml·min-1，柱温35 ℃，进样量2μl；以上浓度均为体积百分数；

7、质谱条件：采用esi电喷雾离子源，正、负离子模式下采集数据，2 种模式采集条件均为离子源温度350 ℃，毛细管温度320 ℃，喷雾电压4 kv，鞘气流速35 l·h-1，辅助气流速10 l·h-1，毛细管电压35 v，管透镜电压110 v，样品先进行全扫描，分辨率30000，扫描范围m/z 100~1250，二级质谱采用动态数据依赖性扫描dda，选取dda扫描出来的质谱峰值中丰度值为前六强的峰进行碰撞诱导解离cid碎片扫描，以离子阱打拿极检测；

8、s3.对质谱采集的数据进行分析，从而对藏药二十五味大汤丸的成分进行分析鉴定。

9、本发明中，优选地，步骤s1中采用体积浓度为50%的甲醇溶液进行提取。

10、本发明中，优选地，步骤s1中采用超声提取的方式进行提取，提取时间40分钟。

11、本发明中，优选地，步骤s1中所述的过膜为过0.22μm微孔滤膜。

12、本发明中，优选地，步骤s1中的离心为于13000rpm离心10min。

13、本发明中，优选地，步骤s3中所述的分析鉴定方法为：首先，查阅文献获得关于藏药二十五味大汤丸化学成分的数据，将关于化学成分的化合物名称、分子式、相对分子量及碎片信息输入tracefinder软件以建立筛查数据库；其次，将质谱采集的数据导入tracefinder软件进行自动筛查匹配；最后，结合相关文献对化合物的精确质量数和质谱裂解碎片及特征碎片离子进行结构推断，确定最终筛选结果。

14、由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

15、本发明首次通过使用uplc-ltq-orbitrap-ms技术对二十五味大汤丸的主要化学成分进行了快速分析，通过对有效成分提取条件、色谱条件和质谱条件进行优化，在正负离子模式下建立了一种高效分离多种有效成分的方法，并结合tracefinder数据分析处理软件和文献报道质谱裂解规律及碎片离子进行比对，共鉴定出96个化合物，包括有机酸类、黄酮类、苯丙素类、萜类及三萜类、鞣质类等多种类型的化合物，同时进行了成分与对应药材的归属。本发明使用 uplc-ltq-orbitrap-ms 技术，系统、准确地对二十五味大汤丸中的化学成分进行表征，为进一步开展该方的药代动力学和药效物质基础研究提供了数据支持，为临床应用奠定了理论基础。

技术特征：

1.藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于：步骤s1中采用体积浓度为50%的甲醇溶液进行提取。

3.根据权利要求1所述的藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于：步骤s1中采用超声提取的方式进行提取，提取时间40分钟。

4.根据权利要求1所述的藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于：步骤s1中所述的过膜为过0.22μm微孔滤膜。

5.根据权利要求1所述的藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于：步骤s1中的离心为于13000rpm离心10min。

6.根据权利要求1所述的藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，其特征在于：步骤s3中所述的分析鉴定方法为：首先，查阅文献获得关于藏药二十五味大汤丸化学成分的数据，将关于化学成分的化合物名称、分子式、相对分子量及碎片信息输入tracefinder软件以建立筛查数据库；其次，将质谱采集的数据导入tracefinder软件进行自动筛查匹配；最后，结合相关文献对化合物的精确质量数和质谱裂解碎片及特征碎片离子进行结构推断，确定最终筛选结果。

技术总结
本发明属于化学成分分析技术领域，提供藏药二十五味大汤丸中多成分的检测方法，包括以下步骤：S1.制备供试样品溶液：将藏药二十五味大汤丸粉碎，过筛，采用甲醇溶液提取药丸中的活性成分，提取液离心取上清液，过膜，得到供试样品溶液；S2.将所述供试样品溶液采用超高效液相色谱‑线性离子阱‑静电场轨道阱质谱法进行检测分析；S3.对质谱采集的数据进行分析，从而对藏药二十五味大汤丸的成分进行分析鉴定。本发明一次性共鉴定出96个化合物，包括有机酸类、黄酮类、苯丙素类、萜类及三萜类、鞣质类等多种类型的化合物；为进一步开展该方的药代动力学和药效物质基础研究提供了数据支持，为临床应用奠定了理论基础。

技术研发人员：严志宏,许金娣,罗珍,袁恩,张宁方,官美聪
受保护的技术使用者：江西中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15