焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的构建方法和质量控制方法与流程

本发明涉及中药检测，具体涉及一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的构建方法和质量控制方法。

背景技术：

1、白术为菊科植物白术(atractylodes macrocephala koidz.)的干燥根，白术主要含有挥发油、内酯类成分、苷类成分、多糖以及氨基酸等化合物，具有保肝、调节胃肠运动、调节便秘、调节溃疡性急肠炎、抗炎、抗肿瘤、降血糖、调节免疫力等药理作用。

2、白术历来炮制入药，因生品含挥发油量较高而显燥性，有伤阴之弊。因此，常用炒制法来去其燥性，2005年版中国药典收载了土炒白术、蜜麸炒白术2种规格，一些地区则常用焦白术(清炒白术)。白术生用可健脾燥湿、利水消肿，多用于水湿内停之痰饮或水气外溢之水肿，以及风湿痹痛。焦白术缓和燥性，增强焦香健脾益气功能。白术炮制后的功效的变化，在于化学成分在组成和含量有别于生白术。焦白术的炮制方法主要是炒制法。白术作为常用药，其药材的hplc指纹图谱已经有报道。然而，白术药材、白术饮片制备成焦白术饮片之后，化学成分发生改变，并且白术中含有大量的脂溶性成分(白术内酯ⅰ和苍术酮等)，该类型成分并不能转移和传递到传统汤剂中，因此，目前文献报道的方法并不适用于配方颗粒和标准汤剂(冻干粉)，不具有针对性，质控检测不全面。

3、中药配方颗粒是由单味中药饮片经水加热提取、分离、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒，在中医药理论指导下，按照中医临床处方调配后，供患者冲服使用，具备传统汤剂的基本属性。标准汤剂，是以中医理论为指导、临床应用为基础，经标准化工艺制备而成的单味中药饮片水煎剂，用于标准化临床用药，保障用药的准确性和剂量的一致性。标准汤剂是连接传统中药饮片和配方颗粒的“桥梁”，为控制配方颗粒终端产品的质量提供了参照物。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的构建方法和质量控制方法，对焦白术配方颗粒剂和标准汤剂的色谱分离效果好，可以更具针对性、全面的对焦白术配方颗粒和标准汤剂进行质量评价和质量控制。

2、为此，本发明提供了如下的技术方案：

3、一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法，采用高效液相色谱法检测，色谱条件为：

4、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a、以0.05-0.15％v/v磷酸溶液为流动相b，梯度洗脱程序包括：

5、0-10min，流动相a和流动相b的体积比例为0％:100％；

6、10-11min，流动相a和流动相b的体积比例为0％:100％→6％:94％；

7、11-19min，流动相a和流动相b的体积比例为6％:94％→10％:90％；

8、19-21min，流动相a和流动相b的体积比例为10％:90％→18％:82％；

9、21-23min，流动相a和流动相b的体积比例为18％:82％→25％:75％；

10、23-25min，流动相a和流动相b的体积比例为25％:75％→50％:50％；

11、25-35min，流动相a和流动相b的体积比例为50％:50％→65％:35％。

12、可选的，所述色谱条件包括如下条件中的至少一项：

13、1)、检测波长0～12分钟为284nm，12～27分钟为325nm，27～35分钟为220nm；

14、2)、流速为0.27-0.33ml/min；

15、3)、柱温为36-44℃；

16、4)、色谱柱的柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm；

17、5)、进样量为1μl。

18、可选的，还包括供试品溶液的制备方法，包括：

19、取供试品，加入溶剂提取，滤过，取续滤液，即得；

20、可选的，所述溶剂为甲醇水溶液，甲醇水溶液中甲醇的体积百分比为30v/v％-70v/v％，可选的为30v/v％；

21、可选的，所述供试品和所述溶剂的质量体积比为(0.5-2):5-20，可选的，所述供试品和所述溶剂的质量体积比为1.5:10，比例关系为g/ml；

22、可选的，所述提取为超声提取，提取时间为15-60分钟；可选的，为30分钟；

23、可选的，取供试品，研细，取0.5-4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加30v/v％-70v/v％甲醇5-20ml，密塞，超声处理，功率200-400w，频率40khz，15-60分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

24、可选的，取供试品，研细，取1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加30v/v％甲醇10ml，密塞，超声处理，功率300w，频率40khz，30分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

25、可选的，还包括参照物溶液的制备方法，包括：

26、对照药材参照物溶液制备：取焦白术对照药材，加入溶剂提取，滤过，取续滤液，即得；

27、和/或，对照品参照物溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品、白术内酯ⅲ对照品加入溶剂制成每1ml各对照品分别含10μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。

28、可选的，对照药材参照物溶液制备：所述溶剂为水或甲醇溶液；

29、和/或，提取步骤中，先加入水加热回流提取30min，离心，取上清液减压浓缩，残渣加30v/v％甲醇水溶液超声提取30分钟，滤过，取续滤液；

30、和/或，所述焦白术对照药材和水的质量体积比为1:25，比例关系为g/ml；

31、和/或，所述焦白术对照药材和30v/v％甲醇溶液的质量体积比为1:5，比例关系为g/ml；

32、可选的，对照药材参照物溶液制备：取焦白术对照药材2g，置具塞锥形瓶中，加水50ml，加热回流30min，离心，取上清液减压浓缩得到残渣加30v/v％甲醇10ml，超声处理，功率300w，频率40khz，30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

33、可选的，对照品参照物溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品、白术内酯ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各对照品分别含10μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。

34、一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的含量测定方法，包括：

35、取供试品溶液，分别采用所述的焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法中的高效液相色谱法进行检测。

36、所述的焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法或所述的焦白术配方颗粒和标准汤剂的含量测定方法在焦白术标准汤剂和配方颗粒的质量检测中的应用。

37、一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的质量检测方法，包括按照所述的标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法获得供试品的特征图谱，并采用该特征图谱与对照特征图谱进行比对的步骤；

38、所述对照特征图谱为使用至少一批焦白术标准汤剂和配方颗粒的标准品按照所述的焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法获得的特征图谱拟合得到。

39、可选的，所述对照特征图谱包括7个特征峰，峰2为5-羟甲基糠醛，峰5为绿原酸，峰6为白术内酯ⅲ；以峰2为第一参比峰s1，峰1与峰s1的相对保留时间在规定值±10％范围之内，峰1的规定值为0.57；以峰5为第二参比峰s2，峰3～峰4与峰s2的相对保留时间在规定值±10％范围之内，峰3规定值为0.83，峰4规定值为0.91；以峰6为第三参比峰s3，峰7与峰s3的相对保留时间在规定值±10％范围之内，峰7规定值为1.09。

40、可选的，峰2为对应5-羟甲基糠醛，峰3对应新绿原酸，峰5为对应绿原酸，峰6为对应白术内酯ⅲ，峰7为对应白术内酯ii。

41、本发明技术方案，具有如下优点：

42、1、本发明提供的一种焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱的检测方法，采用高效液相色谱法检测，色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a、以0.05-0.15％v/v磷酸溶液为流动相b，梯度洗脱程序包括：0-10min，流动相a和流动相b的体积比例为0％:100％；10-11min，流动相a和流动相b的体积比例为0％:100％→6％:94％；11-19min，流动相a和流动相b的体积比例为6％:94％→10％:90％；19-21min，流动相a和流动相b的体积比例为10％:90％→18％:82％；21-23min，流动相a和流动相b的体积比例为18％:82％→25％:75％；23-25min，流动相a和流动相b的体积比例为25％:75％→50％:50％；25-35min，流动相a和流动相b的体积比例为50％:50％→65％:35％；采用上述方法检测焦白术标准汤剂和配方颗粒的特征图谱，色谱峰分离效果良好，特征峰中有5个已知成分，可同时测定5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、白术内酯ⅲ与白术内酯ii的含量，能够全面地、快速地检测焦白术配方颗粒和标准汤剂中有效成分及其含量。

43、进一步的，上述方法是基于焦白术标准汤剂和配方颗粒设计的，对于焦白术配方颗粒剂和标准汤剂质量控制更具有针对性和全面性，可以反映焦白术配方颗粒剂和标准汤剂的主要化学成分以及有效成分的特点，从而可以利用上述方法对焦白术配方颗粒和标准汤剂进行全面质量检测和整体质量控制，为焦白术配方颗粒和标准汤剂提供更优良的质量评价和质量控制。